扁桃休眠茎尖包埋玻璃化超低温保存的初探

[目的]研究包埋玻璃化法对扁桃休眠茎尖超低温保存的影响,为扁桃资源的超低温保存提供理论依据.[方法]采用不同预培养蔗糖浓度和预培养时间、不同装载液处理时间、不同玻璃化液处理时间及不同化冻方式对莎车14号扁桃休眠茎尖包埋玻璃化超低温保存存活率进行比较.[结果]将低温贮藏的扁桃休眠茎尖剥成1～2 mm,用3;的海藻酸钠包埋,在含0.4 mol/L蔗糖的0.1 mol/L CaCl2溶液中固定30 min后形成包埋丸,用含有0.5 mg/L蔗糖的MS培养基预培养3d,放入装载液(MS+2 mol/L甘油+0.4 mol/L蔗糖)中处理20 min,0℃下用PVS2处理30 min后迅速投入液氮,超低温保存24 h后取出,放入40℃水浴锅中化冻1～2 min,用1.2 mg/L蔗糖的MS洗涤液洗涤20 min,转入含0.3 mg/L 6-BA和0.3 mg/L IAA的MS培养基中培养,存活率达45;.[结论]包埋玻璃化法能够提高莎车14号扁桃休眠茎尖超低温保存的存活率.     

木薯茎尖包埋-玻璃化法超低温保存及植株再生

主要探讨装载时间、蔗糖浓度、预培养时间和PVS2处理时间对木薯种质超低温保存后成活率的影响.结果表明,长约1.5 mm的木薯茎尖用海藻酸钙包埋后,在含有2 mol.L-1甘油和0.4 mol.L-1蔗糖的装载液装载30～40 min,然后在含有0.5mol.L-1蔗糖的改良MS培养基上预培养2 d,0℃下PVS2处理4 h后快速投入液氮(LN),1 h后取出,在40℃水浴中化冻90 sec,用含有1.2 mol.L-1蔗糖的改良MS培养液洗涤20 min,接种于恢复培养基中(MS 0.02mg.L-1NAA),暗培养3～5 d,转移至正常光下,最高成活率接近70%;再生植株生长和分化正常.     

柿休眠芽茎尖包埋玻璃化法超低温保存及植株再生

主要探讨蔗糖浓度、装载时间和PVS2处理时间对部分中国甜柿种质超低温保存后成活率的影响。结果表明,长约1 mm的柿休眠芽茎尖用海藻酸钙包埋后,在含有0.3 molL-1蔗糖的改良MS培养基(KNO3和NH4NO3减半)上预培养1 d,室温(25℃)下PVS2处理2 h后快速投入液氮(LN),1 h后取出,在40℃水浴中化冻1～2 min,用含有1.2 molL-1蔗糖的改良MS培养液洗涤20 min,接种于含ZT(玉米素)2.2 mgL-1、PVP(聚乙烯吡咯烷酮)600 mgL-1的改良MS培养基,暗培养3～5 d,转移至正常光下,最高成活率接近100%;再生植株生长和分化正常。     

菠萝茎尖玻璃化法超低温保存及植株再生

以菠萝为试材,建立试管无性系,进行玻璃化法超低温保存及植株再生研究,结果表明,约2.0 ～3.0 cm的菠萝茎尖于含有0.Smol/L蔗糖的培养基上预培养l～2d,剥取含1～2片叶原基(1.0～2.5 mm长)的茎尖,室温(25℃)下用LS装载液预处理50min,再用PVS2溶液于0℃下处理40 min,换入新鲜的PVS2溶液后迅速投入液氪,保存24h后在40℃水浴中迅速化冻90 s,用1.2 mol/L的蔗糖培养液洗涤2次,每次10 min,然后转入含0.3 mol/L蔗糖的MS培养基上,暗培养48 h后转入含BA 0.5 mg/L的MS培养基上,暗培养1周后转移到正常光下,4个菠萝品种(澳大利亚卡因、夏威夷、巴厘、台农16号)的成活率分别为96.5％、95.3％、78.6％、87.7％,再生率分别为93.2％、92.6％、76.7％、87.7％.再生植株生长和分化正常,其形态上与对照一致,生根后可移栽成活.     

梨离体茎尖超低温保存方法的比较研究

以梨为试材，从操作程序、存活率、再生方式及恢复生长速度等方面对3种超低温保存方法进行了比较研究。结果表明，采用简单玻璃化法超低温保存梨离体茎尖的效果最佳。     

冬凌草试管苗茎尖玻璃化法超低温保存及植株再生研究

对冬凌草[Rabdosia rubescens(Hemsl.)Hara.]试管苗茎尖进行了玻璃化法超低温保存及植株再生研究。结果表明:1～2cm嫩梢在培养基MS+0.5mol/L蔗糖上培养3d,切取2～3mm茎尖,室温(20℃)下装载液(60%PVS2)过渡30min,0℃下玻璃化液(PVS2)处理45min,投入液氮保存1d后,40℃水浴化冻,1.2mol/L蔗糖的MS培养基洗涤20min,接种于6-BA0.8mg/L、IAA0.05mg/L的MS培养基上,暗处理1周后转到正常光下,成活率达到86%,再生植株生长和分化正常。     

马铃薯茎尖超低温保存研究

以马铃薯栽培品种甘农薯1号的试管苗为材料,进行了茎尖超低温保存技术的研究,结果表明,预培养3～4 d,用玻璃化溶液PVS2室温下处理20～30 min,直接投入液氮中冷冻保存,然后接种在MS添加2.50 mg/L KT、1.25 mg/L IAA和1.25 mg/L 6-BA的培养基上,经过恢复培养,茎尖成活率可达42.8%.     

高山红景天(Rhodiola sachalinensis A.Bor)茎尖包埋-玻璃化法超低温保存与植株再生

使用包埋-玻璃化法对两种来源的高山红景天茎尖进行超低温保存研究,探讨蔗糖预处理、包埋过程中渗透处理和不同温度下玻璃化液PVS2处理的时间对超低温保存后茎尖存活率的影响.结果表明,茎尖依次在0.3、0.5、0.7、1.0 mol.L-1的蔗糖溶液中各预培养1 d后,转入1.0 mol.L-1的蔗糖溶液中继续培养4 d,然后使用附加2 mol.L-1甘油和1 mol.L-1蔗糖的包埋液渗透处理60 min,包埋珠在0℃处理180～210 min后投入液氮,48 h后用40℃水浴快速化冻3 min,用合有1 mol.L-1蔗糖的改良MS培养液洗涤20 min,转入MS+6-BA 1 mg.L-1+NAA 0.1 mg.L-1固体培养基中在22℃条件下进行暗培养,2 d后转移入光照培养,最高成活率接近100%,再生植株生长和分化正常.     

欧李茎尖玻璃化法超低温保存及植株再生

对欧李(Cerasus humilis)茎尖进行了玻璃化法超低温保存及植株再生研究,结果表明,预培养对欧李茎尖超低温保存有一定的影响,茎尖在含有0.5 mg.L-1BA和2 M甘油的B 5培养基上室温(25℃)下预培养3 d成活率最高;最佳预处理时间为60%PVS2处理10~20 min,玻璃化液(PVS2)处理时间为0℃下60 min.在优化的保存条件下,植株再生率达83.9%,再生植株生长和分化正常.这是欧李超低温保存成功的首例报道.     

紫参薯的包埋玻璃化超低温保存

以紫参薯带芽茎段为材料,采用2%海藻酸钠和0.1mol/L氯化钙凝胶系统制备包埋珠,液氮保存,以茎段细胞活力和包埋珠成活率为指标筛选获得有关参数适宜水平,比较冻后再生苗与常温苗形态及生理指标.结果表明:紫参薯试管苗经4℃锻炼6d后,无菌条件下制备其带芽茎段包埋珠,接种到MS+2 mg/L KT+0.2 mg/L NAA+0.5mol/L蔗糖液体培养基中预培养1d,转入MS+2 mol/L甘油+0.4 mol/L蔗糖溶液中室温下装载40min,在玻璃化保护剂PVS2中脱水40min,更新PVS2后迅即液氮保存,24h后置于37℃水浴中化冻5min,用MS+2mg/L KT+0.2mg/L NAA+0.8mol/L蔗糖溶液洗涤3次(每次10min),然后转入MS+2mg/L KT+0.2mg/L NAA+30g/L蔗糖+1g/L活性炭固体培养基中,暗培养7d后转至光照下培养14d,该包埋珠成活率可达60%.冻后再生苗诸多形态和生理指标与常温苗差异不具有统计学意义.     

罗汉果茎尖玻璃化法超低温保存初探

对罗汉果试管苗茎尖玻璃化法超低温保存进行了初步研究。结果表明,切取继代15 d生长健壮的罗汉果试管苗茎尖,长2~3 mm,在25℃下用60%PVS2(玻璃化保护液)预处理40 min,再用100%PVS2在0℃处理50 min,更换新鲜PVS2后投入液氮保存24 h,于40℃水浴中快速解冻2 min,用MS+410.8 g/L蔗糖的液体培养基洗涤40 min,滤纸吸干后接种到MS+1.0 mg/L6-BA+0.05 mg/L NAA+0.1 mg/L GA3+0.7%琼脂粉+45 g/L蔗糖的固体培养基上,25℃暗培养7 d,转入正常光下培养。1周时的存活率最高可达94.56%。     

包埋玻璃化法超低温保存灰杨休眠茎尖的研究

采用包埋玻璃化法,对灰杨休眠茎尖进行了超低温保存研究。将灰杨休眠茎尖包埋在含3%褐藻酸钙的胶球中,研究了预培养中的蔗糖浓度、培养时间和不同玻璃化保护液处理时间对灰杨休眠茎尖存活率的影响。结果表明:含灰杨茎尖的胶球在0.8 mol/L的蔗糖溶液中培养24 h,可获得较高的存活率;胶球经玻璃化保护液[40%甘油+45%(0.4 mol/L)蔗糖+10%聚乙二醇(分子量4 000)+5%二甲基亚砜]在25℃处理20 m in,可以显著提高其存活率,在优化条件下存活率可高达58.3%。     

树莓茎尖玻璃化法超低温保存及植株再生研究

为了建立适于树莓茎尖的超低温保存技术程序,试验以树莓茎尖为试材,对树莓玻璃化法超低温保存进行了研究。结果表明适于树莓的超低温保存技术流程是先低温驯化21d,在含0.8mol/L蔗糖的固体培养基预培养4d,再经玻璃化液(PVS2)处理120min后浸入液氮,解冻后茎尖存活率达75%。     

柿休眠芽茎尖玻璃化法超低温保存及植株再生

 对柿 (DiospyroskakiThunb .)休眠芽茎尖进行了玻璃化法超低温保存及植株再生研究 ,结果表明 ,1.5～2 .0mm茎尖在含有 0 .3、0 .5和 0 .7mol·L-1蔗糖的改良MS培养基 (KNO3 和NH4NO3 减半 )上预培养各 1d ,室温(2 0℃ )下装载液 (2mol·L-1甘油 ,0 .4mol·L-1蔗糖 )停留 2 0min ,0℃下玻璃化液 (PVS2 或PVS3 )处理 30～ 4 0min ,投入液氮保存 1d后 ,4 0℃水浴化冻 1min ,含蔗糖 1.2mol·L-1的改良MS培养基洗涤 2 0min ,接种于含 0 .2mg·L-1CPPU、1mg·L-1BA、0 .0 5mg·L-1IAA、5 0 0mg·L-1可溶性PVP、30g·L-1蔗糖和 7g·L-1琼脂的改良MS培养基 (再生培养基 )表面的滤纸上 ,暗处理 1d后转移到新鲜的上述再生培养基中 ,暗培养 1周后转到正常光下 ,成活率高达 70 .2 % ,再生植株生长和分化正常。本研究结果为柿种质的长期保存提供了新途径。     

包埋玻璃化法超低温保存沙生柽柳休眠茎尖的研究

[目的]采用包埋玻璃化法,对沙生柽柳休眠茎尖成功地进行冷冻保存。[方法]将沙生柽柳休眠茎尖包埋在含3%褐藻酸钙的胶球中,研究了预培养中蔗糖浓度、培养时间和不同玻璃化保护液处理的时间对沙生柽柳休眠茎尖存活率的影响。[结果]含沙生柽柳茎尖的胶球在0.8mol/L蔗糖溶液中培养24h可获得较高的存活率;胶球经玻璃化保护液[40%甘油＋45%（0.4mol/L）蔗糖＋10%聚乙二醇（分子量4000）＋5%二甲基亚砜]在25℃处理20min可以明显提高存活率,在优化条件下存活率可高达48.3%。[结论]蔗糖浓度和预培养时间是决定沙生柽柳茎尖存活率的关键因素。     

玻璃化法超低温保存甘薯茎尖

对甘薯离体茎尖玻璃化法保存技术进行了初步探究。结果表明,预培养2 d,100%的PVS2溶液0℃处理30 min,液氮冻存2 d,40℃快速化冻后用附加蔗糖1.2 mol/L的MS液体培养基洗涤20 min,接种在MS 6-BA1.5 mg/L NAA0.1 mg/L GA30.05 mg/L培养基上的茎尖成活率最高。     

马铃薯茎尖玻璃化法超低温保存技术研究

为构建马铃薯茎尖玻璃化法超低温保存体系,以6个马铃薯品种为试验材料,研究了预培养时间、茎尖大小、玻璃化液、玻璃化液处理时间及恢复培养基对马铃薯存活率和再生率的影响。结果表明:茎尖大小为1mm左右时,预培养24h后,于PVS2玻璃化液中浸泡30 min,而后转入MS+0.5 mg·L-1 Zeatin+0.10mg·L-1 NAA+1.0mg·L-1 GA3培养基中培养,其成活率和再生率最高。     

月季茎尖玻璃化法超低温保存技术研究

研究月季茎尖玻璃化法超低温保存技术,以期为月季茎尖超低温保存提供理论和实践依据.试验选用金奖章、粉玛雅、韩红、博共4个月季品种进行简单玻璃化法和玻璃化超低温保存试验.结果表明:简单玻璃化法保存时.不同品种的茎尖存活率差异显著,金奖章的茎尖存活率最高(55.3%);通过研究预培养、装载处理和植物玻璃化溶液PVS2脱水时间对粉玛雅茎尖存活率的影响,初步构建了月季茎尖玻璃化法超低温保存体系,即将长1.0cm的茎尖在含0.3mol·L-1蔗糖的培养基上预培养5～6d后,取1.5mm茎尖,室温下A液(MS+2mol·L-1甘油+0.4mol·L-1蔗糖)装载40min或B液[60%PVS2+40%(MS+0.15mol·L-1蔗糖)]装载30min,用PVS2(300g·L-1甘油+150g·L-1乙二醇+150g·L-1二甲基亚砜+0.4mol·L-1蔗糖+MS)于0℃下处理40min,然后液氮保存24h,在40℃水浴中化冻90s,用1.2mol·L-1蔗糖培养液洗涤,最后转入MS+6-BA1.0mol·L-1+IBA0.1mol·L-1上再培养,存活率高于53.3%.     

江西山药茎尖包埋玻璃化法超低温保存及其遗传稳定性检测

采用植物组织培养法对广丰药薯茎尖的包埋玻璃化法超低温保存程序进行优化,并采用扩增片段长度多态性（AFLP）分子标记法和流式细胞术对其冻后再生苗的遗传稳定性进行检测,同时将超低温程序应用到江西山药其他地方品种,旨在为薯蓣属植物种质资源的长期保存奠定理论基础。结果表明,广丰药薯茎尖预培养的较佳时间为5 d,较佳的蔗糖浓度为0.75 mol·L-1;装载的较佳时间为40 min;脱水的较佳温度为0 ℃,较佳时间为60 min;冻后黑暗培养7 d可以显著提高其成活率。用AFLP分子标记法和流式细胞术对茎尖冻后再生植株的遗传稳定性进行检测,没有发现异常条带和染色体倍性变化,气孔观察也未发现叶下表皮气孔参数的显著变异。将这种超低温保存程序用于江西山药其他基因型,成活率约为40%～85%。该研究建立的包埋玻璃化法超低温保存程序能保证江西山药的遗传稳定性,可为建立江西山药种质资源超低温保存库提供一定的技术支撑。