胆盐水解酶基因的克隆及其在干酪乳杆菌CECT5276中的分泌表达

本试验旨在克隆植物乳杆菌(L.plantarum)DPP8的胆盐水解酶(BSH)基因,并在干酪乳杆菌(L.casei)CECT5276中对其进行表达.通过PCR技术克隆L.plantarum DPP8的BSH基因,然后将该基因重组到L.casei表达载体pMJ67-sp中,获得了重组表达质粒pMJ67-sp-BSH,再...     

胆盐水解酶筛选及酶法提制鸡胆汁酸的研究

试验旨在从常见双歧杆菌筛选获得高活性胆盐水解酶的菌株并用于鸡胆汁酸的提制。从5种常见双歧杆菌菌株(两歧双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、青春双歧杆菌、乳双歧杆菌、长双歧杆菌)中，通过平板Ca²⁺沉淀法及茚三酮法对活性双歧杆菌进行酶活评价，将高活性菌株的粗酶用于鸡胆汁酸的提制，使用薄层色谱法和高效液相法对所制胆汁酸进行定性和定量检测。结果显示：4种双歧杆菌(两歧双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、青春双歧杆菌和乳双歧杆菌)对甘氨型和牛磺型鹅去氧胆酸均具有水解活性，婴儿双歧杆菌对甘氨鹅去氧胆酸和牛磺鹅去氧胆酸比酶活均显著高于其他3种双歧杆菌(P<0.05)，比酶活分别为0.48 U/mg和0.27 U/mg。酶法工艺提制鸡胆汁酸的得率为5.34%，提取物中鹅去氧胆酸(CDCA)含量为70.7%。结果表明：婴儿双歧杆菌具有高活性胆盐水解酶，酶法工艺提制鸡胆汁酸反应条件温和，提取物纯度较高，较为节能环保。     

胆盐水解酶基因在干酪乳杆菌LC2W中的表达

从胆盐水解酶的特性出发,在干酪乳杆菌LC2W中过量表达Lactobacillus plantarum ST-Ⅲ 4种胆盐水解酶同工酶,通过酶活性的测定研究胆盐水解酶对干酪乳杆菌水解胆盐的作用.结果表明:实现了4种胆盐水解酶在干酪乳杆菌LC2W的过表达;利用茚三酮显色法测定的4种重组菌胆盐水解酶活性较宿主LC2W都不同程度地降低;在干酪乳杆菌LC2W中过量表达L.plantarum ST-Ⅲ的胆盐水解酶基因达不到提高该菌水解胆盐能力的目的.     

不同植物乳杆菌对樱桃谷肉鸭生长性能、血浆生化指标、屠宰性能与肌肉品质的影响

试验旨在研究产胆盐水解酶植物乳杆菌对樱桃谷肉鸭生长性能、血浆生化指标、屠宰性能与肌肉品质的影响.选取540只1日龄樱桃谷肉鸭,随机分为3组,1个对照组和2个试验组,每组6个重复,每个重复30只.各组均饲喂基础日粮,2个试验组在饮水中分别添加无胆盐水解酶植物乳杆菌和产胆盐水解酶植物乳杆菌,活菌数含量均为106 cfu/m...     

鸡源乳杆菌的分离鉴定及其益生特性研究

利用选择性培养、革兰氏染色、芽孢染色、糖发酵试验、经典生理生化试验、耐酸和耐胆盐试验等方法,成功地从健康鸡的肠道中分离、鉴定并筛选出1株耐酸和耐胆盐能力较强的乳杆菌,命名为乳杆菌L3株。采用雏鸡安全性试验和肠黏液糖蛋白黏附性试验对乳杆菌L3株的安全性和黏附能力进行检测,证明所筛选的乳杆菌不仅对酸和胆盐的耐受性较好,且具有良好的安全性和肠道黏附能力。     

植物乳杆菌JM113的体外抗氧化能力及其对采食脱氧雪腐镰刀菌烯醇污染饲粮的肉仔鸡保护作用

本试验目的是研究从健康藏鸡肠道内容物分离出的植物乳杆菌JM113的抗氧化能力及其对脱氧雪腐镰刀菌烯醇污染的肉仔鸡保护作用。与植物乳杆菌PZ01和肠球菌M23相比,植物乳杆菌JM113在1.2 mmol/L的过氧化氢下表现出最强的还原性和抗性(P0.05),而且对羟基、超氧化物阴离子、1,1-二苯基-2-苦肼基自由基具有非常好的清除能力(P0.05)。对于每个菌株,活细菌菌株的抗氧化活性比不含细胞的提取物和死细菌菌株更强(P0.05)。为了检测植物乳杆菌JM113在体内抗氧化性能,试验选用192只1日龄爱拔益加肉鸡随机分为4组,每组6个重复,每个重复8只鸡,试验期42d。试验处理为(1)对照组;(2)对照组基础上添加1×109cfu/kg植物乳杆菌JM113;(3)对照组基础上添加10 mg/kg的脱氧雪腐镰刀菌烯醇;(4)在含10 mg/kg的脱氧雪腐镰刀菌烯醇的对照组基础上添加1×109cfu/kg植物乳杆菌JM113。与对照组相比,饲粮添加10 mg/kg的脱氧雪腐镰刀菌烯醇显著降低了试鸡血清中超氧化物歧化酶活性,并增加试鸡空肠粘膜中丙二醛含量(P0.05)。然而在对照组和脱氧雪腐镰刀菌烯醇污染组饲粮中添加植物乳杆菌JM113均显著降低了试鸡空肠粘膜中丙二醛含量(P0.05)。脱氧雪腐镰刀菌烯醇污染组试鸡空肠粘膜中核因子E2相关因子2(Nrf2)的表达水平显著降低(P0.05),而添加植物乳杆菌JM113处理后Nrf2及其相关的下游HO-1基因的转录水平显著升高(P0.05)。添加植物乳杆菌JM113可促进绒毛生长,甚至与脱氧雪腐镰刀菌烯醇联合在一起仍有显著效果(P0.05)。在植物乳杆菌JM113处理组,尤其是脱氧雪腐镰刀菌烯醇污染处理添加植物乳杆菌JM113可显著上调紧密连接蛋白claudin-1的表达(P0.05)。因此,本研究表明植物乳杆菌JM113菌株具有很强的抗氧化能力,添加进脱氧雪腐镰刀菌烯醇污染的饲料可保护肉仔鸡肠道屏障的完整性,减轻脱氧雪腐镰刀菌烯醇对家禽的负面影响。     

功能性益生菌菌种的选育和益生性研究

本研究从新疆、内蒙古分离到30株乳酸杆菌和乳酸球菌,经过鉴定并选择发酵性能较好的菌种进行进一步的研究.经过对益生乳杆菌人工胃肠液耐受性、胆盐耐受性、胆固醇降解能力等益生特性的研究,得出植物乳杆菌BN-3、BN-5、罗伊氏乳杆菌AL3、鼠李糖乳杆菌AL20具有较好的益生特性.     

东北虎肠道降胆固醇乳杆菌的分离鉴定

为了筛选适宜开发降胆固醇保健食品的乳杆菌,试验采用乳杆菌选择培养基(LBS),从东北虎肠道分离、筛选得到10株乳杆菌。采用高胆固醇乳酸杆菌培养液(MRSO-CHOL)对分离菌进行体外降胆固醇试验,并对降胆固醇最高的3株菌进行耐酸及耐胆汁盐试验;对胆固醇降解率高、耐酸、耐胆汁盐的菌株进行形态学、生理生化反应和16S rDNA鉴定。结果表明:从东北虎肠道分离得到的10株乳杆菌,体外均有降解胆固醇的能力,降解率为25.00%～65.00%,平均降解率为45.00%。菌株1胆固醇降解率为55.00%,且耐酸、耐胆汁盐的能力均较强,鉴定其为嗜酸乳杆菌。     

复合果蔬汁促进植物乳杆菌在牛奶中增殖研究

植物乳杆菌能够改善人体肠道微生物菌群,产生生物活性物质,吸附重金属,降低胆固醇,并且具有较强的耐酸、耐胆盐能力。但是,植物乳杆菌属于营养缺陷型细菌,缺乏蛋白质分解酶,利用牛奶中乳蛋白的能力较弱,牛奶无法满足其生长和繁殖需求,植物乳杆菌在牛奶中基本不生长。为了使植物乳杆菌在牛奶中生长,主要采取添加四种复合果蔬汁、协同发酵、改变发酵温度等方法,通过测定pH值、滴定酸度、活菌数来判断植物乳杆菌在牛奶中的生长情况。结果表明,7.5%复合菠萝汁-香蕉浆(1∶1)对植物乳杆菌生长促进作用最好,35℃发酵24 h后,活菌数提高100倍,滴定酸度可以达到100°T。     

乳制品中具有降胆固醇功能乳酸菌的体外筛选

用改良的o-phthalaldehyde法对pH3．0和0．3％牛胆酸钠有一定耐受性的10株乳酸菌的体外降胆固醇活性进行了测定。这些菌在含0．3％胆盐的培养基中，37℃厌氧培养24h后，均表现出较强的降胆固醇活性。胆固醇脱除率从30．4％～43．6％不等。其中鸟肠球菌WZ38—2对胆固醇的脱除率最高；其次为植物乳杆菌WHl3—1和WH23—1。     

干酪乳杆菌YG-01株的益生特性及抑菌活性研究

【目的】评价从奶酪中分离出的干酪乳杆菌YG-01的益生性及抑菌活性,为该菌株在食品动物生产中的应用提供理论参考。【方法】本研究分别检测干酪乳杆菌YG-01株的药物敏感性、肠道定植能力、消化道环境耐受特性、肠道菌群调节作用、抑制肠道致病菌活性及促生长作用。【结果】药敏试验结果显示,干酪乳杆菌YG-01对米诺环素、红霉素、克拉霉素、克林霉素、青霉素等常见抗生素极敏感;利用探针(carboxyfluorescein diacetate, succinimidyl ester, cFDA-SE)标记的干酪乳杆菌YG-01灌喂试验兔,口服后第1天,干酪乳杆菌YG-01在兔空肠、回肠和结肠的检出率分别为70.9%、59.3%和66.0%,口服后第11天时仍保持较高定植水平(>35%);干酪乳杆菌YG-01的活菌数在模拟胃液(pH为2.5、3.5、4.5)、模拟肠液、胆酸盐浓度<2 g/L及在9%NaCl溶液中均高于1×10⁵ CFU/mL;体外抑菌试验结果显示,干酪乳杆菌YG-01能显著抑制大肠埃希菌O157、小肠结肠炎耶尔森菌、沙门菌、志贺菌、副溶血弧菌等肠道致...     

具有益生特性的小尾寒羊肠道正常菌群的分离、鉴定及筛选

为了获得适合生产的羊源益生菌株,本试验从健康成年小尾寒羊肠道内分离出5株菌落形态各异、生长良好的菌株。通过革兰染色、生理生化鉴定及16SrDNA分析,5株菌分别为M1(干酪乳杆菌)、M2(植物乳杆菌)、E1(粪肠球菌)、E2(屎肠球菌)、L1(枯草芽孢杆菌)。细菌生长曲线、耐酸、耐胆盐、抑菌试验等益生特性分析结果表明,M1、M2和L1具有生长速度快,耐酸、耐胆盐,明显抑制大肠杆菌、鸡白痢沙门菌和金黄色葡萄球菌等肠道常见致病菌的益生特性,可以作为研制羊用微生态制剂的候选菌株。     

一株泡菜来源副干酪乳杆菌生物学特性及抗逆性研究

研究对从泡菜中分离的一株副干酪乳杆菌进行生长曲线测定、耐酸试验、耐猪胆盐试验、人工模拟猪胃肠道环境耐受性试验和抑菌试验等抗逆性研究。结果表明:饲用微生态制剂湖南省工程实验室从泡菜中分离得到的副干酪乳杆菌耐酸性强(pH 2.0)和耐高胆盐质量分数(质量/体积0.3%),对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、副伤寒沙门菌和鸡白痢沙门菌等具有较好的抑菌效果。     

微囊化植物乳杆菌的肠道耐受性研究

为研究以海藻酸钠和脱脂乳作为混合壁材对植物乳杆菌A409微囊化后在动物消化道中的稳定性,试验选用不同质量分数的胆盐、人工胃液及人工肠液处理微囊化植物乳杆菌样品,测定不同处理时间内菌体的存活率。结果表明:研究所用微囊化植物乳杆菌样品具有良好的耐酸性能,用p H 2.5和3.5的人工胃液处理2 h,其存活率均超过80.00%;处理3 h,p H 3.5的人工胃液菌株存活率仍超过80.00%,但p H2.5的人工胃液菌株存活率仅剩64.70%,对强酸环境的耐受性略有不足;用0.10%~0.50%质量分数的胆盐溶液处理微囊化植物乳杆菌样品2 h后仍有较高存活率(超过80.00%),3 h后存活率降至65.60%~82.80%;微囊化植物乳杆菌经人工肠液处理,在0~8 h内有较好的耐受性(超过85.00%),8 h后存活率下降速度较快。以海藻酸钠与脱脂乳作为混合壁材的微囊化植物乳杆菌对酸性条件、胆盐质量分数、人工胃液和人工肠液均有较高的耐受性,在动物胃肠道中稳定性良好。     

植物乳杆菌PA01胞外多糖合成条件的优化

旨在通过优化合成条件来提高植物乳杆菌PA01(Lactobacillus plantarum PA01)胞外多糖产量,为乳酸菌胞外多糖的应用与开发提供基础。该试验通过单因素和响应面法优化植物乳杆菌PA01合成胞外多糖培养基成分及发酵条件。结果表明：优化后获得最佳培养基组成及发酵条件为：大豆蛋白胨19 g/L,葡萄糖15 g/L,发酵温度34℃,培养时间36 h,培养基初始pH 6.6,接种量3%。在此条件下,植物乳杆菌PA01胞外多糖的产量理论上可以达到261.56 mg/L,较优化前提高了约1倍。     

鸡肠道内乳酸菌的分离鉴定及体外抑菌试验

为获得鸡肠道内抑菌效果好、适应性强的乳酸菌,从健康鸡小肠内容物中分离乳酸杆菌,并对其进行生化鉴定。结果成功从鸡小肠中分离出6株细菌。通过革兰氏染色和生化鉴定,发现这6株细菌分别是微小乳酸菌(L.minor)、约氏乳杆菌(L.johnsonii)、弯曲乳杆菌(L.curvatus)、肠乳杆菌(L.intestinalis)、嗜酸乳杆菌(L.acidlophilus)、植物乳杆菌(L.plantarum)。对分离到的6株乳酸菌进行体外抑菌试验,结果表明肠乳杆菌(L.intestinalis)对大肠杆菌有一定的抑菌作用。该研究为后期开发益生菌制剂奠定了一定的基础。     

植物乳杆菌L3发酵乳的工艺优化及质量研究

云南具有丰富的益生菌资源,前期从云南牛奶样品中筛选的植物乳杆菌L3具有良好的发酵特性(产黏、产香)和产共轭亚油酸性能,具有较好的发酵乳加工潜力。本研究以植物乳杆菌L3为发酵乳菌株,优化植物乳杆菌L3发酵乳的工艺参数,研究产品的质量指标和贮藏性能。通过单因素试验筛选和响应面优化,确定的植物乳杆菌L3发酵乳最佳工艺为:菌株添加量2%,发酵温度37℃,发酵时间20h。发酵乳产品色泽均匀,质地细腻,无乳清析出,酸奶味纯正,酸甜适口;脂肪含量为(3.42±0.36)%、蛋白质含量为(3.24±0.42)%、共轭亚油酸含量为(131.53±4.7)μg/g;乳酸菌活菌数(1.72×10¹⁰±0.36)CFU/g;共轭亚油酸含量和乳酸菌活菌数均高于商业发酵剂发酵乳。植物乳杆菌L3发酵乳在4℃下贮藏21d时,乳酸菌活菌数均高于国标规定的10⁶CFU/g,酸度均在消费者接受的范围内。本试验对植物乳杆菌L3发酵乳的工艺优化和品质分析,为植物乳杆菌L3在发酵乳中的应用奠定了基础。     

一株鱼源植物乳杆菌的部分生物学特性研究

为了从实验室现有的3株乳酸菌中筛选出对维氏气单胞菌、嗜水气单胞菌抑菌效果较好的乳酸菌,并对其部分生物学特性进行研究,试验采用打孔方法从3株菌中筛选出抑菌效果较好的菌株,并对该菌株在不同胆盐浓度、不同pH值、高温环境下的生长情况以及对胰蛋白酶的耐受能力和生长能力进行测定。结果表明:3株乳酸菌中,仅植物乳杆菌C20015对致病菌均有抑制作用,其余两株菌对其无抑制作用;C20015在抗逆性试验中,随胆盐浓度的增加,其活菌数下降,但活菌数均达到1.0×10~5cfu/m L以上;在pH值为2时,C20015的活菌数明显下降,当pH值大于3时,活菌数均达到1.0×10~6cfu/m L以上;在耐高温试验中,50℃时C20015活菌数下降不明显,但60℃以上几乎无菌生长;胰蛋白酶对活菌数无影响;植物乳杆菌C20015在0~10 h内快速增长,从10小时开始进入生长稳定期,直到20小时细菌数达到最大值3.6×10~9cfu/mL。说明植物乳杆菌C20015对水产类致病菌有一定的抑制作用,且对低pH值、高浓度胆盐、胃蛋白酶具有一定的耐受能力,有望应用于水产养殖饲料。     

1株植物乳杆菌的生物学特性及体外抑菌活性研究

【目的】试验旨在研究植物乳杆菌GX20200417-1菌株的生物学特性及体外抑菌活性,探讨其在生产中应用的可能性。【方法】将植物乳杆菌GX20200417-1菌株接种至不同pH和含不同浓度胆盐的PBS,以及人工胃肠液中,使用菌落计数分析其对酸、胆盐和人工胃肠液的耐受性。使用牛津杯法检测GX20200417-1菌株对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌及沙门氏菌的抑菌能力;通过与霉菌毒素共培养后使用ELISA方法研究GX20200417-1菌株对霉菌毒素的降解能力,并饲喂小鼠进行安全性试验。【结果】植物乳杆菌GX20200417-1菌株能够耐受pH 2.0及0.3%胆盐,并在人工胃肠液中有至少1×10⁴ CFU/mL的活菌数;GX20200417-1菌株发酵上清液对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌均有明显的抑制作用,对玉米赤霉素及黄曲霉毒素均有降解作用,但对呕吐毒素无降解作用;灌服GX20200417-1菌株后小鼠安全、无毒副作用。【结论】植物乳杆菌GX20200417-1菌株具有优良的益生特性,在畜禽生产中有一定的开发潜力。     

大熊猫源乳酸菌的降胆固醇作用研究

为筛选出高效降胆固醇乳酸菌,本试验利用MRS培养基从大熊猫粪便中分离得到乳酸菌,采用磷硫铁比色法对该乳酸菌的体外降胆固醇能力进行测定,并利用经典分类法对其进行细菌学鉴定。结果表明:该乳酸菌为乳杆菌属嗜酸乳酸菌,能够耐受p H值为3的酸性环境和0.3%的胆盐,在对数生长期降胆固醇能力最强,胆固醇降低率为29.8%。