黑脊倒刺鲃的人工繁育技术

<正>倒刺鲃属鱼类属于鲤科鲃亚科,属内有5种,分别为黑脊倒刺鲃、中华倒刺鲃、倒刺鲃、云南倒刺鲃、多鳞倒刺鲃,其中黑脊倒刺鲃也叫光倒刺鲃,在福建俗称光鱼、粗鳞。此属鱼类易给人的错觉:被认为是草鱼。目前,有关倒刺鲃属鱼类的研究报道主要是前3种(黑脊倒刺鲃、中华倒刺鲃、倒刺鲃),分布于我国南方乃至西南地区诸水系。3个种各有特点:中华倒刺鲃生长速度中等,绝对怀卵量大,雌鱼性成熟年龄4龄~5龄;倒刺     

刺参vasa-1ike基因克隆及其在组织中的表达分析

vasa基因编码DEAD-box家族成员中一种ATP依赖的RNA解旋酶,在生殖系分化过程中发挥着重要的作用。本研究采用同源克隆和cDNA末端快速扩增技术（RACE）,从刺参（Apostichopus japonicus）精巢中克隆得到vasa的全长cDNA序列。该cDNA序列全长2167bp,开放阅读框1593bp,编码530个氨基酸,具有DEAD-box家族蛋白的全部9个保守域。经同源比对和系统进化分析,确定其属于DEAD-box家族的VASA亚家族成员。利用半定量RT-PCR检测,vasa mRNA专一性的在刺参性腺中表达,据此,刺参vasa基因有望用于其生殖系起源和分化的研究。[中国水产科学,2008,15（3）：407-413]     

黑脊倒刺鲃人工批量育苗技术总结

黑脊倒刺鲃 Spinibarbus caldwelli (Nichols) 主要分布于我国长江以南的淡水水域中,曾是福建省闽江等水系的重要经济鱼类之一.近年来,黑脊倒刺鲃的养殖已形成一定的规模,但由于黑脊倒刺鲃特殊的繁殖习性,致使人工育苗量较小,难以适应规模化养成需求.     

黑脊倒刺鲃成鱼池塘养殖技术要点

黑脊倒刺鲃（Spinibarbus caldwelli)是我国南方溪河的优质鱼类之一，近年来福建省建瓯市正推广人工养殖黑脊倒刺鲃，并已取得较好的经济效益。黑脊倒刺鲃既适宜池塘(土池、水泥池)单养或混养，又适合水库网箱养殖和小水库放养和增殖放流。     

黑脊倒刺鲃苗种培育和养成技术

黑脊倒刺鲃(Spinibarbus caldwelli)是我国南方溪河的优质鱼类之一,近年来建瓯市积极推广人工养殖黑脊倒刺鲃,并已取得较好的经济效益.现将有关养殖技术总结如下:     

池塘培育野生黑脊倒刺鲃苗种关键技术

黑脊倒刺鲃亦称光倒刺鲃,俗称光鱼、溪魁、粗鳞等,属鲤形目,鲤科,鲃亚科,倒刺鲃属,主要分布在钱塘江、闽江、珠江、沅江等,为重要淡水经济鱼类。黑脊倒刺鲃肉质鲜美,并且有一定药用价值,抗病力强,易于养殖和运输,是一种极具开发潜力的品种,深受福建地区广大养殖户、特别是网箱养殖户的青睐。     

黑脊倒刺鲃的繁殖与养殖技术

黑脊倒刺鲃巴主要分布于钱塘江、闽江、珠江、沅江、海南岛等，为产区重要的经济鱼类。本文就其生物学特性、人工繁殖及养殖技术进行了阐述，为黑脊倒刺鲃这一优质经济鱼类的种质资源保护及规模化养殖提供参考。     

黑脊倒刺鲃胚胎发育研究

黑脊倒刺鲃(Spinibarbus caldwelli Nichols)属鲤形目、鲤科、鲃亚科、倒刺鲃属,主要分布于钱塘江、闽江、珠江、沅江、海南岛等内陆河流及其支流中,为产区重要的经济鱼类.     

3种倒刺鲤鱼种阶段主要经济性状的比较

通过水泥池和土池两种培育模式的试验,对3种倒刺鲃鱼种阶段的主要经济性状进行比较.试验表明:倒刺鲃的体重日增长率最高,其次是中华倒刺鲃,黑脊倒刺鲃最低;起捕率比较,倒刺鲃>黑脊倒刺鲃>中华倒刺鲃;土池培育时,倒刺鲃的规格整齐度最高,其次是中华倒刺鲃,黑脊倒刺鲃的大小分化最明显;土池培育方式更适合倒刺鲃属3个种的鱼种培育.     

3种倒刺鲃鱼种阶段主要经济性状的比较

通过水泥池和土池两种培育模式的试验,对3种倒刺鲃鱼种阶段的主要经济性状进行比较。试验表明：倒刺鲃的体重日增长率最高,其次是中华倒刺鲃,黑脊倒刺鲃最低;起捕率比较,倒刺鲃〉黑脊倒刺鲃〉中华倒刺鲃;土池培育时,倒刺鲃的规格整齐度最高,其次是中华倒刺鲃,黑脊倒刺鲃的大小分化最明显;土池培育方式更适合倒刺鲃属3个种的鱼种培育。     

草鱼HSP70基因cDNA部分序列克隆及其组织表达差异

根据鲤热休克蛋白70(Heat shock protein,HSP70)序列(AY120894)设计并合成一对引物,以草鱼(Cteno-pharyngodon idella)肝胰脏组织总RNA为模板,RT-PCR扩增获得草鱼HSP70基因cDNA部分序列,并进行了组织表达差异性研究。结果显示:所获为序列为480 bp,获得GeneBank登陆号为FJ483832。序列测序结果显示,HSP70扩增序列与鲤、斑马鱼、鲋的同源性为:93%、91%、93%。另外,所获序列HSP70在草鱼脂肪、肌肉、肠、脑、粘液、性腺、鳔、肝胰脏、心脏、脾脏、鳃、鳍12个组织的表达存在差异,HSP70在草鱼这12个组织中均检测到表达,其中在鳍中表达最高,极显著高于其他组织(P<0.01);在鳔中表达次之,且与脑、心脏、性腺中表达差异不显著;在粘液中表达最低。     

日本沼虾DEAD-box家族基因vasa和PL10的克隆及其在卵巢发育过程中的表达

vasa和PL10同属于DEAD-box基因家族,具有依赖ATP的RNA解螺旋酶活性。本研究中,克隆了日本沼虾DEAD-box家族的两个成员,分别为vasa(Mnv-asa)和PL10(MnP-L10)。其中Mn-vasa全长2 408bp,包含1 803 bp的开放阅读框,编码601个氨基酸;Mn-PL10全长2 607 bp,包含2 127 bp的开放阅读框,编码709个氨基酸。成体组织的组织检测表明,Mnv-asa仅在性腺中表达,而Mn-PL10在性腺和其他器官中均有表达。Mn-vasa和MnP-L10在卵巢的原位杂交结果显示:Mn-PL10和Mnv-asa都在卵黄发生前期,卵黄发生期的早期和中期表达,而在卵黄积累末期不表达,但Mn-PL10在卵黄发生中期定位于卵母细胞的两端,而Mn-vasa则是均匀的分布在卵母细胞细胞质中。     

鲫胰岛素样生长因子-ⅠcDNA克隆及序列分析

利用One-Step RT-PCR技术,从鲫(Carassius auratus)肝胰脏组织中克隆了胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ),并进行了序列分析。结果表明,鲫IGF-ⅠcDNA由486个核苷酸组成,编码包括信号肽、成熟肽(B、C、A、D四个域)和E域的161个氨基酸。核苷酸同源性分析揭示,鲫IGF-ⅠcDNA序列与金鱼的同源性最高,为99.18%;与鲮、三角鲂、团头鲂的同源性次之,分别为94.44%、94.65%、94.44%;与鲤、草鱼的同源性相对较低,为86.03%和85.29%。E区域的分析结果表明,鲫IGF-Ⅰ序列为Ea-2亚型。     

Molecular cloning of CD4 from ginbuna crucian carp <Emphasis Type="Italic">Carassius auratus langsdorfii</Emphasis>

ABSTRACT:   The clonal triploid ginbuna crucian carp Carassius auratus langsdorfii , a naturally occurring gynogenetic fish, is a useful model for studying T-cell-mediated immunity. CD4, a T-cell receptor (TCR) coreceptor, is a membrane-bound glycoprotein found on helper T-cells, and assists in the binding of major histocompatibility complexes. In the present study, full-length cDNAs encoding the CD4 molecule from the S3n strain of ginbuna crucian carp were cloned and characterized. 5'-rapid amplification of cDNA ends (RACE) and 3'-RACE yielded two distinct cDNA clones of CD4 homolog from the ginbuna, and these sequences share 95% identity at the amino acid level. These ginbuna CD4 molecules consisted of a signal peptide, immunoglobulin superfamily (IgSf) like domains, a transmembrane domain, and a cytoplasmic domain similar to other known CD4. A tyrosine protein kinase p56^lck binding motif is conserved in the cytoplasmic tail of ginbuna CD4. Phylogenetic tree analysis indicated that ginbuna CD4 sequences are closely related to CD4L-1 from other fish species. Expression of ginbuna CD4 mRNA was detected in the gill, thymus, head kidney, trunk kidney and peripheral blood leukocytes, indicating that its expression pattern is similar to that of ginbuna TCRβ mRNA. The results suggest that ginbuna CD4 sequences are useful as molecular probes for helper T-cells.     

缩骨鲫MSTN基因的克隆与组织表达分析

采用同源克隆、生物信息学方法及荧光定量PCR(Real-time PCR)对缩骨鲫(Carassius auratus sogu var.)肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)基因进行克隆,分析和组织表达状况研究。结果显示:缩骨鲫基因组MSTN基因全长4 737 bp,含有两个内含子和三个外显子;编码区长度为1 128 bp,编码375个氨基酸,包括信号肽(1aa~23aa),TGF-β前肽保守区域(34aa~256aa),TGF-β功能区(281aa~375aa),保守的RXXR蛋白酶酶切位点以及C-端活性区域9个保守的半胱氨酸残基,这与其他物种MSTN相似。此外,缩骨鲫与鲫鱼(Carassius auratus)的MSTN氨基酸序列同源性最高,达到96.1%。以β-actin为内参基因,荧光定量PCR分析表明,MSTN在肌肉中表达量最高;脑、眼、心脏中次之;在肝胰脏、卵巢、肠和肾脏中微量表达。     

中华绒螯蟹眼柄神经多肽激素的分离纯化及活性鉴定

采用RACE-PCR技术结合SMART cDNA合成技术，从银鲫中克隆到Ran的全长cDNA并对其编码区全长进行了原核表达、相应抗体制备及其时空表达特征分析。RT-PCR结果表明，Ran基因除在脑组织的转录水平较低外，其它组织中的转录水平几乎相同；Ran基因在不同发育阶段的胚胎中都有mRNA转录。但其mRNA的量在原肠期以后呈下降趋势。Western blot结果表明，Ran在卵巢和精巢中均高水平表达，在心、脑、肝、脾、肾中有较低水平表达，在肌肉中则不表达。同时检测到Ran在不同胚胎发育阶段均有较强表达。这表明，Ran基因在银鲫中可能起着多种作用，尤其在生殖细胞的发生中具有重要作用。最后，采用免疫耗竭对该基因编码的蛋白在精核解凝中的作用进行了初步研究，结果表明，Ran蛋白可能与精核解凝相关。     

淇河鲫IL-8原核表达系统的构建及多克隆抗体的制备与鉴定

为揭示淇河鲫(Carassius auratus var.Qihe)白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8)的功能,本研究构建了原核表达系统,并制备了兔抗鲫IL-8多克隆抗体。首先采用RT-PCR法扩增淇河鲫IL-8基因编码序列中不含信号肽的基因片段,克隆到pET-32a(+)载体后转化入Rosetta菌株构建原核表达系统。经IPTG诱导表达出相对分子质量约27.8 kD的目标融合蛋白。将纯化的融合蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,效价达1︰10~5。经免疫亲和层析纯化的抗体能特异性识别重组和天然的淇河鲫IL-8蛋白。比较不同组织的免疫组化和荧光定量PCR结果,IL-8蛋白量和mRNA的表达量在不同组织间变化趋势一致,在肌肉、脾和头肾均检测到较高的表达量,肠道的表达量较低。本研究为进一步探讨淇河鲫IL-8的生物学功能奠定了基础。     

青鲫sIgZ重链基因的克隆及对嗜水气单胞菌的免疫响应

免疫球蛋白是鱼类适应性免疫中主要的效应因子之一, 研究鱼类免疫球蛋白对鱼类疾病的免疫防控尤为重要。本研究利用 PCR 与 RACE 技术克隆获得青鲫(Carassius auratus indigentiaus)分泌型免疫球蛋白 Z (secretory immunoglobulin Z, sIgZ)重链基因 cDNA 全长序列 (基因序列登录号: MZ274344.1), 青鲫 sIgZ 重链基因 cDNA 序列全长 2083 bp, 其开放阅读框长 1668 bp, 编码一条由 556 个氨基酸组成的肽链, 相对分子质量为 61.59 kD, 理论等电点为 7.03。青鲫 sIgZ 重链基因结构由 1 个可变区(VH), 4 个恒定区(CH1-CH4)以及 1 个分泌型的尾部(secretory tail, Sec tail)构成。在 GenBank 中进行同源序列检索, 青鲫 sIgZ 氨基酸序列与其他鱼类 IgZ 的相似性依次为团头鲂 (Megalobrama amblycephala) (63.17%)、草鱼(Ctenopharyngodon idella) (60.82%)、鲤(Cyprinus carpio carpio) (52.98%)、虹鳟(Oncorhynchus mykiss)(37.06%)和金头鲷(Sparus aurata)(35.01%)。利用 MEGA 5.1 软件进行多重序列比对分析, 采用邻接法构建遗传系统进化树, 发现青鲫 sIgZ 基因与同属鲤科(Cyprinidae)鱼类的 IgZ 聚为一支, 青鲫 sIgZ 与团头鲂的 sIgZ 亲源关系最近。通过 qPCR 检测青鲫不同组织中 sIgZ 基因的表达, 发现青鲫头肾中 sIgZ 基因的表达量最高, 中肾、脾和肝脏次之。利用嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)对青鲫进行浸泡感染, sIgZ 在头肾、脾脏、中肾、肝、肠、鳃和皮肤中的表达水平在感染的 28 d 内先升高后降低, sIgZ 的相对表达量在黏膜免疫组织(肠和皮肤)中达到峰值的时间要早于系统免疫组织(头肾和脾脏), 肠和皮肤中 sIgZ 在峰值时的相对表达量显著高于头肾中 sIgZ 在峰值时的相对表达量, 实验结果显示, 青鲫 sIgZ 在肠和皮肤黏膜免疫组织中可能发挥重要的免疫功能。