广东地区规模化种鸡场禽戊型肝炎的血清学和病原学调查

为了解广东地区规模化种鸡场禽戊型肝炎病毒(avian hepatitis E virus,aHEV)的流行情况,在2020年5月至2021年1月期间,从广东地区7个规模化种鸡场(A～G)的祖代和父母代鸡群(25周龄以上)随机采集血清样本325份、新鲜死淘鸡的组织样本(肝脏和脾脏)134份.利用商品化的aHEV抗体试剂盒...     

4例禽戊型肝炎病例的实验室诊断及ORF2基因遗传进化分析

本研究通过分子流行病学诊断技术,分别从山东、辽宁、吉林、陕西4个地区表现肝炎症状的病鸡中,采集肝脏和脾脏样品,利用RT-PCR方法,检测禽戊型肝炎病毒(aHEV),并对aHEV-ORF2基因片段进行测序,利用MegAlign进行同源性比较。结果显示:4个鸡场的病鸡样品均为aHEV阳性,aHEV-ORF2基因序列间同源性为84.5%~94.5%,与已报道的4种基因型同源性均小于84.0%,其中与基因1型的澳大利亚株和韩国株同源性为81.6%~82.8%,与基因2型的美国原型株和美国无毒株同源性为80.9%~82.8%,与基因3型的欧洲株和中国株同源性为80.8%~82.5%,与基因4型的匈牙利株和中国台湾株同源性为81.4%~82.6%。ORF2基因进化树分析显示:4株aHEV均属于戊型肝炎B种,形成独立的基因分支,但不属于已报道的4个基因型,而在一个新型独立分支上,表明国内存在一种新基因型的aHEV流行。本研究为我国aHEV的进一步研究提供了基础和依据。     

影响鸡群增重的因素

在岩鹰鸡群生长过程中,经常会受到腺胃炎、肌胃炎、寄生虫、支原体等疾病的困扰,由于这样疾病难以彻底治愈,严重影响岩鹰鸡群体质,形成慢性消耗,进而影响岩鹰鸡群体重增加,给整个岩鹰鸡群带来无法估量的损失.所以在日常管理中需要重视起来,每天仔细观察鸡群精神状况和采食饮水情况,及时发现鸡群异常症状,并采取有效措施进行防治,减少这些疾病对鸡群产生的危害,确保鸡群正常生长和发育.     

如何进行鸡群的观察与疾病诊断

在养鸡生产中必须经常深入鸡舍查看鸡群的健康状况,以便及时发现问题,采取相应措施,确保鸡群的健康生长。对鸡群的观察包括群体观察和个体观察,文章重点介绍群体观察。在群体观察时首先在鸡舍前边直接观察大群情况,然后进入鸡舍对整个鸡群进行察看,主要观察鸡群精神状态、运动状态、采食、饮水、粪便、呼吸以及生产性能等。     

不同免疫增强剂对禽戊型肝炎病毒ORF2蛋白的免疫效果分析

为研究不同免疫增强剂对禽戊型肝炎病毒（aHEV）ORF2蛋白的免疫效果影响，研究通过大肠杆菌原核表达系统表达aHEV ORF2蛋白，纯化后与弗氏佐剂按1∶1等体积混合制备亚单位疫苗。将90只1日龄SPF雏鸡随机分成6组，每组15只。ORF2蛋白组单纯免疫YT-ORF2蛋白，ORF2蛋白+弗氏佐剂组免疫YT-ORF2蛋白+弗氏佐剂，AB101组免疫YT-ORF2蛋白+弗氏佐剂+AB101,AB106组免疫YT-ORF2蛋白+弗氏佐剂+AB106,AB506组免疫YT-ORF2蛋白+弗氏佐剂+AB506，空白对照组免疫生理盐水，分别在21、28、42日龄三次免疫SPF鸡。采用ELISA和间接免疫荧光检测不同免疫组SPF鸡的aHEV抗体水平，通过流式细胞仪检测CD4+和CD8+T淋巴细胞水平，荧光定量PCR检测IL-2、IL-4、IFN-γ 3种细胞因子表达情况，并测定体重和器官发育指数。结果显示：原核表达获得分子量为72 ku的ORF2蛋白，AB106组产生的抗体水平极显著高于其他各组（P<0.01）,AB106和AB506免疫增强剂可引起CD4+和CD8+T细胞比重显著增加并上调I...     

科学控制鸡群的均匀度

正鸡群的均匀度高可以确保鸡群的产蛋率快稳定的增长,保证良好的生产性能。体况的均匀度和性成熟的均匀度要比体重的均匀度重要,在鸡群均匀度不高的情况下,对鸡群进行合理的分群,可进行有针对性的饲喂和管理,可有效的提高鸡群的均匀度。在养鸡生产中,鸡群均匀对其生产性能有着重要的影响作用,均匀度高的鸡群的产蛋率可以得到快速稳定的增长,增重效     

种蛋中禽白血病病毒P27抗原检出率与鸡群禽白血病发病率的相关性研究

本研究旨在观察种鸡群所产种蛋中禽白血病病毒P27抗原检出率与种鸡群发病状况及其下一代鸡群禽白血病发病率的相关性,为鸡群净化和禽白血病预警提供参考依据.对国内海兰褐蛋鸡等品系不同祖代及父母代共7个种鸡场所产种蛋的P27抗原进行了检测,对部分种鸡场的ALV-A/B和ALV-J抗体进行了检测和病毒的分离鉴定,对各种鸡群孵化后下一代鸡群的禽白血病发病状况和客户投诉情况进行了追踪调查.7个种鸡场所产种蛋中P27抗原检出率为0%～12％,P27抗原检出率与种鸡群的发病状况及其子代鸡群的发病状况和客户投诉情况密切相关,即种蛋中P27抗原检出率越高,种鸡群发病情况越严重,下游客户鸡群发病率和投诉率越高.种鸡群的种蛋P27检出率与种鸡群及其孵化后鸡群的禽白血病感染状况具有较好的吻合性,可以作为开展ALV的流行病学调查和禽白血病感染风险评估的重要指标.     

春季养鸡场疾病防治与养殖管理方法浅谈

初春时节气候寒冷,且复杂多变,昼夜温差较大,养殖场鸡群免疫力下降,致使鸡只疾病频频发生,同时可能致使大面积鸡群受连累,所以春季饲养鸡群进程中,对常见疾病防治尤为重要。因此,将春季常见鸡群疾病进行阐述,且给予春季饲养鸡群注意事项,力争为养鸡户生产做以指引。     

浅析鸡群免疫前后消毒的必要性

在鸡群饲养管理中,对鸡舍进行定期消毒,有利于杀灭或减少环境中存活的病原微生物,减少鸡群接触病原体的机会,切断疾病传播途径,达到降低鸡群感染发病的风险。但是大多管理人员认为,在鸡群进行接种免疫疫苗前后2～3 d,不要进行带鸡消毒,否则会降低疫苗效价或免疫效果,致使免疫接种失败。其实这种认识不正确,会误导广大养殖人员无论免疫什么疫苗都会不进行消毒,进而影响对疾病的防控工作。本文对鸡群免疫前后消毒的必要性进行分析,希望有关技术人员正确掌握消毒时机,能够减少或杀灭环境中的病原微生物。     

云南部分地区肉鸡支气管栓塞调查与分析

近年来云南地区的肉鸡生产中频繁发生以呼吸道栓塞或张口呼吸为主要临床症状的病症,通过对健康鸡群和发病鸡群进行血清学调查显示,发病鸡群的抗传染性支气管炎病毒抗体水平显著高于健康鸡群,表明该病症与感染传染性支气管炎病毒感染有直接关系。     

2015年-2016年度南宁部分地区猪戊型肝炎病毒基因型分析

为了解广西猪群中戊型肝炎病毒(HEV)基因型,利用套式RT-PCR用对南宁周边猪场采集到的104份新鲜猪粪便进行HEV检测、分离并成功扩增和克隆了11株阳性毒株的ORF2基因部分保守片段.序列测定结果表明,11株HEV ORF2序列自身核苷酸同源性为97.7%~100%,推导编码的氨基酸同源性为97.9%~100%;与4型HEV代表毒株Ch-S-1、Ch-T11、swGX40等的核苷酸同源性为84.6%~90.6%,而与其他各型之间的同源性较低.系统发育进化树结果表明,11株HEV广西株为基因4型,其中,10株HEV为4a亚型,1株毒株为4e亚型.结果表明,广西猪群中流行的HEV均为基因4型,且以4a亚型为优势流行毒株.     

吉林地区1株小鹅瘟病毒NS1和VP1基因的克隆与序列分析

为了解吉林地区小鹅瘟病毒（Gosling plague virus,GPV）的基因特征,及其与黑龙江及中国其他省份和国外流行毒株的相关性,本研究采用PCR方法鉴定2018年吉林某养鹅场送检的病死雏鹅的肠组织,同时对GPV的非结构蛋白NS1基因及结构蛋白VP1基因进行了克隆和测序,并与国内外16株GPV参考毒株的相应序列进行分析。结果表明,病死雏鹅为GPV与减蛋综合征病毒（Egg drop syndrome virus,EDSV）混合感染;吉林地区GPV的NS1基因长为1 884 bp,编码627个氨基酸,与参考毒株核苷酸序列同源性为93.8%~99.8%,氨基酸序列同源性为97.1%~99.7%;VP1基因长为2 199 bp,编码732个氨基酸,与参考毒株核苷酸序列同源性为93.4%~99.9%,氨基酸序列同源性为96.4%~99.9%。NS1及VP1基因的系统进化树分析均表明,吉林地区GPV与哈尔滨分离株98E属于同一进化分支,亲缘关系最近,与国外分离株、中国台湾和安徽分离株亲缘关系均较远。吉林地区GPV与鹅源GPV具有较近的亲源关系,同源性明显高于其他水禽来源的GPV。该研究为明确中国东北地区GPV空间的流行规律提供基础数据,为东北地区GPV的诊断与治疗提供参考依据。     

鸭圆环病毒ORF3基因的克隆及序列分析

为了解鸭圆环病毒(DuCV)不同分离株ORF3基因变异情况及分析其同源性,本研究从临床病料中分离10株DuCV,扩增ORF3基因并测定其序列.通过与已知序列比对分析发现,DuCV ORF3基因分为两种基因型,大小分别为237 bp和297bp.ORF3基因同一基因型之间的核苷酸同源性为95.8％～100％,氨基酸同源性为88.6％～100％,而不同基因型之间的核苷酸同源性仅为87.8％～91.6％,氨基酸同源性仅为72.2％～81.0％.     

柑橘衰退病毒JY基因型分离株在我国的发生及其分子特征

柑橘衰退病毒（Citrus tristeza virus,CTV）是对柑橘产业具有毁灭性危害的病原之一。为了明确JY基因型分离株在我国的发生及其分子特征,本研究对4个地区的野生柑橘和9个柑橘产区的栽培柑橘进行JY基因检测,并克隆测序JY 基因型分离物的ORF1b、p33、p25、p23基因进行分析。结果显示仅来自湖南江永自然生态中的46个道县野橘样品中检出12个阳性样品,说明JY 基因型在我国的发生分布并不广泛。ORF1b、p33、p25、p23基因序列多样性、遗传分化、分子变异分析表明,JY 基因型12个分离物间核苷酸和氨基酸序列相似性极高（>96.8%）,但JY 基因型分离物与CTV其他基因型分离物存在明显的遗传分化：ORF1b、p33、p25、p23基因序列的平均核苷酸和氨基酸序列相似性分别为79.2%-92.7%、80.8%-85.9%、90.5%-93.6%、87.5%-91.8%和89.5%-98.1%、80.8%-84.4%、93.7%-97.3%、85.4%-91.6%;Fst均明显高于0.25;CTV JY基因型种群与其他基因型种群的差异非常大（分子变异大于43%,P值为0.001）,且基因交流小（Nm=0.396）。ORF1b、p33、p25、p23基因单独及4个基因联合系统发育分析,表明JY 基因型12个分离物均与JY-2 聚集在同一簇,且独立于现有CTV基因型之外,进一步证实JY 基因型与CTV其他基因型分离物存在明显的遗传分化,可能为我国特有CTV基因型株系。     

Identification of genotype 3 hepatitis E virus in fecal samples from a pig farm located in a Shanghai suburb

Strains of hepatitis E virus (HEV) genotypes 1 and 4 have been detected on the Chinese mainland although there have been no previous reports of zoonotic genotype 3 HEV. In the present study, 65 swine fecal specimens were collected from five pig farms located in different Shanghai suburbs. RT-PCR and nested PCR were undertaken using partial nucleotide sequences of Open Reading Frame 2 (ORF2) of HEV to detect HEV RNA. Genetic analysis was based on alignments of an amplified 150-nt ORF2 sequence. RT-PCR revealed 15 HEV positive samples among 65-pig fecal specimens examined. Phylogenetic analysis of the amplified sequences indicated seven HEV strains belonged to genotype 3 and eight strains to genotype 4. This is the first time that genotype 3 hepatitis E virus has been identified on the Chinese mainland.     

2014年-2016年广西地区猪繁殖与呼吸综合征病毒Nsp2和ORF5基因的遗传多样性分析

为了解广西地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)流行毒株的遗传进化情况,对2014年-2016年来自广西各地的部分PRRSV阳性病料进行Nsp2和ORF5基因的扩增和测序分析.结果获得34个Nsp2基因序列和45个ORF5基因序列,均属于美洲型毒株.Nsp2基因间核苷酸序列的同源性为91.8％~100％,与PRRSV美洲型毒株VR-2332、CH-1a、JXA1及NADC30株核苷酸序列的同源性分别为81.3％~84.3％、88.9％~92.1％、94.3％~99.3％和73.5％~75.1％,而与PRRSV欧洲型毒株LV株核苷酸序列的同源性为51.5％~53.2％.ORF5基因间核苷酸序列的同源性为82.8％~100％,与PRRSV美洲型毒株VR-2332、CH-1a、JXA1及NADC30株核苷酸序列的同源性分别为83.7％~99.5％、85％~95％、83.8％~99.7％和83.2％~86.4％,而与PRRSV欧洲型毒株LV株核苷酸序列的同源性为62.4％~64.5％.基于Nsp2和ORF5基因推导的氨基酸序列绘制的遗传进化树中,广西地区的毒株主要分布在以JXA1为代表的Ⅳ亚群.表明当前广西PRRSV流行毒株以JXA1株为代表的高致病性美洲型毒株为主,各毒株Nsp2和ORF5基因序列存在一定的差异,尚未发现欧洲型毒株和美洲型NADC30类毒株.     

血清4型禽腺病毒W株的分离鉴定和全基因组序列分析

为了解血清4型禽腺病毒（fowl adenovirus genotype 4,FAdV-4） W株全基因序列、结构特征及遗传变异情况,本试验采集发病鸡肝脏和肾脏进行PCR鉴定、SPF鸡胚和鸡胚肝细胞分离、电镜观察证明该病毒为FAdV-4,TCID₅₀为10^-7.2/0.1 mL;电镜观察可见70 nm左右的二十面体无囊膜病毒颗粒;经绒毛尿囊膜途径接种10日龄SPF鸡胚后能明显抑制鸡胚发育出现侏儒胚,接种10 d内死亡率达100%;进一步对W株进行全基因组扩增及序列分析。病毒序列分析结果显示,其全基因组长为43 591 bp,共有60个开放阅读框,W株与GenBank中公布的FAdV-4参考毒株全基因组核苷酸序列同源性为98.4%~100%,其中与标准株非致病性毒株ON1（登录号：GU188428.1）的同源性为98.4%,主要缺失ORF19（脂肪酶基因）和ORF27;通过对病毒主要结构蛋白Hexon、Fiber-1和Fiber-2基因分析发现,W株与近几年国内分离株亲缘关系较近,与ON1株及其他国外分离株差异较大。综上说明,该分离株具有高致病性,与国外分离株存在较大差异,为进一步分析FAdV-4的毒力增强机制提供了基础依据。     

两株高致病性PRRSV湖北分离株ORF5与Nsp2基因序列分析

2013年从湖北两个发病猪场采集疑似猪繁殖与呼吸综合征病料,接种Marc-145细胞,可致明显细胞病变,各分离到1株猪繁殖与呼吸综合征病毒(HBHS株和HBXN株)。采用RTPCR方法,对ORF5基因序列和Nsp2基因部分序列进行扩增并测序,并用DNA MAN软件将测序结果与国内外发表的13株参考毒株进行比对分析。结果显示,2株分离株Nsp2基因与国内高致病性JXA1、GD2007、GD2008毒株的氨基酸同源性很高,介于98.5%~99.5%;且该基因与国内其他变异株有完全一致的缺失特征;ORF5基因与国内高致病性毒株的氨基酸同源性为98.1%~99.5%,且系统进化树遗传距离很近,同处一个基因群中,而与CH-1a等经典毒株较远。这两株分离株均属于PRRSV美洲型变异株,此结论为该病的防治及疫苗的设计奠定了基础。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒HS株结构蛋白基因的克隆与序列分析

根据GenBank中猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)美洲株(VR-2332)基因序列,设计合成了ORF2a、ORF3、ORF4、ORF5、ORF6和ORF7基因的引物.利用RT-PCR扩增出PRRSV HS株各基因的cDNA片段,将扩增的各cDNA片段克隆入pMD18-T载体并测序.应用DNA Man软件,将测序结果与国内外已发表野毒株和疫苗株(VR-2332、Resp MLV、16244B、HN1、BJ-4、CH1-a、HB-1、HB-2、LV)的相应基因进行序列比较,并绘制系统进化树.结果表明,PRRSV HS株与美洲型的相应基因核苷酸同源性为83.6%～99.7%,与LV株的相应基因核苷酸同源性为38.9%～49%;推导的氨基酸与美洲型相应基因的同源性为86.6%～99.6%,与LV株的同源性为54.2%～78.2%.系统进化树表明,PRRSV HS株属于美洲型,与HN1、VR-2332、RespMLV、16244B、BJ-4亲缘关系较近.     

鸭肝炎病毒GD株的全基因组序列测定与分析

为了给在分子水平上研究鸭肝炎病毒(DHV)的致病机理奠定基础,进一步丰富DHV的遗传变异和进化信息,试验采用RT-PCR方法分段克隆获得DHV-1 GD株的全基因组序列并进行序列分析。结果表明:GD株的基因组全长7 690 nt[不含Poly(A)尾],5’端和3’端非编码区长度分别为626 nt和314 nt,单一开放阅读框架(ORF)为627～7 376 nt,编码2 249个氨基酸;GD株与DHV-1参考株比较,其核苷酸和氨基酸同源性分别为94.8%～99.7%和97.7%～99.6%;与中国台湾和韩国新型DHV(DHV-N)相比同源性分别为72.7%～73.2%和81.8%～83.4%;GD株与DHV-1参考株遗传进化关系较密切,处于同一分支,而与DHV-N遗传关系较远,处于不同分支。