许氏平鲉精子超微结构及超低温冷冻对其形态的影响

为进一步探索卵胎生许氏平鲉Sebastes schlegelii繁殖生物学特性,探究超低温冷冻技术对精子形态结构的影响,对许氏平鲉(体质量500～750 g)鲜精和超低温冷冻后精子的超微结构进行了研究。结果表明:经扫描、透射电镜观察,发现精子在变态过程中细胞核纵向增长,细胞质浓缩,成熟精子头部呈叶片状,无顶体;线粒体多向尾部基部集中,为精子运动供能,鞭毛由线粒体及轴丝组成且具侧鳍结构;精子经冷冻保存后,虽有少部分形态正常,但多数出现尾部断裂、部分线粒体丢失及线粒体内膜嵴和细胞膜受损等现象。研究表明,卵胎生许氏平鲉精子的头部形状和线粒体数与其他卵生鱼类有较为显著的差别,超低温冷冻后,精子形态结构受到较大损伤,推测多数精子受精活力减弱或失去受精能力。     

超低温冷冻对德国牧羊犬精子超微结构及顶体酶类活性的影响

为探讨超低温冷冻对德国牧羊犬精子超微结构及顶体酶类活性的影响,对冷冻前后德国牧羊犬精子采用扫描电镜和透射电镜观察超微结构变化;采用改良明胶底膜法、改良BNPNA法、磷酸苯二钠法对精子透明质酸酶、顶体酶和酸性磷酸酶活性进行研究。结果表明:鲜精和冻前精子形态变化不显著,而超低温冷冻后精子头部、颈部和尾部发生形态变化的精子数极显著高于鲜精和冻前精子;超低温冷冻后德国牧羊犬精子3种顶体酶活性极显著降低;超低温冷冻后德国牧羊犬精子3种顶体酶活性与精子活率和顶体完整率呈正相关(P0.01),与畸形率呈负相关(P0.05)。     

光照强度对许氏平鲉群体结构及行为的影响

为了探究许氏平鲉群体在不同光照强度条件下的响应机制,试验设置3种光照强度（0lx、105lx、620lx）,观察不同光照条件下许氏平鮋群体的自发游泳行为及群体结构的变化情况。结果表明：0lx光照强度条件下,许氏平鲉的平均速度为4.4/s;105lx光照强度条件下,许氏平鲉的平均速度为4.9cm/s;620lx光照强度条件下,许氏平鲉的平均速度为6.7cm/s。620lx组平均速度显著大于其他2组（P<0.05）,0lx光照强度许氏平鲉个体最邻近距离主要分布在0～5cm,而620lx光照强度条件下许氏平鲉最邻近距离主要分布在10～15cm。0lx和105lx光强下许氏平鲉个体最邻近距离主要分布在0～10cm。许氏平鲉在0lx条件下,群体的凝聚力最高,显著高于其他2组（P<0.05）,0lx组的极性也显著高于其他2组（P<0.05）。研究结果对于今后海洋牧场中鱼类行为的有效控制方面提供了参考依据。     

许氏平鲉微卫星标记的开发及评价

采用磁珠富集法筛选具多态性的许氏平鲉微卫星标记,并用一个野生群体对其多态性进行了评价。三引物PCR法筛选出58个阳性克隆进行了测序,共得到47个含微卫星核心的DNA序列,筛选出15对具有多态性的微卫星引物。所有位点上共得到66个等位基因片段,每个位点的观测等位基因数(A)为2~14个,平均等位基因数为4.4,观测杂合度(Ho)、期望杂合度(He)范围分别为0.062 5~0.968 8、0.061 5~0.929 1。每个位点的多态信息含量(PIC)显示,有6个位点表现出高度或中度多态。经Bonferroni校正后,HJ2-32、HJ4-27、HJ4-45和HJ4-47四个位点的等位基因频率显著偏离了Hardy-Weinberg平衡。连锁不平衡检测表明,各位点间无连锁不平衡现象。     

许氏平鲉消化管上皮细胞及消化腺组织学和组织化学

对许氏平鲉Sebastes schlegeli(Hilgendorf)消化管中的上皮细胞及消化腺进行了组织学及组织化学的研究.经光学显微镜和扫描电镜观察,口咽腔、舌和食道黏膜表面为复层扁平细胞,含有杯状细胞和味蕾,上皮细胞表面具微脊(微皱襞).食道下段复层扁平细胞中夹有单层柱状细胞.胃黏膜表面为单层柱状细胞,细胞表面具顶板.胃贲门和盲囊部有丰富胃腺,盲囊底部和幽门部无胃腺.肠黏膜表面为单层柱状细胞,小肠段杯状细胞丰富,幽门盲囊上皮细胞结构同小肠.另外,还研究了肝脏、胰腺和胆囊的结构.     

超低温冷冻对俄罗斯鲟精子抗氧化酶活性的影响

为了探讨超低温(-196℃)对精子的损伤机理,采用试剂盒测定了冷冻前后俄罗斯鲟精浆和精子中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)和谷胱甘肽还原酶(GR)等酶活性。结果表明,经过超低温冷冻保存后,俄罗斯鲟精子活力下降,添加抗冻保护液冷冻后的精浆中SOD、CAT、GSH-PX活性较鲜精组显著升高(P<0.05),较未添加保护液组显著降低(P<0.05),GR的活性则显著低于鲜精组(P<0.05),但显著高于未添加保护液组(P<0.05);添加抗冻保护液冷冻后的精子中SOD、CAT、GSH-PX活性较鲜精组显著降低(P<0.05),较未添加保护液组显著升高(P<0.05),GR活性则显著高于鲜精组(P<0.05),但显著低于未添加保护液组(P<0.05)。这说明超低温冷冻对俄罗斯鲟精子的抗氧化系统产生了较大影响,成为影响精子活力的一个重要原因。     

超低温冷冻对俄罗斯鲟精子抗氧化酶活性的影响

为了探讨超低温（-196℃）对精子的损伤机理,采用试剂盒测定了冷冻前后俄罗斯鲟精浆和精子中超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH—PX）和谷胱甘肽还原酶（GR）等酶活性。结果表明,经过超低温冷冻保存后,俄罗斯鲟精子活力下降,添加抗冻保护液冷冻后的精浆中SOD、CAT、GSH—PX活性较鲜精组显著升高（P〈0．05）,较未添加保护液组显著降低（P〈0．05）,GR的活性则显著低于鲜精组（P〈0．05）,但显著高于未添加保护液组（P〈0．05）;添加抗冻保护液冷冻后的精子中SOD、CAT、GSH—PX活性较鲜精组显著降低（P〈0．05）,较未添加保护液组显著升高（P〈0．05）,GR活性则显著高于鲜精组（P〈0．05）,但显著低于未添加保护液组（P〈0．05）。这说明超低温冷冻对俄罗斯鲟精子的抗氧化系统产生了较大影响,成为影响精子活力的一个重要原因。     

300Hz脉冲音对许氏平鲉幼鱼的驯化效果

采用300 Hz脉冲波断续音在实验室水槽中对许氏平鲉Sebastes schlegeli幼鱼进行音响驯化试验。结果表明:在驯化第15天开始聚集时间减小到2 s,之后到20 d均无大变化;聚集时间从第5天开始整体呈递减趋势,驯化第16天,聚集时间达到最短(16 s);聚集率则逐日增加,驯化第18天,聚集率达到最高,为91%,平均聚集率为83.9%;音响驯化结束10 d后再次放声,许氏平鲉开始聚集时间为3 s,聚集时间为44 s,聚集率为86.3%。由此可见,300 Hz脉冲波断续音对许氏平鲉有明显的驯化作用;许氏平鲉对驯化声音记忆力超过10 d且效果显著。     

300Hz脉冲音对许氏平鲉幼鱼的驯化效果

采用300 Hz脉冲波断续音在实验室水槽中对许氏平鲉Sebastes schlegeli幼鱼进行音响驯化试验。结果表明：在驯化第15天开始聚集时间减小到2 s,之后到20 d均无大变化;聚集时间从第5天开始整体呈递减趋势,驯化第16天,聚集时间达到最短（16 s）;聚集率则逐日增加,驯化第18天,聚集率达到最高,为91%,平均聚集率为83.9%;音响驯化结束10 d后再次放声,许氏平鲉开始聚集时间为3 s,聚集时间为44 s,聚集率为86.3%。由此可见,300 Hz脉冲波断续音对许氏平鲉有明显的驯化作用;许氏平鲉对驯化声音记忆力超过10 d且效果显著。     

鲇精子超微结构及pH、温度对其精子活力的影响

为了解鲇Silurus asotus精子的结构特征,应用扫描电镜和透射电镜技术,对体质量为320⁵50 g的鲇成熟精子结构进行了观察。结果表明:鲇精子由头和尾两部分组成,无明显颈部;精子头部近球形,直径为1.85550 g的鲇成熟精子结构进行了观察。结果表明:鲇精子由头和尾两部分组成,无明显颈部;精子头部近球形,直径为1.85².51μm,头部无顶体,头部内有高度密集的细胞核染色质,头部后方凹陷形成植入窝,植入窝内有近端中心粒和远端中心粒,细胞核后方与质膜的间隙较大(称袖套),其内富含细胞质、线粒体和囊泡等细胞器;尾部细长,无主段和尾段之分,长为44.32.51μm,头部无顶体,头部内有高度密集的细胞核染色质,头部后方凹陷形成植入窝,植入窝内有近端中心粒和远端中心粒,细胞核后方与质膜的间隙较大(称袖套),其内富含细胞质、线粒体和囊泡等细胞器;尾部细长,无主段和尾段之分,长为44.3⁵0.7μm,横切面呈圆形,直径为0.26950.7μm,横切面呈圆形,直径为0.269⁰.308μm,透过横断面可见,鲇精子尾部由轴丝和附属纤维构成,外有一层质膜包裹,轴丝与远端中心粒形成9+2微管结构。研究表明,精子活力的适宜pH为7.00.308μm,透过横断面可见,鲇精子尾部由轴丝和附属纤维构成,外有一层质膜包裹,轴丝与远端中心粒形成9+2微管结构。研究表明,精子活力的适宜pH为7.0⁸.5,适宜温度为258.5,适宜温度为25²9℃,当pH为8.0、温度为28℃时,精子活力最强。     

鲇精子超微结构及pH、温度对其精子活力的影响

为了解鲇Silurus asotus精子的结构特征,应用扫描电镜和透射电镜技术,对体质量为320~550 g的鲇成熟精子结构进行了观察。结果表明:鲇精子由头和尾两部分组成,无明显颈部;精子头部近球形,直径为1.85~2.51μm,头部无顶体,头部内有高度密集的细胞核染色质,头部后方凹陷形成植入窝,植入窝内有近端中心粒和远端中心粒,细胞核后方与质膜的间隙较大(称袖套),其内富含细胞质、线粒体和囊泡等细胞器;尾部细长,无主段和尾段之分,长为44.3~50.7μm,横切面呈圆形,直径为0.269~0.308μm,透过横断面可见,鲇精子尾部由轴丝和附属纤维构成,外有一层质膜包裹,轴丝与远端中心粒形成"9+2"微管结构。研究表明,精子活力的适宜pH为7.0~8.5,适宜温度为25~29℃,当pH为8.0、温度为28℃时,精子活力最强。     

投饵量对许氏平鲉幼鱼生长和水环境中污染指标的影响

研究了许氏平鲉Sebastes schlegeli幼鱼养殖过程中投饵量(30、38、46、54、62、70、86、102、120、140、160、180、200、220、240 mg/d)对鱼体的增重及对水环境中悬浮物、化学需氧量(COD)、氨氮(NH4+-N)含量的影响。结果表明:幼鱼在生长过程中的最佳投饵量为160 mg/d,当投饵量小于160mg/d时,许氏平鲉的增长速度随投饵量的增加而增加;当投饵量大于160 mg/d时,再增加投饵量也并不能提高幼鱼的增长速度。投饵量对水体中固体悬浮物、COD、氨氮含量的影响与投饵量对幼鱼增重的影响的结果具有高度的一致性,存在投饵过量指示点(SZ)、COD污染指示点(CZ)、氨氮污染指示点(NZ)。当投饵量小于SZ、CZ、NZ时,悬浮物、COD、氨氮含量均随投饵量的增加而缓慢增加;当投饵量大于SZ、CZ、NZ时,悬浮物、COD、氨氮含量迅速增加。养殖水体中COD的自净符合一般水体COD的自净规律。根据试验结果建立了投饵量(T)与悬浮物含量(S)的模型为S=-18.86+1.082T-0.0069T2+0.0002T3,投饵量与COD的模型为COD=0.16+0.977T-0.055T2+0.00017T3,COD自净模型为C=113.4×exp(-0.68t)。     

投饵量对许氏平鲉幼鱼生长和水环境中污染指标的影响

研究了许氏平鲉Sebastes schlegeli幼鱼养殖过程中投饵量（30、38、46、54、62、70、86、102、120、140、160、180、200、220、240 mg/d）对鱼体的增重及对水环境中悬浮物、化学需氧量（COD）、氨氮（NH4＋-N）含量的影响。结果表明：幼鱼在生长过程中的最佳投饵量为160 mg/d,当投饵量小于160mg/d时,许氏平鲉的增长速度随投饵量的增加而增加;当投饵量大于160 mg/d时,再增加投饵量也并不能提高幼鱼的增长速度。投饵量对水体中固体悬浮物、COD、氨氮含量的影响与投饵量对幼鱼增重的影响的结果具有高度的一致性,存在投饵过量指示点（SZ）、COD污染指示点（CZ）、氨氮污染指示点（NZ）。当投饵量小于SZ、CZ、NZ时,悬浮物、COD、氨氮含量均随投饵量的增加而缓慢增加;当投饵量大于SZ、CZ、NZ时,悬浮物、COD、氨氮含量迅速增加。养殖水体中COD的自净符合一般水体COD的自净规律。根据试验结果建立了投饵量（T）与悬浮物含量（S）的模型为S=-18.86＋1.082T-0.0069T2＋0.0002T3,投饵量与COD的模型为COD=0.16＋0.977T-0.055T2＋0.00017T3,COD自净模型为C=113.4×exp（-0.68t）。     

不同结构模型礁对许氏平鲉幼鱼的诱集效果

用鱼类行为学方法,观测了许氏平鲉Sebastes schlegeli幼鱼在水槽内无模型礁和有模型礁条件下的行为反应,并统计分析了PVC材质的5种结构模型礁对许氏平鲉幼鱼的聚集率。结果表明:水槽中无模型礁的条件下,标志区(模型礁设置区)的许氏平鲉聚集率为0,许氏平鲉选择光线较弱区域栖息;放入模型礁的条件下,5种模型礁均对许氏平鲉具有明显的诱集作用,群体重心在礁体周围移动,标志区对鱼的聚集率为56.7%~90%。方差分析结果表明:5种模型礁对许氏平鲉的诱集作用无明显差异,许氏平鲉对不同模型礁均表现出明显的趋集反应。     

甘蔗黄螟精子的超微结构及辐射对其影响

本研究观察了正常黄螟睾丸中精子细胞的超微结构。并研究在蛹后期照射~(60)COγ—射线3.0万伦琴处理舌对当代雄虫,和照射1.5万伦琴处理后羽化的雄虫,与正常雌虫配对所产的子代雄虫(F_1)睾丸的精子细胞超微结构的影响。 经辐射处理后的当代雄成虫和(F_1)代雄成虫,其睾丸中的精子绝大多数具有正常的超微结构。从结果表明往后期蛹,用本试验的两个处理剂量,对当代及F_1代雄成虫精子的超微结构影响很小。在应用上,既能达到理想不育效果,又不影响其交尾受精竞争能力。本研究结果为应用辐射不育技术防治黄螟提供理论依据。     

鸡精子超微结构及其冷冻损害对授精力的影响

作者观察了鸡精子的4个细胞器(单个线粒体、中段、核和钻孔器)受到冷冻解冻损害的程度,研究了这些细跑器在鲜精和冻精中的完整率与它的授精力的关系,结果支持了认为精子超微结构完整率可以作为精液品质和授精力指标的观点。     

人体精子冷冻前后超微结构的变化

将１０例正常生育男性的精液标本进行冷冻保存、复温后电镜观察。结果,冷冻精子复温后精子超微结构发生了不同程度的改变,其主要改变为精子顶体肿胀,顶体内、外膜分离,外膜形成波浪状皱褶,有的核局部出现凹陷,线粒体改变呈基质密度降低,结构模糊等。但是,精子基本结构保持完整。研究结果表明：冷冻精子超微结构改变的主要原因是在冷冻过程中,由于冰晶形成的影响,水分内移,细胞肿胀,因而造成其活动率的明显下降。但并不影响授精能力。     

翘嘴鲌精子生理特性及超低温冷冻的研究

采用试验生态——显微观察方法对翘嘴鲌精子的生理特性进行了研究,并用两步降温法超低温冷冻保存翘嘴鲌精子,筛选出适宜的稀释液与抗冻剂配方。结果表明,翘嘴鲌适宜的盐度范围为0～0.4%,pH值为5.5～8.0时,精子激活率较高,其中pH值为5.5时,精子运动时间与寿命最长;翘嘴鲌精子在4℃条件下保存84 h仍有48.33%的激活率,在25℃条件下保存84 h时精子死亡。以D-15为稀释液、10%乙二醇(EG)为抗冻剂,采用两步降温法超低温冷冻保存翘嘴鲌精子,解冻后精子活力最高。     

獐子岛鱼礁海域许氏平鲉生长特征与资源评估

根据2011~2012年大连獐子岛鱼礁海域许氏平鲉的现场调查数据,分析了许氏平鲉的体重组成和体长组成,求解出了许氏平鲉的体长体重关系式和体长、体重生长方程,计算了体重生长的拐点年龄、临界年龄和总瞬时死亡率,估算了大连獐子岛鱼礁海域许氏平鲉的资源量。结果表明：许氏平鲉的体长生长方程为Lt=412.5×[1-e-0.21（t＋0.65）],体重生长方程为Wt=1734.2×[1-e-0.21（t＋0.65）]2.92,体重生长的拐点年龄为4.45龄,群体临界年龄是4.82龄,獐子岛鱼礁海域许氏平鲉的资源生物量为456.8t。确定了鱼礁海域许氏平鲉的合理开捕规格和年捕捞量。     

中间球海胆精子超低温冷冻损伤的研究

应用透射电镜技术研究了超低温冷冻保存对中间球海胆Strongylocentrotus intermedius精子超微结构的影响。结果表明:不加抗冻剂的情况下,精子线粒体和顶体结构不完整,质膜、鞭毛破损。加入保护剂后,多数精子结构完好,部分精子细胞器受损,表现为质膜褶皱或膨胀举起,与核膜的间隙明显增大;顶体肿胀、破裂或脱落;线粒体嵴间隙增大,内部出现空泡,甚至线粒体内膜破损,内嵴减少,呈弥散状;鞭毛被膜肿胀,呈波浪状,9+2型结构模糊;细胞核结构没有明显变化。应用单细胞凝胶电泳技术研究了精子冷冻保存前后DNA的损伤。结果表明,不加抗冻剂的冷冻组及添加抗冻剂的试验组精子DNA损伤情况与鲜精相比均无显著差异(P>0.05),冷冻对精子结构的损伤是造成精子活力及受精率下降的主要原因。