志贺氏菌显色培养基在饲料检测中的应用研究

探讨志贺氏菌显色培养基在饲料志贺氏菌检测中的应用。将痢疾志贺氏菌、福氏志贺氏菌、鲍氏志贺氏菌和宋氏志贺氏菌标准菌制备成10-5、10-6、10-7梯度稀释的菌液,对志贺氏菌显色培养基、HE琼脂、SS琼脂、麦康凯琼脂、伊红美蓝琼脂进行检测灵敏度的评价。利用人工污染饲料样品进行显色培养基和上述四种普通培养基检出率的测试。结果表明:志贺氏菌显色培养基和普通培养基的检测灵敏度均为10-7;对混合污染样品的检测中,显色培养基优于普通培养基。志贺氏菌显色培养基用于饲料志贺氏菌的检测,具有菌落形态易于分辨的特点,适合于饲料中志贺氏菌的检测。     

蜡样芽胞杆菌显色培养基在饲料检测中的应用研究

为探讨蜡样芽胞杆菌显色培养基在饲料微生物检测中的应用,利用普通培养基和蜡样芽胞杆菌显色培养基,对60份饲料样品中蜡样芽胞杆菌进行分离培养,疑似阳性的菌落提取基因组DNA,利用PCR扩增蜡样芽胞杆菌gyr B基因进行测序验证。结果表明,普通培养基和显色培养基检出的阳性样品分别为13例(21.7%)和10例(16.7%)。通过gyr B基因测序验证普通培养基和显色培养基检测方法的假阳性率分别为76.9%和70.0%。蜡样芽胞杆菌显色培养基用于饲料中蜡样芽胞杆菌的检测,能够有效抑制其他杂菌的生长,降低普通培养基检测的假阳性率,适用于饲料中蜡样芽胞杆菌的检测。     

显色培养基在金黄色葡萄球菌检测中的应用研究

探讨葡萄球菌显色培养基在饲料微生物检测中的应用。利用Baird-Parker琼脂培养基和显色培养基对120份饲料样品进行金黄色葡萄球菌检测,疑似阳性的菌落进行unc基因的PCR扩增与测序验证。结果表明,显色培养基检出假阳性率(58.82%)低于普通培养基(73.91%)。显色培养基用于饲料中金黄色葡萄球菌的检测,能够有效抑制其它杂菌的生长,降低普通培养基检测的假阳性率。     

科玛嘉显色培养基在检测饲料中沙门氏菌的应用评价

将随机抽检的95份饲料样本采用CAS显色培养基和常规实验室方法(GB/T13091-2002)进行沙门氏菌的分离培养和初步鉴定。经24h孵育后共有7份样本在CAS显色培养基上呈典型的紫色菌落,经氧化酶试验排除2份假阳性,其余5份阳性样本经用VITEKID32E进行生化鉴定和血清学试验确认,证实均为沙门氏菌属,CAS实际检出5份阳性,90份阴性,与常规法检测结果完全一致。     

免疫传感器在大肠杆菌O157:H7检测中的研究进展

大肠杆菌O157:H7是一种典型的致病菌,严重感染后会引发败血症、肾功能衰竭等危及生命的并发症,对其进行检测,在食品安全、医疗卫生、环境保护等方面,都具有十分重要的意义。分析和评述了近年来采用免疫传感手段对大肠杆菌O157:H7检测的报道研究,技术主要分为阻抗式、压电式、表面等离子体共振式、酶标式、荧光标记式、电导式、电致发光式,最后对其研究走向和应用前景进行了展望。     

应用全自动荧光酶联免疫法检测肉类中的大肠杆菌O157

肠出血性大肠杆菌是引起食物中毒的一类重要的致病性细菌,大肠杆菌O157是其中的一个重要的血清型。本研究采集冻肉样品,进行大肠杆菌O157检测,结果从鸡肉和鸭肉中各检出一份阳性样品,阳性率分别为5.9%和12.5%,从结果可以看出,我市冻肉中存在有大肠杆菌0157污染。     

应用测试片快速检测食品中的大肠杆菌O157：H7

目的应用大肠杆菌O157:H7测试片快速检测食品中的大肠杆菌O157:H7。方法对大肠杆菌O157:H7测试片的各项指标及影响因素进行测试,并将其应用于食品检测。结果大肠杆菌O157:H7测试片的检测灵敏度高,其对纯菌的检测低限可达3cfu/mL;特异性较强,与鼠伤寒沙门氏菌、志贺氏菌等21种非目的菌无交叉反应;快速,24h内可报告阴性检测结果。应用该测试片检测各种食品206份,检测结果与SN标准的符合率达到98.5%。结论应用测试片检测食品中的大肠杆菌O157:H7具有快速、方便、经济、无需昂贵设备等优点。该测试片可适应于食品中大肠杆菌O157:H7的快速初筛。     

EMA与PCR结合检测大肠杆菌O157方法的研究

为了建立1种快速检测样品中大肠杆菌O157并能区分死细菌与活细菌的检测方法,将叠氮溴化乙锭(EMA)与PCR结合,以O157特有的抗原基因rfbE为靶基因,以O157的纯培养物为模板扩增,进行灵敏度、特异性、曝光时间及最佳EMA浓度筛选实验。结果显示:该检测方法的灵敏度为1.2×102CFU/mL,最佳曝光时间为1 min。终浓度≥1μg/mL的EMA,能有效抑制O157死菌的扩增,而当EMA终浓度≤16μg/mL时对活菌靶基因的扩增没有明显的抑制作用。EMA-PCR能有效减少O157活菌检测过程中假阳性结果的出现。     

O157大肠杆菌致病性及其预防

Ｏ１５７大肠杆菌致病性及其预防刘万佩（江西省宜春地区农业局）继疯牛病侵袭英国和欧洲之后，一种名为Ｏ１５７大肠杆菌的病原体正猖狂肆虐于全日本，在日本引起一片恐慌。Ｏ１５７是一种肠道病原菌，传染性很强，病症严重，危及生命。被世界卫生组织定为新的感染症，是...     

采用IMS-RT-PCR方法快速检测肉制品中大肠杆菌O157

建立免疫磁珠分离法(immunomagnetic separation,IMS)与实时荧光定量PCR(Real-time fluorescent quantitative PCR,RT-PCR)技术相结合快速检测肉制品中肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157的方法。利用改良热酚-水法提取EHEC O157的O-特异性多糖(O-specific polysaccharides,O-SP)作为筛选抗原,制备抗EHEC O157 O-SP单克隆抗体。将PM 3-50纳米磁珠经3-乙基碳二亚胺(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)活化后,与抗EHEC O157 O-SP单克隆抗体结合,得到偶联量为150μg/mg的免疫磁珠。免疫磁珠的最高捕获量为13748.33 CFU/0.2 mg,在肉制品中特异性捕获的最低检测限为2.2 CFU/m L。根据EHEC 0157血清型的特异性基因rfb E(Gen Bank登录号:S83460)设计引物和荧光探针,将IMS与RT-PCR相结合进行检测EHEC O157。当肉制品中EHEC O157含量≥1 CFU/g(2.5 g样本),免疫磁珠能捕获,并通过EC肉汤培养基增殖3h后,RT-PCR即可成功检测,全程只需6-7 h。IMS-RT-PCR相结合的检测方法,在大大缩短了检测时间的基础上,再次降低了EHEC O157的检测限,在防范肉制品源性致病性EHEC O157传染方面具有重要意义。     

O157:H7型大肠杆菌在反刍动物中的研究进展

大肠杆菌正常栖居于哺乳动物的肠道,和宿主呈共生关系,但其致病菌株能通过食物链进入人体造成出血性结肠炎。在肠出血性大肠杆菌中,O157：H7型大肠杆菌因致病力强、检出困难而危害最大。反刍动物为该茵的无症状宿主,其屠宰时通过改善下水道设施和清洁体表可减小胴体受污染的机会,而屠宰前的管理和日粮方面的措施亦可控制消化道或粪中的病菌数量,但目前说法不一,需要进一步研究。     

饲料中肠出血性大肠杆菌O157∶H7双重PCR检测方法的建立

根据肠出血性大肠杆菌(enterohemorrhagic E.coli,EHEC)O157∶H7的O抗原编码基因rfb E和H抗原编码基因fli C分别设计引物,建立双重PCR方法。饲料样品人工污染EHEC O157∶H7后进行增菌培养,利用双重PCR进行检测EHEC O157∶H7。结果表明:建立的PCR方法能够特异性扩增出目的条带,敏感性可达到100 cfu细菌。双重PCR方法可以有效地检测出饲料中人工污染的EHEC O157∶H7,人工污染饲料样品经4 h预增菌处理后,该方法的检测下限为20 cfu细菌。本研究建立的双重PCR方法可快速、特异地检测出饲料中污染的EHEC O157∶H7,可用于饲料中EHEC O157∶H7的检测及流行病学调查。     

应用多重PCR方法检测出血性大肠杆菌O157:H7

选择O157：H7的产志贺样毒素基因stx1、stx2和β-葡糖醛酸糖苷酶基因(uidA)分别设计引物,在同一扩增体系中进行PCR反应。在优化好的多重PCR反应条件下,对菌株及其它肠道菌进行检测。试验结果为：O157：H7菌株在250,207,179bp处均出现特异条带。试验结果表明,选择3对引物的多重PCR方法可特异、快速而且灵敏地对大肠杆菌O157：H7进行检测。     

肠出血性大肠杆菌O157多重PCR检测方法的建立

为了建立肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157的多重PCR检测方法,本研究选取调控基因fusR与n5512,联合经典的rfbE、stx1和stx2基因,共同作为靶基因,通过对引物浓度等参数优化,建立了稳定性好的检测EHEC O157的多重PCR方法。并检测了该方法的特异性与敏感性,结果显示,该方法对非O157的产志贺毒素的大肠杆菌、肠致病性大肠杆菌(EPEC)、沙门氏菌、假结核耶尔森菌等检测均为阴性,特异性强;对EHEC基因组DNA的检测下限约为2.27×10~(-2)ng/μL,对EHEC CFU的检测下限约为104cfu/mL。对人工感染菌的样品进行检测,增菌前与增菌后的检测限分别为:饲料,4×10~3cfu/g和4×10~(-4)cfu/g;土壤,4×103cfu/g和4×10~(-2)cfu/g;牛肉,8×10-1cfu/g和8×10-3cfu/g;废水,4×103cfu/g和4×10~(-3)cfu/g。该方法还能检出感染了EHEC O157小鼠的粪便。综上,本研究建立了一种优化的EHEC O157多重PCR检测方法,为动物养殖与肉品加工过程中EHEC O157的检测提供了便捷、灵敏、可靠的技术手段。     

致病性大肠杆菌O157：H7研究概述

概述了致病性大肠杆菌Ｏ１５７：Ｈ７的生物学特性、流行病学、诊断、治疗和预防等,并加以分析。揭示了大肠杆菌Ｏ１５７：Ｈ７感染对人类的危害,以及加强对该病进行研究和防治的重要性。     

快速检测大肠杆菌O157的LAMP方法的建立与评价

利用DNA环介导恒温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP),以rfbE基因为靶序列,设计LAMP引物,建立LAMP反应体系与条件,进行灵敏度和特异性试验.结果显示,整个检测过程仅需1h即可通过肉眼直接目测试验结果.在灵敏度试验中,rfbE-LAMP对O157菌液和模拟阳性样品的最低检测限分别为1CFU/mL和1 CFU/g.在特异性试验中,以其他血清型大肠杆菌以及沙门杆菌基因组DNA为模板对rfbE基因进行检测,均没有发生非特异性扩增反应.试验建立的LAMP检测方法具有操作简单安全、检测灵敏度高、特异性高的特点,能够满足基层实验室、应急检测或现场监测等方面的使用需求.     

双抗夹心ELISA检测肠出血性大肠杆菌O157方法的建立

以前期建立并纯化的肠出血性大肠杆菌O157：H7单克隆抗体3D6,建立一种适宜食品样品检测的双抗夹心ELISA检测方法。该方法只对O157菌株有特异性反应,对非O157型肠出血性大肠杆菌及其他菌株无交叉反应。敏感性试验结果表明,对大肠杆菌O157纯培养菌液检出限为1.2×105 CFU/mL。选择性增菌培养后,对牛肉、猪肉和鸡肉与模拟样品中的大肠杆菌O157的检出限为0.4～4CFU/g。