pBIN438-CMV △Rep表达载体的构建及其在根癌农杆菌中的转化

用PCR方法扩增黄瓜花叶病毒部分复制酶基因(CMV△Rep),连接到PUCm-T载体上构建成克隆载体PUCm-T-CMV△Rep。用Bam HⅠ和SalⅠ分别对克隆载体PUCm-T-CMV△Rep和植物表达载体p BIN438进行双酶切,获得目的片段和线性质粒。在T4 DNA连接酶的作用下进行定向连接,构建成植物表达载体p BIN438-CMV△Rep。采用Ca Cl2冻融法将重组子导入根癌农杆菌LBA4404。经PCR和双酶切鉴定,表明重组质粒p BIN438-CMV△Rep已成功导入根癌农杆菌中。     

MDR1真核表达载体的构建及鉴定

采用PCR技术扩增MDR1基因全长序列及胞外区约1kb片段,并定向克隆到pcDNA3质粒载体CMV启动子序列下游的Bam HⅠ和XhoⅠ限制性内切酶酶切位点之间重组体经转化E．coli JM109后可大量扩增,提取该重组体进行限制性内切酶分析,得到预期的目的片段,并且以重组体为模板,用特异性引物可扩增出MDR1基因的1kb片段?     

耐盐柳树抗虫基因Cry3A重组表达载体的构建

将苏云金芽孢杆菌Cry3A类抗虫基因经Bam HⅠ、SalⅠ双酶切后与植物表达载体p CAMBIA1304-C6连接,构建p CAMBIA1304-C6-Cry3A重组表达载体,将其转化到农杆菌LBA4404中,同时进行双酶切、测序及PCR鉴定。结果表明:双酶切及测序产物与预期扩增片段相符,重组表达载体p CAMBIA1304-C6-Cry3A构建成功;农杆菌LBA4404中含有重组质粒,成功构建了Cry3A农杆菌基因工程菌株。     

浸麻芽孢杆菌β-葡聚糖酶基因在大肠杆菌中的表达

将含浸麻芽孢杆菌β-葡聚糖酶基因的重组克隆质粒进行亚克隆,用Bam HⅠ和XhoⅠ双酶切后,与相同酶切的表达载体pET-30a相连接,构建重组表达质粒,在大肠杆菌BL21中表达.蛋白质电泳结果表明在25.0 kD处有表达带,酶活力达60.4 U/mL,为出发菌的30多倍.酶特性研究表明:该酶的最适温度为50℃,最适pH为5.0～7.0;在50℃以下及在不同的pH下(pH 3.0～9.0)处理后较稳定.     

口蹄疫病毒L基因真核表达载体的构建及表达

采用RT-PCR方法,从口蹄疫病毒中扩增出长约600 bp的核苷酸片段.纯化后与载体pMD18-Tsimple连接,重组质粒经PCR鉴定及DNA测序,结果表明克隆的片段为口蹄疫病毒L基因.将质粒pMD18-L与表达载体pEGFP-N1分别用BamHⅠ+XhoLⅠ双酶切,将所获目的基因与带有酶切位点的载体连接,经酶切、PCR鉴定及DNA测序,结果表明重组表达质粒pEGFP-L构建成功.将转染的BHK-21细胞,经荧光鉴定和RT-PCR检测,证实L基因在BHK-21细胞中得到表达.     

拟南芥At4g12500基因原核表达载体的构建

[目的]构建拟南芥At4g12500基因的原核表达载体。[方法]以野生型Col-0拟南芥基因组DNA为模板,采用PCR技术扩增出At4g12500基因编码序列,用BamHⅠ和XhoⅠ对目的片段进行双酶切后,与BamHⅠ和XhoⅠ双酶切后的pET-28a质粒连接,以得到原核表达载体。[结果]该试验成功地构建了pET28a-At4g12500原核表达载体,并已转化至E.coil BL21(DE3)表达菌株中。[结论]为后续At4g12500基因的表达与功能分析奠定基础。     

鹅细小病毒延边株VP3基因真核表达质粒构建

用碱裂解法对鹅细小病毒延边分离株进行GPV基因组DNA提取.根据已发表的鹅细小病毒VP3基因序列,设计1对含有EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ酶切位点的引物,以GPV基因组DNA为模板,应用PCR扩增出VP3基因片段,将VP3基因与克隆载体pMD 18-T连接,转化到感受态大肠杆菌BL21中进行克隆.用EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ双酶切该片段并回收该片段,将此基因片段克隆至相同酶切回收后的pVAXI真核表达载体中,获得重组质粒pVAXI-VP3,经PCR鉴定,限制性内切酶双酶切分析和克隆片段序列测定比较,证实了重组质粒的正确性.     

表达小反刍兽疫病毒H基因的山羊痘病毒通用转移载体的构建及鉴定

［目的］研制小反刍兽疫羊痘活载体疫苗。［方法］利用PCR技术扩增小反刍兽疫病毒H基因,克隆到pGEM-T easy载体,Nhe Ⅰ和Hin-d Ⅲ双酶切重组质粒,将目的片段插入到真核表达载体pEGFP-N1-P7.5中,得到重组载体pEGFP-N1-P7.5-H,重组载体Hin-d Ⅲ、NheⅠ双酶切片段EGFP-P7.5 H平末端连接到KpnⅠ 酶切后的载体pUC119-TK中,得到通用转移载体pUC119-TK-EGFP-P7.5-H。［结果］经酶切鉴定及PCR扩增检测,表明构建载体正确。pUC119-TK-EGFP-P7.5-H转染羊痘病毒感染的BHK21细胞,48 h后报告基因表达。［结论］该研究为研制小反刍兽疫基因工程活载体疫苗奠定基础。     

绿脓杆菌外毒素A与人组蛋白H4嵌合蛋白基因克隆及其原核表达载体的构建

设计引物以pCDPT2质粒(含PEA全序列)为模板亚克隆获得PEA功能区Ⅰa及功能区Ⅱ基因片段(1100 bp); 提取人染色体DNA作为模板,利用一对设计引物扩增获得了人组蛋白H4基因片段(316 bp);将两基因片段连接,构建了融合基因中间载体pMD-18T-PEA-H4;融合基因经NcoⅠ及XhoⅠ酶切,以正确阅读框架插入相同酶切的pET-28A中,经酶切分析及PCR扩增检测,筛选到阳性克隆,其质粒测序结果表明成功地构建了毒性基因缺失的PEA与人组蛋白H4融合基因的原核表达载体,为进一步表达并获得大量的融合蛋白奠定了基础。     

山东农村全面小康社会建设的实证研究

农村全面小康社会的建设是山东省2012年全面建成小康社会的重要内容。本文在对山东农村全面小康社会实现程度进行实证研究的基础上,认为山东农村全面建设小康社会的根本制约因素是城乡二元结构,统筹城乡经济社会发展是加快山东农村全面小康社会建设的终极出路。     

区域生态经济建设指标体系设计与实证

面向区域全面小康社会建设,采用层次分析法,建立以经济发展、社会进步、资源节约、生态良好、环境改善为准则层的区域生态经济建设指标体系,并对广西省大新县生态经济建设规划进行评价。结果表明:随着生态经济建设的不断推进,大新县生态经济建设综合水平将不断提升,到2015年后呈明显加速趋势,预测到2025年基本达到小康水平;现阶段建设规划把建设重点放在经济、社会发展和资源节约等薄弱环节,较好地体现了区域经济、社会和生态环境全面协调发展的可持续发展理念;个别指标与总体发展水平差距较大,在今后建设中须加以优化。     

从文化的视角看农村全面建设小康社会的实现

在我国全面建设小康社会的历程中,农村小康是全面建设小康社会的关键。只有发展好农村,才能保证全面建设小康社会目标的顺利实现。而在农村小康建设过程中,文化落后是其制约的关键性因素。文化落后致使农民整体素质偏低,导致农业和农村现代化水平低。因此,要以农村文化发展来促进农村全面发展,以农村全面小康促进国家小康。要着力培养知识型农民,完善农村文化政策和文化设施。     

我国农业技术补贴政策及其实施效果研究——以秸秆还田补贴为例

农业技术是促进农业发展的不竭动力,农业技术补贴政策的实施及其实施效果问题备受关注。本研究以河南省和江苏省农村的实地调研数据资料为依据,系统分析了农业技术及其补贴政策的实施现状,并运用Logit模型分析补贴政策的实施效果。研究表明:农户年龄、受教育程度和秸杆还田机械质量等变量在1%显著性水平下差异显著;均和农业技术的采用呈正相关关系,而补贴变量在统计上并不显著。本研究就加强农业技术补贴政策和农业技术的宣传力度、完善农业技术和技术补贴政策、加强技术指导等方面提出了建议。     

数字经济助力乡村振兴的现实困境与实现路径

在全面建成小康社会的过程中,农业、农村、农民是必须打赢的攻坚战,数字经济在三农建设中关系到农村经济的进步与结构完善。本文通过分析数字经济与农村经济的发展现状与历程,结合二者之间内在的联系,探究数字经济与农村经济的互助发展模式。本文将通过与农村金融这一概念相互区别呈现,数字经济是关系到农村经济发展、三农发展、建设小康社会的重要一环,数字经济的发展对我国农村经济结构的嬗变中呈现不同的特征,这些也将会在今后的乡村振兴战略中发挥重要的作用。     

重庆三峡库区全面建设小康社会评价指标体系的探讨

在正确理解全面建设小康社会内涵的基础上,参考国内专家关于全面建设小康社会评价指标体系的研究成果,提出重庆三峡库区全面建设小康社会应涵盖经济水平、生活质量、人口素质、生存环境4个方面的全面发展。结合重庆三峡库区经济社会发展特征,建构了重庆三峡库区全面建设小康社会的评价指标体系,并采用层次分析法(AHP)对重庆三峡库区全面建设小康社会的实现程度作了分析评价。     

“寿光模式”对传统农耕文化的传承与创新

“寿光模式”是蔬菜生产产业化带动农业产业化发展的成功典型,其发展过程调动了农业生产链全要素的优化配置和系统综合发展,实现了农村产业兴旺、百姓生活富裕的根本目的,取得了生态宜居、乡风文明、治理有效的综合效益。从传统农耕文化的传承发展提升视阈研究“寿光模式”,分析其形成之因、发展之理和传承创新之处,对构建现代农业产业体系、生产体系、经营体系,深入实施乡村振兴战略具有积极的参考借鉴价值。     

农业信息化与农村全面小康建设

本文针对“十六”大提出的全面建设小康社会的要点,阐述了农业信息化与农村全面小康的内涵,分析了农业信息化对农村全面小康建设的重要意义。文章认为发展农业信息化是农村全面小康建设的重要途径,并有针对性地提出了提高农业信息化水平、促进农村全面小康建设的具体措施。     

运用系统科学思想优化县域经济系统结构水平的研究

作为国民经济的基础性单元,县域经济在全面建设小康社会和社会主义新农村的进程中被赋予了新的时代内涵,受到社会各界的广泛关注,发展县域经济已成为解决"三农"问题的新思维。县域是农村的集中区域,合理的经济结构是提高县域经济效益的核心。以系统科学思想为视角,全面审视、论证提升县域经济结构优化水平的方法和途径,为县域经济的良性发展提供新思路和信息支持。     

区域可持续发展的社会动态人口承载能力模型研究

作为第一人口大国,人口承载能力一直是研究热点。分析了现有研究成果的局限性,在此基础上,综合考虑经济、社会、资源、环境以及人口系统本身的演变,给出了人口承载能力的综合评价框架。考虑人的多层次需求的基础上,参照小康科学指标体系和人文发展报告,给出综合评价框架中各个信息的代表性指标,建立了开放区域动态的人口承载能力模型以及使用模型进行人口预测的框架。最后以上海为例,用主成分分析法给出了简化模型的系数。