气肿疽梭菌C54-1株的制备与检定

为研究气肿疽梭菌C54-1株(CVCC60001)的菌种特性,制备了1批气肿疽梭菌C54-1株,并对菌种的形态及生化特性、培养特性、血清学特性、真空度、纯粹、剩余水分、毒力及免疫原性、16S rDNA等进行检定,以及对于该菌的适宜培养基促生长能力等方面进行了比较。实验结果表明,该冻干菌种的形态及生化特性、培养特性、血清学特性、真空度、纯粹、剩余水分、毒力及免疫原性均符合《中华人民共和国兽用生物制品规程》二〇〇〇版质量标准的规定。16S rDNA鉴定为气肿疽梭菌,相似度为99.93%。在免疫原性检定中,使用致死剂量攻毒时,免疫组能够4/4被保护,证明该菌明矾苗免疫效果良好。使用商品化梭菌培养基对于该菌培养进行了比对,证实商品化培养基替代厌气肉肝汤的可能性。本研究为气肿疽梭菌的制备和检定提供参考依据,并使用不同培养基进行比对研究,为该菌的稳定培养和疫苗工艺改进提供了研究基础。     

猪丹毒杆菌C43005株的制备及检定

为研究猪丹毒杆菌C43005株的菌种特性,制备了一批猪丹毒杆菌C43005株并对菌种的真空度、剩余水分、形态、培养特性、生化特性、血清学特性、毒力、免疫原性等参数进行检定,重点对该菌种的毒力进行重复试验并对影响毒力的因素进行分析。结果表明,菌种的真空度、剩余水分、形态、培养特性、生化特性、血清学特性、免疫原性均符合《中华人民共和国兽用生物制品规程》二〇〇〇版相关质量标准的规定,毒力试验结果明显受培养基质量和动物个体差异的影响。本研究可以为猪丹毒杆菌C43005株的制备和检定提供参考依据。     

猪丹毒丝菌生产用菌种CVCC43005株最高扩繁代次的确定及疫苗佐剂的筛选

为研究猪丹毒丝菌CVCC43005株作为生产用菌种的最高扩繁代次以及新型佐剂对该菌种免疫原性的影响,在对猪丹毒丝菌CVCC43005株形态、生化特性、培养特性、纯粹性、血清学特性、真空度、剩余水分含量、毒力及免疫原性等研究的基础上,建立了猪丹毒丝菌CVCC43005株种子批。将CVCC43005株(1986年冻干)用培养基进行了20次传代(F1~F20),并对其中的F5、F10、F15、F20代进行冻干并抽检测定。结果显示:抽检的各代次菌种均纯粹,形态、生化特性、培养特性均符合猪丹毒丝菌的特性,血清型为2型,真空度检查均呈现白色、粉色或紫色辉光,剩余水分含量均<3.0%,9~10CFU活菌皮下注射体重18~22g小白鼠,均于7日内5/5死亡。将抽检的各代次菌种制成铝胶佐剂灭活疫苗,免疫16~18g小白鼠后均能产生10/10保护。以F5代菌株制备菌液,甲醛灭活后,分别用铝胶佐剂、矿物质白油佐剂、洛阳赛威公司的水溶性佐剂、水性复合免疫佐剂以及法国赛比克公司的MONTANIDETMIMS1313VGNST、GEL01PR6种佐剂制备灭活疫苗,经无菌及安全检查合格后进行16~18g小白鼠免疫效果对比实验,最终确定猪丹毒丝菌CVCC43005株基础种子代数为F1~F10代,生产用菌种的最高扩繁代次宜控制在5代以内,法国赛比克公司的GEL01PR佐剂为猪丹毒灭活疫苗的最佳佐剂。该菌种作为生产用菌种最高扩繁代次的确定及疫苗佐剂的筛选,为修订菌种检定依据奠定了基础。     

猪霍乱沙门氏菌C79102株的制备与检定

为研究猪霍乱沙门氏菌C79102株的菌种特性,制备了一批猪霍乱沙门氏菌C79102株,并对菌种的真空度、纯粹、剩余水分、培养特性、形态及生化特性、血清学特性、特异性、毒力等进行检定,重点对菌种的毒力进行研究。试验结果表明,该冻干菌种的真空度、纯粹、剩余水分、培养特性、形态及生化特性、血清学特性均符合《中华人民共和国兽用生物制品规程》二〇〇〇版质量标准的规定,特异性检验结果显示C79102在含1%醋酸铊的普通肉汤中不生长,毒力试验结果显示,不同制备方法获得的肉肝胃消化汤培养的菌液毒力差异明显。本研究可以为猪霍乱沙门氏菌的制备和检定提供参考依据。     

禽结核菌素生产用菌种的制备与鉴定

为制备禽结核菌素国家标准品,研究禽结核菌素生产用菌株禽分枝杆菌的菌种特性,对1992年冻干保存的3株菌CVCC68201、CVCC68202和CVCC68203进行复苏,采用SPF鸡复壮,分离培养后冻干了新批次菌种,对菌种形态、生化特性、培养特性、毒力和抗原性进行了鉴定。结果表明,制备的菌种纯粹,形态、生化和培养特性符合禽分枝杆菌的生物学特征,免疫原性符合的兽用生物制品质量标准的规定。本研究为禽分枝杆菌的鉴定提供参考,也为制造禽结核菌素的工艺改进奠定基础。     

羊链球菌CVCC55001、CVCC55002株对昆明小鼠的致病性研究

为研究羊链球菌CVCC55001、CVCC55002株对昆明系(KM)小鼠的致病性,使用羊链球菌CVCC55001、CVCC55002株分别对昆明小鼠进行毒力测定,观察临床和剖检症状,对死亡小鼠进行细菌分离培养,并对典型菌落进行形态、生化特性以及PCR鉴定。毒力测定结果显示CVCC55001对于昆明小鼠的最小致死剂量为9 CFU,CVCC55002对于昆明小鼠的最小致死剂量为11 CFU。感染羊链球菌死亡小鼠主要剖检症状为肝脏出血、肠道液化性坏死、脾脏肿大,病理变化为肝细胞出现大量坏死、肠道黏膜层广泛自溶、脾脏组织广泛坏死出血。本研究建立了羊链球菌CVCC55001、CVCC55002株的昆明小鼠攻毒感染模型,确定了最小致死剂量,对羊链球菌感染和致病性研究展开初步探索,为疫苗研究及评价提供了平台支撑。     

猪巴氏杆菌病疫苗生产菌种保存期试验

对３个不同冻干年代２～８℃保存１０年以上的猪源多杀性巴氏杆菌Ｃ４４－１、Ｃ４４－８、６７９－２３０冻干菌种按《中华人民共和国兽用生物制品规程》有关规定进行了冻干菌种存活情况检查和全面系统鉴定，结果表明此３株冻干菌种在２～８℃保存１０年，其菌体形态、菌落特征、生化特性、血清学特性、毒力（安全性）、免疫原性均符合《中华人民共和国兽用生物制品规程》规定标准。     

禽多杀性巴氏杆菌病疫苗生产用菌种保存期试验

对三个不同冻干年代２￣８℃保存１０年以上的Ｃ４８－１、Ｃ４８－２以及保存２二个不同年龄１５０２冻干菌种按《中华人民共和国兽用生物制品规程》有关规定进行了力种存活情况检查和全面系统鉴定,结果表明Ｃ４８－１、４８－２、１５０２冻干菌种在２￣８℃保存１０年以上,其形态、菌落特征、生化特性、血清学特性、毒力、免疫原性均符合《中华人民共和国兽用生物制品规程》规定标准。     

仔猪腹泻大肠杆菌菌种保存的研究

本文研究了4株仔猪腹泻大肠杆菌菌株不同代次培养的菌液,制成甘油菌后,保存在-20℃6个月,分析细菌的菌落形态、菌落特征、生化特性、血清血特性、毒力、免疫原性均符合《中华人民共和国兽药典》规定标准;4批冻干保存的菌种,经过36个月的保存后,分析细菌的菌落形态、菌落特征、生化特性、血清血特性、毒力、免疫原性均符合《中华人民共和国兽药典》规定标准。本文为大肠杆菌病的致病机理及疾病的潜伏期提供了理论依据。     

鸡大肠杆菌菌种选育及冻干藏试验

为试验鸡大肠杆菌病中草药佐剂多价灭活疫苗而进行了制造和检验用菌种的选育试验。经染色特性、培养特性、生化特性及血清学特性等的观察和测定，选用Ａ、Ｂ、Ｃ、ＳＥ４株血清型分别是Ｏ１、Ｏ２、Ｏ７８及Ｏ２４的鸡Ｅ．ｃｏｌｉ作为标准菌株，现地分离和鉴定有代表性疫区或病鸡群病原血清型作为地方菌株，经毒力和免疫原性测定，结果证实，该４株血清型大肠杆菌作为疫苗制造和检验用菌种较好，并分别进行了冷冻真空干燥保存试验，     

兽药典收载羊败血性链球菌病疫苗生产检验用菌种的系统分类鉴定

根据现有细菌分类鉴定方法,采用血清学、Biolog、16 S rRNA序列分析和全基因组序列分析等方法对羊败血性链球菌病疫苗生产检验用菌种CVCC 553、55001和55002进行系统鉴定.结果显示,菌种CVCC 553、55001和55002血清群为兰氏C群;Biolog鉴定为马链球菌反刍亚种;16 S rRNA序...     

华南地区两株副猪嗜血杆菌的生物学特性与致病性研究

本试验旨在对来源于广东省的两株副猪嗜血杆菌的生化特性、血清型、耐药性、生长特性以及毒力和免疫原性进行研究。试验结果表明,两株菌分别为血清4型和5型;两株菌均具有较好的生长能力,培养10 h活菌含量都能达到10⁹以上;其LD₅₀分别是1.52×10⁹ CFU和9.3×10⁸ CFU;分离菌株对喹诺酮类和磺胺类抗生素有较强的抵抗力;免疫试验结果表明,两株菌具有较好的免疫原性。以上试验结果表明,这两株菌可以作为疫苗的基础候选菌株。     

扭角羚肺炎克雷伯氏菌的分离鉴定

本试验旨在报告四川省野生扭角羚自然生存过程中致病性细菌的检测及生物学特征。试验对发病死亡扭角羚病变组织进行细菌学检查及分离,对分别从肝脏、脾脏和肺脏分离得到的4株优势菌进行形态特征、生化特性和16SrDNA分子鉴定,判定为肺炎克雷伯氏菌。这4株菌对供试小白鼠均有致病性。测其LD50,分别为2.9×107、2.9×107、4.5×107和1.1×108 CFU/只。4株分离菌对供试的先锋霉素等敏感,对阿米卡星等中度敏感,对红霉素等耐药。推测这4株肺炎克雷伯氏菌是导致扭角羚死亡的主要病原菌。     

乳酸菌固态混合发酵研究

以玉米粉、豆粕、麦麸为基质,以保加利亚乳杆菌、嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌为发酵菌种,采用固态发酵技术,以活菌数为指标,通过单因素和L9(34)正交试验确定了三种菌混合发酵的最佳条件,并对其发酵产物的常规营养成分进行分析测定。结果表明:固态基质中玉米粉:豆粕:麦麸=1:1:1、培养基初始含水量80%p、H值6.3、接种量为10%、三种菌接种比例为1:1:1、发酵温度40℃时的发酵效果最好。在此条件下,保加利亚乳杆菌数为3.0×109 CFU/g,嗜酸乳杆菌数为4.6×109 CFU/g,嗜热链球菌数为5.8×109 CFU/g,发酵产物粗蛋白质、粗脂肪和氨基酸态氮含量分别是发酵前的1.16、1.12和6.94倍。为开发一种新型生物饲料打下基础。     

鸡白痢沙门氏菌阳性血清国家标准品制备用菌株的筛选

为了制备鸡白痢沙门氏菌阳性血清标准型国家标准品及鸡白痢沙门氏菌阳性血清变异型国家标准品,对中国兽医微生物菌种保藏管理中心保藏的10株来源背景清晰的鸡白痢沙门氏菌菌株的形态、生化特性、培养特性、血清学特性、抗原性进行了鉴定,并进行了变异检查及沙门氏菌基于inv A基因的PCR检测。结果表明,CVCC79201株及CVCC79207株分别符合鸡白痢沙门氏菌标准型菌株及变异型菌株的特性,CVCC79201株菌制备的抗原与WHO标准实验室提供的AntiS.Pullorum Serum(S)及Anti-S.Pullorum Serum(V)国际标准品的强阳性血清和弱阳性血清均能发生100%凝集,CVCC79207株菌制备的抗原与Anti-S.Pullorum Serum(S)国际标准品的弱阳性血清发生75%凝集,与Anti-S.Pullorum Serum(S)国际标准品的强阳性血清及Anti-S.Pullorum Serum(V)国际标准品的强阳性血清和弱阳性血清均能发生100%凝集。用其制备免疫抗原免疫家兔后获得的阳性血清效价较高于鸡白痢沙门氏菌阳性血清国际标准品。结果证明,CVCC79201株及CVCC79207株可分别用于制备鸡白痢沙门氏菌阳性血清标准型国家标准品及鸡白痢沙门氏菌阳性血清变异型国家标准品。     

肠出血性大肠杆菌O157∶H7 EMA-PCR检测技术的建立

肠出血性大肠杆菌O157∶H7是一种重要的人畜共患传染病病原菌。为建立一种特异、灵敏的O157∶H7新型检测技术,以O157抗原基因(rfbE基因)为模板设计特异性引物,利用叠氮溴化乙锭(ethidium monoazide bromide,EMA)处理菌液,沸水浴法制备细菌裂解液,优化PCR条件,建立一种快速、有效的O157∶H7活菌EMA-PCR检测方法。结果显示:EMA-PCR可从rfbE基因阳性菌株CVCC248和两株临床分离菌株cd0912、cd0803中扩增出大小为495 bp的特异性条带,检测灵敏度可达12 CFU/mL。经EMA处理,从含有1%～100%O157∶H7 CVCC248活菌混合悬液制备的DNA中均可扩增出目的片段。因此,成功建立了肠出血性大肠杆菌O157∶H7的EMA-PCR检测方法;该方法可避免因分析的样品中含有死细菌而造成的假阳性检测结果,检测的准确性和真实性较传统PCR大大提高。O157∶H7 EMA-PCR技术的建立为O157∶H7的临床诊断提供了新的方法,具有重要的实际应用价值和良好的应用前景。     

牦牛源牛链球菌的分离鉴定及部分生物学特性研究

本研究旨在从腹泻牦牛粪便中分离鉴定牛链球菌,并分析其溶血性、对小鼠的致病性及对抗菌药物的敏感性。将川西北阿坝州45份腹泻牦牛粪便于血平板上划线,37℃、5% CO₂培养24 h分离细菌,经16S rRNA序列扩增测序和系统发育分析鉴定出14株牛链球菌,其中8株巴黎链球菌,6株解没食子酸链球菌巴氏亚种;9株呈α溶血,5株呈β溶血。分离鉴定的牦牛源巴黎链球菌和解没食子酸链球菌巴氏亚种能引起试验小鼠的轻度腹泻;药敏试验结果显示分离菌株对青霉素、头孢噻肟、万古霉素、乙酰螺旋霉素、环丙沙星、利福平、替考拉宁、氨苄西林和庆大霉素共9种抗生素高度敏感,对链霉素、卡那霉素、林可霉素、红霉素、四环素和克林霉素耐药率较高。本研究阐明了牦牛源链球菌的部分生物学特性,为该病的防控奠定了基础。     

Isolation,Identification and Biological Characteristics Research of Streptococcus bovis from Yak

The objective of this study was to isolate and identify Streptococcus bovis from yak, and detect their hemolytic, pathogenicity and antimicrobial susceptibility. 45 fecal samples collected from the diarrheal yaks in Aba state in Northwest Sichuan province were used to isolate Streptococcus bovis with sheep blood culture media under 37℃ and 5% CO₂ condition cultured for 24 h. The isolated bacteria were identified by 16S rRNA amplification and sequencing. Total 14 Streptococcus bovis were identified, among which, 8 Streptococcus lutetiensis strains and 6 Streptococcus gallolyticus strains. 9 Streptococcus bovis strains showed α hemolytic, and 5 Streptococcus bovis showed β hemolytic. Both Streptococcus lutetiensis and Streptococcus gallolyticus caused the experimental mice mild diarrhea. The isolated 14 Streptococcus bovis were sensitive to penicillin, cefotaxime, vacomycin, acetylspiramycin, ciprofloxacin, rifampicin, teicoplanin, ampicillin and gentamicin, and highly tolerant to streptomycin, kanamycin, lincomycin, erythrocin, tetracycline and clindamycin.This study illustrated the biological characteristics of the isolated Streptococcus bovis from yak, which made the basis for the prevention and control of diseases caused by Streptococcus bovis.     

Extracellular proteins and virulence in Streptococcus bovis isolates from pigeons

The association between virulence and the occurrence of the extracellular proteins A, T1, T2 and T3 in the culture supernatant of pigeon Streptococcus bovis strains, was examined in experimental infection studies. Fourteen groups of 10–17 pigeons were inoculated intravenously with 1 × 10⁹ CFU of S. bovis strains that belonged to the phenotypes A ⁺T1, A ⁻T1, A ⁺T2, A ⁻T2, A ⁺T3 and A ⁻T3, respectively. The overall postinoculation morbidity in the phenotype groups was 85%, 87%, 70%, 5%, 100% and 37%, respectively. These results indicate that strains producing A or T1 are of high virulence, those producing T3 only are of moderate virulence and those producing T2 are of low virulence. Virulence of S. bovis for pigeons was more clearly correlated with supernatant-phenotype than with serotype.