棉花黄枯萎病拮抗菌株的筛选及抗菌蛋白的分离纯化研究

从棉花植株根部筛选的108株芽孢杆菌中,通过对棉花黄枯萎主要病原菌大丽轮枝菌拮抗效果的复筛,分离到一株LC-105菌株,其抑菌圈达到20 mm以上;本研究从该菌株的发酵代谢产物中,分离出活性拮抗物质,进一步通过DEAE-Sephadex A-50离子交换层析和Sephacryl-S100凝胶层析对其代谢产物进行了分离纯化,证明该拮抗物质为一种蛋白质,最后通过聚丙烯酰胺凝胶电泳证实了所分离物质的纯度达到电泳纯.     

乳链菌肽的发酵及分离纯化工艺研究进展

乳链菌肽(Nisin)是由乳酸乳球菌代谢产生的细菌素,是一种天然、安全的生物防腐剂,被广泛应用于食品工业中。本文论述了近年来国内外乳链菌肽发酵及分离纯化工艺的技术概况,并对生产过程中存在的问题进行了分析。     

土霉素菌种的自然分离 纯化及鉴定

以土霉素产生菌龟裂链霉菌(Streptomycesrimosus)D-7号为出发菌株,经自然分离,纯化处理后,再经摇瓶初筛、复筛获得高效价菌株10号,其摇瓶效价提高12.6%。经传代实验表明,该高产菌株遗传性能较为稳定。在15m罐上生产试验,与出发菌株相比,发酵效价提高7.18%,发酵总亿提高5.48%。3     

虎奶菇菌核多糖SHNP的分离纯化及形貌观测

利用DEAE-52纤维素柱层析和Sephadex G-1500凝胶柱层分离纯化热水浸提的虎奶菇菌核多糖,得到组分SHNP。利用紫外分光光度计和高效液相色谱鉴定其纯度,高效液相色谱测其分子量,气相色谱法进行单糖组成分析,环境扫描电镜观测了其分子形貌。结果显示, SHNP的分子量为1.463×106 Da,为只含葡萄糖的大分子葡聚糖,环境扫描电镜显示SHNP固体聚集体表面形貌较为规则、平整光滑且呈现排列紧密的片状和杆柱状结构。     

牛骨骼肌G-肌动蛋白的分离纯化及超高压处理对G-肌动蛋白的影响

对破碎后的冷却牛肌肉,经匀浆、过滤、丙酮抽提,制成粗肌动蛋白干粉,并将其多次超速离心、透析、DEAE—52离子交换层析而进一步纯化进行研究。经SDS—PAGE检测得到高纯度的G-肌动蛋白,其分子质量约为42kDa,分别采用100,200,300,400MPa超高压处理,并保压5min。SDS—PAGE检测结果表明,随着压力的升高,肌动蛋白质条带下面出现暗带,颜色逐渐加深。暗带的出现可能与超高压处理后蛋白质降解成小分子量的蛋白质或多肽等物质有关,这为超高压对蛋白质结构的影响提供了理论依据。     

苏云金杆菌Cry8Ea2蛋白的分离纯化及生物活性测定

Cry8Ea2蛋白是一种新型苏云金杆菌杀虫晶体蛋白。通过穿梭载体pSXY422b将cry8Ea2导入Bt无晶体突变菌株中,获得工程菌HD8Ea2。Cry8Ea2蛋白在工程菌中获得表达。通过分子筛层析,成功获得纯化的130 kDa活性毒素蛋白。用改进的生物活性测定方法进行Cry8Ea2蛋白对华北大黑鳃金龟和暗黑鳃金龟一龄幼虫的杀虫活性测定,LC50分别为0.267 9μg/mL和0.071 9μg/mL。研究首次发现Cry8Ea2蛋白对华北大黑鳃金龟具有较高毒力,拓展了该蛋白的杀虫谱,为转基因工程提供了新资源。     

用大孔吸附树脂对洋蓟茎叶中绿原酸及洋蓟素分离纯化的研究

筛选大孔树脂分离纯化朝鲜蓟茎叶中绿原酸及洋蓟素的最佳工艺,为后续研究及工业化大生产提供指导。以大孔树脂对绿原酸及洋蓟素的吸附率和解吸附率为指标筛选树脂种类,以上样速度、上样液中绿原酸与洋蓟素的质量浓度为指标,考察不同条件下AB-8大孔树脂对洋蓟茎叶提取液中绿原酸及洋蓟素分离纯化;以固体物中绿原酸及洋蓟素的质量浓度为指标,确立洗脱用乙醇的浓度及洗脱方式;采用HPLC法测定绿原酸及洋蓟素的含量。试验结果表明,选择AB-8大孔树脂,最佳纯化工艺为上样液绿原酸与洋蓟素的质量浓度分别为0.62,0.42 mg/mL,上样速度为1 BV/h;最佳洗脱方式是:用3倍柱体积的水洗涤除杂,再分别用2倍柱体积10%和75%的乙醇依次洗脱,最后用1倍柱体积的纯水冲洗,收集洗脱液与水洗液。HPLC法测定绿原酸及洋蓟素的质量分数分别为5.5%,4.6%。AB-8大孔树脂对洋蓟茎叶中绿原酸及洋蓟素分离纯化的综合性能较好,适合于工业化大生产,并符合市售产品要求。     

D-101大孔树脂对香椿叶中黄酮类成分的分离纯化及抗氧化活性研究

为充分利用香椿老叶,用D-101大孔吸附树脂对香椿叶中黄酮类成分进行分离纯化。以黄酮类成分的吸附率、洗脱率及黄酮纯度为指标,研究D-101大孔树脂对香椿中黄酮类成分的吸附能力及其稳定性。同时用清除1,1-二苯基苦基苯肼(DPPH)自由基的能力对香椿叶中黄酮类成分的抗氧化能力进行评价。结果表明,D-101大孔树脂的最佳上样条件为香椿浸提液上样量5 BV,黄酮类成分浓度0.69 mg/mL,流速3 BV/h。最适洗脱条件为70%乙醇洗脱剂,洗脱剂用量5 BV,流速3 BV/h。树脂使用1次时,可将香椿中黄酮类成分的纯度由6.0%提升到45.14%,且树脂稳定性良好,可重复使用6次后再生。经大孔树脂分离纯化后的黄酮类成分具有很强的抗氧化能力,为抗坏血酸的1.33倍。