不同贮藏时间及温度对猪尿中莱克多巴胺快速检测的影响研究

本试验为了研究不同贮藏时间及温度对猪尿中莱克多巴胺快速检测的影响。向阴性猪尿中添加莱克多巴胺标准品配制成5μg/kg、50μg/kg和500μg/kg三个不同浓度后,分别在常温(室温)、冷藏(4℃)、冷冻(-20℃)条件下贮藏,于1、3、7、15、30d分别用酶联免疫吸附法和胶体金免疫层析法进行快速检测。结果表明,所有的猪尿样本都呈阳性,且检测到起始浓度为5μg/kg的样本随时间延长检测值降低,同时冷冻的保存效果最好。     

不同储藏时间及温度对猪尿中沙丁胺醇快速检测的影响研究

为了研究不同储藏时间及温度对猪尿中沙丁胺醇快速检测的影响,试验向阴性猪尿中添加沙丁胺醇标准品配制成5μg/L、50μg/L、500μg/L 3个不同浓度后,分别在常温(室温)、冷藏(4℃)、冷冻(-20℃)条件下储藏,于1,4,7,18,21,28天分别采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法和胶体金免疫层析法进行快速检测。结果表明:所有猪尿样本均呈阳性,且可检测到起始浓度为5μg/L的样本随时间延长检测值降低,但无论采用何种保存方式,沙丁胺醇均会随时间发生大幅度的降解,因此为保证检测结果的准确性,收集猪尿样本后宜尽快初筛检测。     

不同pH对酶联免疫法检测猪尿中莱克多巴胺的影响研究

本试验旨在研究不同pH对酶联免疫法检测猪尿样中莱克多巴胺含量的影响。向阴性猪尿中添加莱克多巴胺标准品,配制浓度为5μg/kg、50μg/kg和500μg/kg,用盐酸和氢氧化钠将不同浓度的猪尿pH分别调为4、5、6、7、8、9,并用酶联免疫法进行快速检测。结果表明,所有猪尿样本均呈阳性,且不同pH对不同浓度快速检测无影响。     

用HPLC-MS/MS研究动物毛发中克伦特罗的残留及代谢规律

研究建立了高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)测定毛发中盐酸克伦特罗残留的方法。猪毛发以0.1moL/L盐酸溶液提取,MCX固相萃取柱净化,流动相溶解定容。以SB-C18柱为分离柱,1%乙酸水溶液和甲醇(60∶40,V∶V)作为流动相,MS/MS进行定性和定量分析。在优化条件下的最低检出限为0.05μg/kg,定量限为0.2μg/kg。毛发样品中添加不同浓度盐酸克伦特罗,测得回收率在79.0%～86.2%之间,变异系数均低于15.2%。应用该方法研究了盐酸克伦特罗在猪毛发中的代谢并初步探讨其代谢机理。结果表明:在较高饲喂浓度(10mg/kg)时,用药5d后,黑色猪毛发有少量盐酸克伦特罗残留,而白色猪毛发中未检出。从第7天起猪毛发中盐酸克伦特罗蓄积量逐渐增加,最高蓄积浓度为4852.5μg/kg。     

克伦特罗在猪尿液和血液中残留消除相关性研究

对克伦特罗在喂药期和休药期猪尿液和血液中的残留规律和相关性进行了研究。选择10只健康猪(60kg±5.7kg)进行试验,在饲料中添加4mg/kg盐酸克伦特罗,连续饲喂15d后休药,参考NY/T468-2006方法监测喂药期和休药期尿样和血样中克伦特罗含量,研究其残留消除规律。试验结果表明,克伦特罗在喂药期间猪尿中平均含量为393～1131μg/L,血液中平均含量为6.8～22.1μg/L;停药后含量迅速下降,其中19d后猪尿平均含量为2.19μg/L,猪血液平均含量为0.49μg/L。同时尿液和血液中克伦特罗含量呈一定的正相关关系,喂药期相关系数为0.9385,休药期相关系数为0.9402。     

克伦特罗在猪尿液中的消除规律研究

[目的 ]研究克伦特罗在猪尿液中的消除规律。[方法 ]用含有克伦特罗1.5 mg/kg的饲料,饲喂一组体重约50 kg的90日龄育肥猪,正常饲喂35天后停药,收集停药后前32天的猪尿液,采用高效液相色谱法(HPLC)进行克伦特罗含量分析。[结果 ]停药后的前4天,猪尿液中的克伦特罗浓度迅速下降,第4天降至13.23μg/kg,之后消除速度放慢,第32天为0.44μg/kg,仍然高于最低检测限0.05μg/kg。[结论 ]克伦特罗在猪体内消除缓慢,容易蓄积。     

盐酸克伦特罗在羊主要脏器中残留量消除规律的研究

本试验对盐酸克伦特罗在休药期肉羊眼睛、心脏、肾脏、肺脏、脾脏等组织中的残留规律进行了研究。选择24头体重为(30±5)kg健康肉羊进行试验,在饲料中添加50 μg/kg盐酸克伦特罗,连续饲喂35 d后休药,通过液相色谱—质谱联用/质谱检测休药期肉羊组织中克伦特罗含量,研究其残留量消除规律。试验结果表明,肉羊眼睛中有高浓度的盐酸克伦特罗残留且其在肝脏中消除较慢;停药第14天眼睛中盐酸克伦特罗的浓度仍为42.42～63.48 μg/kg,脾脏中盐酸克伦特罗消除速度是最快的;停药3 d时,检测不到盐酸克伦特罗的残留量(低于检出限0.07 μg/kg),故眼睛可用作检测盐酸克伦特罗在肉羊生产上非法使用的靶标。     

3种β_2-受体激动剂荧光免疫层析试纸条的制备及特性研究

本研究旨在制备性能优异的克伦特罗(clenbuterol,CLB)、莱克多巴胺(ractopamine,RAC)和沙丁胺醇(salbutamol,SAL)荧光免疫层析快速定量检测试纸条,并对该试纸条的检测范围、检测限、准确度、精确度、假阳性、假阴性及其与仪器方法的符合率进行评价。结果显示,克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇试纸条标准曲线范围分别为0~3.2、0~6.4、0~8.0μg/L;克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇试纸条检测下限分别可达0.2、0.4和0.5μg/L;克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇与其他8种同类药物交叉反应均成阴性,特异性良好;各批添加回收率在60%~120%之间,准确度达到要求;不同克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇浓度下变异系数(CV)均小于15%,符合精密度标准;猪尿中假阳性率和假阴性率均为0;此外与仪器方法的符合率为100%。试纸条适用于猪尿中克伦特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺残留快速检测,具有灵敏度高、稳定性好和特异性强的特点。     

表面增强拉曼光谱法研究β受体激动剂在生猪体内代谢与残留

探索用表面增强拉曼光谱法检测盐酸克伦特罗等β受体激动剂于给药和停药期间在猪尿液、毛发、粪便和组织中的浓度,为快速检出在饲养和市场流通环节中的瘦肉精提供方法支持。在生猪饲料中以10mg/kg的量添加一种β受体激动剂,并连续喂养14d,然后停止给药,使用正常饲料。在给药期间于l、2、3、4、6、8、10和14d分别采集尿液、毛发和粪便,通过前处理后与表面信号增强剂等体积混合,测定其中的β受体激动剂浓度。停药后每天剪去少量毛发,前处理后测定其中的主药的蓄积浓度。结果显示,样品回收率在94.0%以上,相对标准偏差小于2%。盐酸克伦特罗、硫酸沙丁胺醇、硫酸特布他林、班布特罗、盐酸氯丙那林、富马酸福莫特罗的标准溶液在0.05~50μg/L质量浓度范围呈良好线性关系,定量下限为0.05μg/L;尿液、粪便、毛发样品中在1~50μg/L质量浓度范围呈良好线性关系,定量下限为1μg/L。盐酸莱克多巴胺的标准溶液在0.1~50μg/L质量浓度范围呈良好线性关系,定量下限为0.1μg/L。结果表明,该研究测试方法便捷灵敏,用于β受体激动剂在猪体内代谢分析,以及检测其在猪各组织部位残留情况尤为适宜。     

ELISA检测猪尿中β-受体激动剂类药物影响因素研究

酶联免疫吸附试验(ELISA)检测猪尿中β-受体激动剂类药物(俗称"瘦肉精")时有假阳性出现。为摸清干扰因素,获得准确的检测结果,提高工作效率,选取生猪饲养中常用的替米考星预混剂(100g/kg)、复方磺胺氯哒嗪钠粉、氟苯尼考粉(100g/kg)、蛋氨酸铬、ZnSO4·H2O等3种兽药和2种饲料添加剂饲喂体重50kg~60kg的健康生长育肥猪。3d后采集尿样分别进行克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇检测。发现上述3种兽药对克伦特罗、莱克多巴胺检测无假阳性结果出现;对检测沙丁胺醇有不同程度的假阳性结果出现。上述2种饲料添加剂对检测克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇均无假阳性结果出现。     

GC-MS法研究猪体内克仑特罗的残留消除规律

样品用乙酸乙酯提取,盐酸溶液萃取后,再经SCX固相萃取柱净化,50 ℃水浴中氮气吹干后衍生化.以气相色谱-质谱选择86、212、262、277四个碎片离子进行定性定量分析.盐酸克伦特罗在0.01～2.0 mg/L成线性(R2为0.999),猪肉中3种不同添加浓度0.01、0.10和0.20 mg/kg下克仑特罗平均回收率分别为88.31%、92.85%、93.97%,相对标准偏差分别为5.26%、7.58%、4.59%,样品中最低检测限(S/N=3)为0.1 ug/kg.应用该方法研究了克仑特罗在猪体内的消除并初步探讨其代谢机理.结果表明,在饲喂浓度(3 mg/kg) 1个月后,猪体内盐酸克伦特罗蓄积量不算太高,最高蓄积浓度为493.59 ug/kg,而且停药后代谢又非常快.     

“瘦肉精”现场快速检测的应用及分析

使用"瘦肉精"快速检测卡,对深圳市某定点屠宰场待宰猪、牛、羊进行"瘦肉精"现场快速检测,用盐酸克伦特罗检测卡检测猪尿82258份、用莱克多巴胺检测卡检测猪尿82258份、用沙丁胺醇检测卡检测猪尿82258份,用盐酸克伦特罗检测卡检测牛尿20561份、用莱克多巴胺检测卡检测牛尿20561份、用沙丁胺醇检测卡检测20561份,用盐酸克伦特罗检测卡检测羊尿6443份、用莱克多巴胺检测卡检测羊尿6443份、用沙丁胺醇检测卡检测羊尿6443份。检测结果:盐酸克伦特罗快速检测为阳性的猪尿有3份、牛尿96份;莱克多巴胺快速检测为阳性的猪尿有2份;沙丁胺醇快速检测为阳性的牛尿12份。对现场快速检测结果为阳性的尿样送第三方检测机构使用液相色谱-串联质谱法进行复检确证,确证结果:盐酸克伦特罗检测卡假阳性率为6%,莱克多巴胺检测卡假阳性率为0,沙丁胺醇检测卡假阳性率为8%。     

胶体金法与ELISA法检测盐酸克伦特罗的比较试验研究

[目的]本试验通过研究胶体金法与ELISA法在检测猪尿中盐酸克伦特罗的应用，得出两种方法在目前盐酸克伦特罗快速检测中结合使用的可能，从而在保证检测灵敏度和特异性的前提下，大大提高检测速度，并以此为基础建立一个不同于以前的监管模式。[方法]采用胶体金法和酶联免疫法(ELISA)进行比较。[结果]快速检测试纸条的灵敏度为5ng／nd，共检测442份猪尿样品，ELISA阳性7份，阳性率1．6％，胶体金阳性9例，阳性率2％；假阳性率为O．5％，符合率为99．5％；并可应用在宰后猪尿、猪肝检测中。【结论】胶体金法检测盐酸克伦特罗，具有操作简便、观察直观、快速、省时，其特异性、敏感性均达到ELISA水平；可作为饲养场、生猪中转站、屠宰场、菜市场筛查盐酸克伦特罗的重要手段，具有重要意义。     

进出口食用动物、饲料中盐酸克伦特罗ELISA检测方法的建立

为了建立进出口食用动物、饲料中盐酸克伦特罗残留快速检测技术,试验建立间接竞争酶联免疫吸附试验(ELISA)方法进行检测。结果表明:包被抗原的最适质量浓度为20.0μg/mL,抗体的最佳稀释度为1∶5 000,半抑制浓度(IC50)=2.1 ng/mL;该方法的最低检测限达0.05 ng/mL,与沙丁胺醇和莱克多巴胺的交叉反应率分别为8.28%、7.75%,平均加标回收率为94.52%。该方法灵敏度高,样品前处理简便、快速,适用于进出口食用动物、饲料中盐酸克伦特罗残留的大批量现场检测。     

猪尿样中盐酸克伦特罗的快速筛检分析

为了调查上海屠宰生猪盐酸克伦特罗(瘦肉精)的残留情况,2010—2011年对该市4个定点屠宰场分25个批次,共取猪尿样本2 791份,用ELASA进行快速筛检,结果显示:阳性率为4.73%(132/2 791)。     

猪鸡组织中左旋咪唑残留的HPLC检测方法研究

建立了猪、鸡组织中左旋咪唑残留检测的高效液相色谱法。组织试样在碱性条件下先用乙酸乙酯提取,然后用0.1 mol/L盐酸反萃取,萃取的样液用混合型阳离子固相萃取小柱净化,采用C18(5μm,250 mm×4.6 mm i.d.)色谱柱,用高效液相色谱仪(带紫外检测器)在220 nm波长处测定,外标法定量。在此条件下,左旋咪唑的保留时间为12～14 min。左旋咪唑浓度在10～1 000μg/L时,与峰面积呈良好的线性关系,线性方程为y=196.37x+81.599(r=0.999 9)。结果表明,左旋咪唑在在猪、鸡的肌肉、脂肪和肾脏中的检测限为2μg/kg,定量限为5μg/kg;在猪、鸡的肝脏中的检测限为2μg/kg,定量限为10μg/kg。在添加不同浓度水平测定下,平均回收率在70%～110%,批内变异系数在10%以内,批间变异系数在15%以内。     

GCMS联用技术测定猪尿中盐酸克伦特罗的基质效应分析

本试验采用农业部1025号公告-16-2008方法制备出空白猪尿基质,添加一定量标样进行衍生化,使得上气相质谱分析的盐酸克伦特罗浓度分别为20ng/mL,50ng/mL,100ng/mL,200ng/mL,500ng/mL。同时,直接添加同样量的盐酸克伦特罗溶液直接衍生化,使得上机浓度与前述4个浓度保持一致。用出峰时间定性,峰面积响应值定量。并用相关公式计算得到基质效应系数。结果表明:气相质谱法测定猪尿中的盐酸克伦特罗存在一定的基质效应。在试验中的5个浓度范围内,基质效应值在3.67～4.18。疑似常数。     

盐酸克伦特罗胶体金快速检测试纸条的研制

研制一种快速、简便的基于胶体金免疫层析法的试纸条,以用于对猪尿中盐酸克伦特罗的检测。以胶体金标记盐酸克伦特罗单克隆抗体竞争性膜层析技术制成了猪尿液中盐酸克伦特罗残留检测的快速检测试纸条。如待测尿样中无盐酸克伦特罗,则金标抗体能顺利地与固相载体结合,形成肉眼可见的红色带;如待测尿样中含有盐酸克伦特罗,则与金标抗体以同样的机会与固相载体结合,竞争性地占去了金标抗体与固相载体结合的机会,使金标抗体与固相载体的结合量减少,无法形成肉眼可见的红色带。经过试验制成了可检测出猪尿样中盐酸克伦特罗浓度为2 ng/mL的试纸条,可在8 min完成测试,肉眼即可判断;该试纸条灵敏度能够达到临床使用的要求,且无需任何仪器设备,具有敏感、特异、快速、简便的特点,适用于现场快速检测和筛选工作。     

盐酸克伦特罗在猪体内的消长动态研究

利用 3种不同浓度的盐酸克伦特罗饲喂 3组肥育猪 ,收集不同时期的尿液和宰后肝脏 ,采用酶标免疫分析法(ELISA)进行盐酸克伦特罗在猪体内的消长动态规律研究。结果表明 :饲喂不同浓度的克伦特罗 ,其在猪体内一般只需要 4～ 6小时即可达到峰值 ,而且峰值随添加剂量值的增大而升高。排泄速度比吸收速度慢 ,不同浓度克伦特罗在尿液中的消除时间一般都在 1 0天以上 ,而且随体内浓度的增加 ,消除时间随之延长。克伦特罗在内脏中的残留时间比尿液中更长     

生猪尿液中盐酸克伦特罗残留测定方法——酶联免疫吸附测定法

通过酶联免疫反应测定尿液中盐酸克伦特罗的含量。该方法适用于猪尿中盐酸克伦特罗残留的常规快速筛选检测。