紫外线诱变黑曲霉提高产酶活力的研究

酶是当今国内外研究和开发的热点,而纤维素酶又是酶制剂的关键酶种,可提高低质价廉饲料的营养价值。因此,纤维素酶的研究开发和应用是解决全球能源危机,食品和饲料资源紧张及环境污染的一条重要途径。但是,目前对纤维素酶的研究大多集中于木霉,而木霉的安全性存在问题[1],因而它在食品和饲料上的应用受到限制。黑曲霉在自然界的分布极为广泛,有多种活性强大的酶系,不仅是公认的安全菌株,而且也是产纤维素酶能力较强的微生物之一。因此,选用黑曲霉为出发菌株采用紫外线诱变,研究其产纤维素酶活力。通过试验探讨了紫外线诱变黑曲霉提高酶活力…     

产植酸酶黑曲霉Px原生质体的制备与再生

本文对产植酸酶黑曲霉Px原生质体的制备和再生条件进行了研究。结果表明:在液体培养条件下培养18h的菌丝,经过0.3%β-巯基乙醇与酶液同时处理,采用pH5.0的混合酶(蜗牛酶:纤维素酶=7:3)在34℃酶解2.5h,选用0.7mol/L的氯化钠为渗透压稳定剂时,原生质体形成数和再生率均达到最高,分别为9.7×105个/mL和28.2%。     

脂肪酶产生菌的筛选、诱变及产酶条件的研究

从长春市油脂厂采集的土壤样品中分离到1株脂肪酶活力较高的白地霉1522(其发酵液酶活力为35U/mL)。以此为出发菌株,经紫外线、氯化锂、盐酸羟胺、亚硝基胍等诱变筛选后,获得1株高活力脂肪酶产生菌N79(其发酵液酶活力达80U/mL)。对诱变株N79最适培养条件的研究表明,其最适培养基组成为:蛋白胨4%,山梨醇0.75%,橄榄油0.5%,MgSO4·7H2O 0.1%;产酶最适发酵条件是,培养液起始pH为6.0～6.5,发酵温度为26～30℃,通气量为每250mL三角烧瓶中盛培养液30mL,发醇时间为32～36h。在量适培养条件下,其发酵液酶活力可达到105-115U/mL。白地霉N79的发酵液经硫酸铵盐析制得脂肪酶粗制品,它在聚乙烯醇橄榄油乳化液系统中,水解橄榄油的最适pH为7.8,最适温度为42℃,在pH4-8、4℃下存放24h及pH7.5、40℃下保温15min,酶活力不变。     

黑曲霉产木聚糖酶的应用特性研究

木聚糖酶能降解木聚糖中的β－１，４糖苷键，在饲料中能降低木聚糖的抗营养作用，提高养分消化利用率，开发非常规谷物资源，提高畜禽生产性能，减轻粪便污染；在造纸业中，能减少纸浆预漂白中有毒物的用量，可大大降低环境污染物的排放，解决造纸业的严重污染问题。其在饲料、食品、造纸工业中得到广泛应用。不同行业对酶的作用特性有不同要求；不同来源的木聚糖酶具不同特性，适用的范围也不一样。本文对所选育的黑曲霉产生的木聚糖酶的部分与应用相关的特性进行了研究，结果显示该酶制剂适合应用于饲料及食品中。１材料和方法１．１木聚…     

黑曲霉发酵玉米秸秆产纤维素酶的研究

通过单因素试验和L9(34)正交试验对黑曲霉3.3148固态发酵玉米秸秆产纤维素酶的工艺条件进行研究。结果表明,最佳发酵温度31℃,接种量15,装瓶量186g/瓶,发酵时间8.5d。其发酵玉米秸秆产品中CMCase和FPase酶活力达29.94和13.56IU/g;粗蛋白含量为11.26,比发酵前提高79.29;粗纤维和中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维分别为24.45、45.24和37.04,分别比发酵前降低29.01、12.90和19.29。发酵出来的产物具有芳香气味,适口性较发酵前有较大的改观。     

利用原生质体诱变筛选植酸酶高产菌株

对产植酸酶的纯化黑曲霉用混合酶制取原生质体进行了研究。研究发现,经诱变后的原生质体在再生过程中菌落形态发生了明显变化,从中选育出了一株植酸酶的高产菌株,并对其遗传稳定性进行了鉴定。     

航天诱变菌株黑曲霉ZM-8降解小麦秸秆产纤维素酶条件的优化

在确定了影响航天诱变黑曲霉ZM-8菌株在小麦秸秆为主要原料产纤维素酶的各单因素基础上,采用正交试验分别对其培养基组分和培养条件进行优化。试验结果表明:含氮量和加水量是影响产酶的最主要因素,其产酶培养基组分的最优组合为:最佳氮源为碳酸铵、含氮量1.4%、料水比为1∶2、小麦秸秆粉与麸皮之比为4∶1;培养时间和培养温度是影响产酶的最主要环境因子,其产酶的最佳培养条件为:培养温度为28℃、培养时间为96 h、pH值为6.5、接种量为4%;在优化的培养基配方和培养条件下,其FPU和CMC的酶活分别为6.57 U/g和22.38 U/g。     

黑曲霉液体发酵产植酸酶条件的研究

试验以黑曲霉(Aspergillusniger)30132为材料,研究了碳源、氮源、培养基、起始pH值、接种量、温度对该菌株产植酸酶活力的影响。结果表明:黑曲霉30132的最适发酵温度为28℃,产酶pH值为5,最佳接种量为10%;在此条件下,以8%麸皮为碳源、0.5%硫酸铵为氮源时,产酶活力最高,发酵3d后发酵液中植酸酶活力高达35.5U/ml。     

微生物发酵产脂肪酶的研究进展

脂肪酶(EC3.1.1.3)能够催化多种反应的进行,微生物是脂肪酶的主要来源。对微生物发酵产脂肪酶菌株的筛选、发酵条件、酶的分离纯化及脂肪酶基因工程菌株的构建进行综述。     

黑曲霉液态发酵产植酸酶的条件优化研究

文章以黑曲霉为出发菌株,通过初筛、复筛,得到一株产植酸酶的菌株,对发酵时间、温度及pH进行单因素试验,并利用正交设计进行工艺优化。结果表明,当培养基pH为5.5、温度为30℃、发酵时间为5d时,黑曲霉发酵产植酸酶活力最大,为14.35U/mL。     

扩展青霉产碱性脂肪酶发酵条件的研究

对扩展青霉PE51.1菌产碱性脂肪酶的培养基配方和摇瓶发酵条件进行了初步研究,结果表明,最佳培养基组成为(g/l):黄豆粉40、玉米淀粉10、糊精10、橄榄油10、(NH4)2SO410、NaNO35、FeSO4·7H2O0.1、K2HPO43、CaCO35;最佳发酵条件为:装液量30ml(250ml三角瓶)、接种量3%、起始pH值8.5、温度28℃、摇床转速150r/min。在此条件下,PE51.1菌的最高产酶活性可达20.83U/ml。     

高产纤维分解酶黑曲霉诱变选育与发酵条件优化

本试验旨在研究高产纤维分解酶黑曲霉诱变选育与发酵条件优化。通过对黑曲霉X1诱变选育(紫外、硫酸二乙酯、紫外-硫酸二乙酯复合诱变),获得产纤维分解酶能力强的突变菌黑曲霉,并对其产酶发酵条件和水解秸秆能力进行研究。结果表明,黑曲霉X1经紫外、硫酸二乙酯及紫外-硫酸二乙酯复合诱变,筛选出1株产酶能力高的突变菌黑曲霉X1U4-1;与原菌相比,突变菌滤纸酶活性提高了66.7%,β-葡萄糖苷酶活性提高了22.3%,木聚糖酶活性提高了3.8%,还原糖含量(12 h)提高了6.8%。黑曲霉X1U4-1最适发酵产酶条件为发酵时间72 h,玉米芯∶麸皮=3∶7,接种量1.2 mL,硫酸铵浓度4%;在此条件下,滤纸酶活性达到0.77 U/g,纤维素酶活性达到93.80 U/g,木聚糖酶活性达到9 383.18 U/g。本研究表明,采用紫外-硫酸二乙酯复合诱变可有效改善黑曲霉产酶性能和水解秸秆能力。     

快中子与DES复合诱变选育高产木聚糖酶黑曲霉菌株

为了提高木聚糖酶活力,以黑曲霉AS3.350为出发菌株,利用快中子和DES复合诱变的方法,筛选出一株高产木聚糖酶菌株DES20-4,该菌株经过液体发酵培养,产木聚糖酶活力为157.07 U/ml,是出发菌株的2倍。     

空间条件对康氏木霉黑曲霉的诱变作用

纤维素酶能将自然界中极为丰富、可不断再生而又难以分解利用的纤维素类物质,转化为简单的糖类。这为工、农业生产有用产品、提高饲料利用率和为人类提供食品、能源以及环境保护诸方面,都有着极其重要的意义。但是长期以来纤维素酶应用所面临的困难是用以生产该酶的菌种活性低,因而成本高,不能普遍推广应用。康氏木霉和黑曲     

产纤维素酶系黑曲霉的二次活化与传代培养研究

通过对储存了6个月的黑曲霉As 3.316选择适宜的接种方式和最佳培养温度,对其进行二次活化,并在马铃薯葡萄糖琼脂培养基上传代培养,分别于24、48、72、96、120和144 h观察其生长状态。结果表明:经过长期保存的黑曲霉菌株经划线接种在30℃下培养,生长良好,菌落迅速蔓延增殖,72 h即可见成串褐黑色的球状分生孢子,96 h基本进入平台期。为黑曲霉在饲料工业中的研究与应用提供了理论依据。     

培养条件对黑曲霉产酶的影响

在玉米秸秆粉和麸皮组成的培养基上对黑曲霉进行固体培养,研究不同秸秆粉∶麸皮配比及不同营养液和不同培养时间对黑曲霉产纤维素酶和木聚糖酶的影响。结果表明,不同培养条件对黑曲霉产滤纸酶和木聚糖酶都有影响,黑曲霉产滤纸酶的最优培养条件组合为麸皮∶秸秆粉1∶4、Mandel营养液、培养96h,所得酶活力为15.136U/g,比实验最低组的酶活提高了4.32倍;产木聚糖酶的最优培养条件组合为麸皮∶秸秆粉3∶1、NaNO3、培养96h,所得酶活为282.702U/g,比实验最低组的酶活提高了34.2%。     

黑曲霉B-2所产木聚糖酶的酶学性质研究

该试验研究了黑曲霉B-2所产木聚糖酶的酶学性质。结果表明：该木聚糖酶的最适反应温度为50℃,最适pH值为4．8,在pH4．8～5．2范围内酶活性稳定,并且粗酶粉的热稳定性良好,100℃处理1h后酶活性仍保留73．6％;Co2＋、Fe2＋,Mn2＋、Zn2＋对该木聚糖酶有抑制作用,Cr2＋能提高此木聚糖酶的活性,低浓度的Ba2＋、EDTA二钠、Na＋对木聚糖酶的活性几乎没有影响。     

利用原生质体诱变方法选育蛹虫草高产突变菌株

对蛹虫草(Cordyceps militaris)原生质体分别进行热应激和紫外线诱变处理后,挑选再生菌株进行栽培试验,通过测定菌株子实体产量及腺苷、虫草素含量,从中筛选高产突变菌株。蛹虫草原生质体经68℃和72℃热应激后,再生菌株子实体干物质含量显著增加,且68℃处理组子实体中腺苷含量显著提高。用紫外灯照射原生质体1 min、6 min和7 min时,子实体干物质含量显著增加,腺苷含量较对照组分别提高49.4%、96.4%和15.9%,虫草素含量分别提高49.1%、20.0%和13.5%。最终从紫外线诱变1 min处理组筛选出5株高产突变菌株,其子实体干质量和生物转化率均显著高于出发原菌株,子实体中虫草素含量分别为原菌株的1.59、1.72、1.74、1.55和1.56倍,并且5株菌株目标性状的稳定性良好。试验结果表明,以原生质体为材料,采用紫外线诱变技术可以选育出蛹虫草高产突变菌株。     

产β-葡聚糖酶黑曲霉固态孢子增殖工艺研究

试验旨在提高固态培养黑曲霉孢子增殖。以平板单菌落计数的方法计算单个孢子增殖孢子数目,通过单因素筛选及正交试验对黑曲霉产孢培养基以及培养条件进行优化研究。确定最优产孢培养基配方为:葡萄糖40 g/l、(NH_4)_2SO_4 3.0 g/l、KH_2PO_4 1.5 g/l、Mg SO_4 1.0 g/l、Mn Cl_2 3.0 mg/l、Zn SO_4 15.0 mg/l;最佳培养条件为:培养基体积150 ml/500 ml,接种量10~3个孢子/瓶。在此优化条件下,黑曲霉单孢子产孢量达7.38×10~6个,是未优化条件下的1.8倍。