植物乳杆菌及其培养物对肉仔鸡生长性能和免疫功能的影响

本试验旨在探究日粮中添加植物乳杆菌活菌、菌液、培养液和灭活菌液对肉仔鸡生长性能和免疫功能的影响,试验选取300只健康的、体重相近的1 d AA肉仔鸡,随机分配到5个处理组中,每个处理组6个重复,每个重复10只。结果表明:7~21 d,添加培养液和灭活菌液组肉仔鸡的ADG(P0.05)显著高于对照组,22~42 d,与对照组相比,培养液组的ADG显著提高(P0.05),培养液组和灭活组的饲料增重比均显著降低。21 d,试验组肉仔鸡的IgA显著高于对照组(P0.05),饲喂培养液组肉仔鸡的IL-2显著高于对照组(P0.05)。42 d,饲喂活菌、菌液组肉仔鸡血清中的IgG显著高于对照组(P0.05)、培养液组和灭活组;试验组肉仔鸡的IgA、IFN-γ和IL-2均显著高于对照组(P0.05),饲喂活菌组、菌液组和培养液组对肉仔鸡血清中IL-6均显著高于对照组(P0.05);因此,添加植物乳杆菌活菌、菌液、培养液和灭活菌液均可提高肉仔鸡生长性能和和免疫功能。     

烟曲霉菌感染对雏鸡免疫器官指数及新城疫抗体水平的影响

为了研究烟曲霉菌感染对雏鸡免疫器官指数及新城疫抗体水平的影响,试验选取40只14日龄海兰褐公鸡,随机分成2组,每组20只,试验组用霉菌孢子攻毒3 d,对照组不攻毒,所有试验鸡均按常规模式进行饲养和防疫,并于攻毒后第5天从试验组和对照组中各选10只鸡进行免疫器官指数的测定和血清中新城疫病毒抗体效价测定。结果表明:试验组雏鸡体重降低,法氏囊、胸腺重及法氏囊指数、胸腺指数均低于对照组且差异显著(P0.05);脾脏重和脾脏指数与对照组相比差异不显著(P0.05);试验组雏鸡新城疫血清抗体效价低于对照组,且差异显著(P0.05)。说明烟曲霉菌感染能造成雏鸡免疫抑制,导致免疫器官萎缩、变小,使免疫机能下降,影响疫苗免疫效果。     

肠道中药对实验小鼠肠道乳酸菌和抗病能力的影响

为了研究肠道中药即肠痢康对小鼠肠道乳酸菌和抗病能力的影响,取32只SPF级BALB/c雄性小鼠,随机平均分为2组:对照组和试验组。试验组按照药量浓度计算进行饮水供给,空白组小鼠自由采食饮水,记录小鼠每天采食量,计算料肉比;酯酶染色法检测试验第1周,2周,3周,4周的T、B淋巴细胞比值的动态变化;1个月后,将对照组和试验组中各8只小鼠进行致病性葡萄球菌的攻毒试验,观察小鼠发病后即全部处死,ELISA检测小鼠血清中的IgM和C3,生化方法检测天门冬氨酸氨基转移酶(AST)和丙氨酸氨基转移酶(ALT);采集小鼠肝脏和脾脏进行常规病理学染色,同时无菌进行乳酸菌的检测。结果显示,试验组的料肉比数值明显小于对照组(P0.05),显示对小鼠生长有显著性促进作用;试验组T、B细胞比值高于对照组,差异显著(P0.05);攻毒后,中药试验组的IgM明显高于对照组,差异显著(P0.05),AST和ALT的含量显著低于对照组;常规染色方法观察对照组的肝脏和脾脏损伤程度明显高于药物试验组,显示中药试验组对肝脏具有保护作用,提高免疫功能。     

不同免疫程序对猪蓝耳病疫苗免疫效果的影响

为研究不同免疫程序对猪蓝耳病疫苗免疫效果的影响,本试验选取42头未免健康断奶仔猪,随机分为4组。A组对照组,B组免疫弱毒苗组,C组免疫灭活苗组,D组同时免疫弱毒苗和灭活苗组。分别在免疫前和免疫后第14,28,42,56,70天前腔静脉采血,采用ELISA方法检测特异性抗体,同时检测淋巴细胞转化率以及IFN-α、IFN-γ、TNF-α等细胞因子水平。结果显示:免疫后,B组抗体水平显著高于D组(P<0.05)、A组(P<0.01);在免疫后第42天,D组淋巴细胞转化率显著高于B组、C组(P<0.01),显著高于A组(P<0.01),免疫后第56天,B组淋巴细胞转化率高于C、D组(P<0.05);B组细胞因子水平在免疫后第14天高于其他3组,加强免疫后细胞因子水平均有所下降,在免疫后第70天时升高。结果表明,免疫蓝耳病弱毒苗组免疫效果优于免疫灭活苗组和两种疫苗同时免疫组。     

猪圆环病毒2型感染对仔猪免疫功能的影响

为研究猪圆环病毒2型(PCV2)对宿主免疫应答的动态影响,选取19头PCV2和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)血清抗体阴性的普通断奶仔猪,随机分为对照组(4头)和试验组(15头),试验组每头仔猪接种PCV2病毒悬液,分离攻毒后0、3、7、14、21、28和35 d仔猪外周血淋巴细胞和血清,用MTT法检测外周血淋巴细胞的转化率,并用ELISA法检测血清中白细胞介素(IL)-1β、IL-2、IL-6和IL-10的表达变化。结果显示,脂多糖(LPS)刺激下仔猪外周血淋巴细胞的转化率在攻毒后各时间点均极显著降低(P0.01);植物血凝素(PHA)刺激下仔猪外周血淋巴细胞的转化率在攻毒后3、21和28 d极显著降低(P0.01),在攻毒后14 d显著降低(P0.05);与对照猪相比,攻毒猪血清中IL-6的含量在攻毒后各时间点均无显著变化(P0.05);IL-1β的含量在攻毒后7 d显著升高(P0.05),IL-10的含量在攻毒后35 d极显著升高(P0.01);IL-2的含量在攻毒后7 d显著降低(P0.05),在攻毒后21 d显著升高(P0.05),在攻毒后28和35 d均极显著升高(P0.01)。结果表明,PCV2能显著抑制仔猪外周血T、B淋巴细胞的转化能力,并能激活机体的固有免疫应答,但同时能导致适应性免疫应答的活化出现迟滞并在攻毒后期引起免疫调节紊乱。     

霉玉米对小鼠体重和外周血淋巴细胞数量的影响

50只小鼠随机分为5组,每组10只,用于研究霉玉米对小鼠体重及外周血液淋巴细胞的影响。试验前将1组小鼠处死,采样作为对照,其余4组饲喂霉玉米饼,每周处死1组采样。结果表明,试验组小鼠的体重下降,但攻毒前后比较差异不显著(P>0.05);试验组小鼠的外周血中T淋巴细胞数量减少极显著(P<0.01)。表明霉玉米中毒影响小鼠的免疫功能,造成T、B淋巴细胞计数的改变。     

猪白细胞介素4/6与牛融合抗菌肽共表达重组毕赤酵母的构建及其对小鼠的免疫协同效应

以2A自剪接技术构建猪白细胞介素4/6与牛融合抗菌肽(FBC)共表达重组毕赤酵母,为研究重组酵母对小鼠体内外的免疫协同效应,首先采用猪淋巴细胞增殖试验和抑菌试验研究重组毕赤酵母的体外生物学活性;再以发酵的重组酵母菌液进行小鼠灌胃试验,在试验的28d用致病性大肠杆菌和金黄色葡萄球菌进行腹腔攻毒,每周采血检测小鼠的生长和免疫功能变化。体外试验结果显示,试验组比对照组显著刺激猪淋巴细胞增殖;明显抑制大肠杆菌标准菌、大肠杆菌耐药菌、金黄色葡萄球菌标准菌和金黄色葡萄球菌耐药菌的生长(P0.05)。小鼠灌胃试验结果表明,试验组小鼠外周血的白细胞、Th和Tc细胞含量显著多于对照组;试验组tlrs(tlr-1,4,6,9),il-1,il-2,il-4,il-6,il-7,il-15,il-23和cd62l基因的表达明显高于对照组;试验组血清中的IgG、IgG1和IgG2a的含量比对照组显著增加。此外,试验组小鼠的体质量比对照组明显增加。攻毒后试验组80%的小鼠存活,而对照组小鼠则有明显的炎症及临床症状,最后全部死于感染,这表明试验组的存活率显著高于对照组(P0.05)。白细胞介素4/6与牛融合抗菌肽共表达重组毕赤酵母能够有效提高小鼠免疫功能,为探索研制增强动物免疫机能的安全高效的免疫调节剂提供新途径。     

草分枝杆菌对猪繁殖与呼吸综合征免疫抗体水平的影响

为了探讨草分枝杆菌对猪繁殖与呼吸综合征活疫苗的免疫应答效果.试验选取30日龄健康的断奶仔猪20头,随机分成4组,1个对照组和3个试验组(试验组Ⅰ、试验组Ⅱ和试验组Ⅲ),每组5头.对照组正常饲养并进行猪繁殖与呼吸综合征活疫苗免疫,试验组Ⅰ、试验组Ⅱ和试验组Ⅲ在猪繁殖与呼吸综合征活疫苗免疫的前后7d于饲料中分别添加0.1％、0.2％和0.5％的灭活草分枝杆菌粉,于免疫前1d和免疫后的第14、21、28天和第35天测其抗体水平.试验结果表明,3个试验组猪只的抗体OD630nm值均极显著的高于对照组(P＜0.01),试验组Ⅱ和试验组Ⅲ抗体效价高于试验组Ⅰ,差异显著(P＜0.05).本研究结果表明,在猪饲料中添加0.2％以上的草分枝杆菌,可有效的提高猪繁殖与呼吸综合征的疫苗免疫效果.     

复方乌梅对鲤鱼非特异性免疫的影响

采用复方乌梅按1.0%饲料配比分阶段地投喂鲤鱼进行为期16 d的药效试验,于试验第9 d用温和气单胞菌进行攻毒,分别测定攻毒后的鲤鱼死亡率和非特异性免疫指标。结果显示:3个试验组鲤鱼死亡率显著低于对照组(P<0.05),其中全程给药组死亡率最低;红细胞数、NBT阳性细胞数、淋巴细胞吞噬活性均表现为试验组显著高于对照组(P<0.05),其中全程给药组与对照组比较差异极显著(P<0.01);免疫器官指数和血红蛋白含量试验组与对照组相比差异不显著(P>0.05)。由此表明复方乌梅能明显增强鲤鱼的非特异性免疫和对温和气单胞菌的抗感染能力,并且全程给药组的免疫效果最佳。     

一株牦牛源屎肠球菌对小鼠肠道微生物、形态和免疫功能的影响

为研究牦牛肠黏膜源屎肠球菌G2对健康小鼠肠道微生物、形态和免疫功能的影响,试验设置对照组(CON)、热灭活菌组(EHK)、活菌组(ENT)3个处理组,每组8只C57BL/6小鼠,共计24只。CON组、EHK组、ENT组于正式试验期第1、2、4、6天按0.1 mL/只分别灌胃M17培养基、热灭活菌液和活菌菌液,灌胃前无菌收集小鼠粪便进行乳酸菌总菌计数,第8天处死小鼠取样。结果表明:ENT组乳酸菌总菌数量在第3、5天显著大于CON组与EHK组(P <0.05);各组小鼠结肠病理学评分无显著差异,但ENT组隐窝深度显著高于CON组与EHK组(P <0.05);各组间肠黏膜免疫因子Reg3β、Reg3γ和MUC2基因mRNA表达量差异不显著,TNF-α表达量ENT组显著低于CON组(P <0.05)。综上可知,牦牛源屎肠球菌G2可能为一种肠道过路菌,能在短时间内提高肠道乳酸菌的总数,一定程度上具有改善肠道形态和促进肠道健康的作用。     

不同硒源对淮南麻鸭1～9周龄生长性能及免疫功能的影响

试验旨在研究不同硒源对淮南麻鸭1~9周龄生长性能及免疫功能的影响。选择144只1日龄健康且体质量相近的淮南麻鸭,随机分为4组,Ⅰ组为对照组,饲喂基础饲粮;Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组为试验组,基础饲粮中分别添加0.2 mg/kg亚硒酸钠、酵母硒和纳米硒,试验期9周。结果显示:与Ⅰ组相比,Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组的体质量分别提高12.21%、18.05%和18.58%,差异显著(P0.05);Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组的日增质量分别提高12.23%、18.06%和18.60%,差异显著(P0.05),但各试验组间差异不显著(P0.05);Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组的料重比分别降低13.17%、17.78%和18.66%,差异显著(P0.05),且Ⅳ组料重比最低,饲料转化率最高。试验组的日采食量与对照组间差异均不显著(P0.05)。各试验组的免疫器官指数及T淋巴细胞转化率均显著高于对照组(P0.05),Ⅳ组与Ⅲ组在免疫器官指数及T淋巴细胞转化率间差异不显著(P0.05),除法氏囊指数外,Ⅳ组与Ⅲ组的胸腺、脾指数及T淋巴细胞转化率均显著高于Ⅱ组(P0.05)。综上所述,3种硒源均可显著影响淮南麻鸭1~9周龄体质量、日增质量、料重比、免疫器官指数及T淋巴细胞转化率,且酵母硒与纳米硒的效果优于亚硒酸钠。     

一种新型复合生物活性肽对SPF鸡抗病力和生长性能的影响

为了研究一种新型复合生物活性肽对鸡的抗病力和生长性能的影响,试验将180只1日龄SSA-Ⅰ系SPF雏鸡随机分为4组,试验组全程添加1‰生物活性肽,对照组不添加。分别测定各组淋巴细胞转化率、血清总蛋白含量、饲料增重比、新城疫抗体效价及攻毒后鸡只发病和死亡情况。结果表明:在7,21日龄时,两组间T淋巴细胞转化率差异显著(P0.05);35日龄时,两组间血清总蛋白含量差异极显著(P0.01);两组间饲料增重比差异不显著(P0.05);在28,35日龄时,试验组新城疫抗体水平均有所增加,与对照组比较差异显著(P0.05)。说明该生物活性肽能够提高SPF鸡T淋巴细胞转化率,增强体液免疫力,提高机体血清总蛋白含量,对饲料增重比的影响不明显,具有一定的抗病能力。     

评价牛型布鲁氏菌疫苗免疫保护力BALB/c鼠模型的建立

为建立评价流产布鲁氏菌疫苗株免疫保护力的小鼠模型,选取6周龄雌性BALB/c小鼠为试验动物,随机分为3组(n=40):A19免疫攻毒组、非免疫攻毒组和PBS对照组。A19免疫组腹腔接种BALB/c鼠A19 5.0×10⁴ CFU,非免疫攻毒组和PBS对照组均接种PBS液0.2 mL。免疫后45 d,A19免疫攻毒组和非免疫攻毒组BALB/c鼠以3.0×10⁴ CFU剂量的2308强毒株攻击,攻毒后15和45 d分别剖杀小鼠,取小鼠脾脏称重、细菌分离、病理组织学检测。结果表明,攻毒后15 d,A19免疫攻毒组与未免疫攻毒组和PBS对照组之间克脾指数差异显著(P<0.05);攻毒后45 d,A19免疫攻毒组与PBS对照组的克脾指数差异不显著(P>0.05),与未免疫攻毒组克脾指数差异显著(P<0.05);免疫攻毒组的小鼠组织病理变化明显轻于未免疫攻毒组。结果表明,用BALB/c鼠为试验动物,以A19为疫苗参考株建立动物实验模型可以应用于牛型布鲁氏菌疫苗免疫保护力评价。     

中草药添加剂对雏鸡新城疫免疫效果及抗病力的影响

为了研究中草药添加剂对雏鸡新城疫免疫效果及抗病力的影响,试验选择健康雏鸡400只,随机分为2组,每组200只,试验组从1日龄开始将1%中草药添加到雏鸡饲料中混匀饲喂,连喂50 d;对照组不添加任何物质正常饲喂雏鸡饲料。7日龄时所有鸡只免疫新城疫Ⅳ系弱毒疫苗,分别在14日龄和25日龄时测定血清中免疫球蛋白含量并进行血凝抑制试验,30日龄时进行攻毒试验,测定发病率、死亡率、保护率和血清抗体效价。结果表明:14日龄和25日龄时,试验组血清IgG、IgM含量均显著高于对照组(P0.05);血清IgA含量组间差异不显著(P0.05);14日龄时试验组新城疫抗体效价略高于对照组(P0.05),25日龄时试验组显著高于对照组(P0.05);试验组的发病率、死亡率极显著低于对照组(P0.01);试验组免疫保护率达99%,极显著高于对照组(P0.01)。说明中草药添加剂有明显提高雏鸡免疫球蛋白含量和促进新城疫抗体形成的作用,降低发病率和死亡率,提高免疫保护率,有利于提高鸡新城疫疫苗的免疫保护力和鸡的抗病力。     

葡萄原花青素对感染柔嫩艾美尔球虫肉仔鸡生长性能和免疫功能的影响

本试验旨在研究饲粮中添加葡萄原花青素(GPC)对感染柔嫩艾美尔球虫肉仔鸡生长性能和免疫功能的影响。选用350只1日龄科宝-500(Cobb-500)健康肉仔鸡(公雏),随机分为5个组,每组7个重复,每个重复10只鸡。空白对照组和负对照组饲喂基础饲粮,试验组分别饲喂在基础饲粮基础上添加7.5、15.0和30.0 mg/kg GPC的试验饲粮。14日龄时,负对照组和3个试验组每只肉仔鸡经口腔攻毒5×104个柔嫩艾美尔球虫卵囊,空白对照组每只肉仔鸡灌服同体积的生理盐水。试验期42 d,分为前期(1~21日龄)和后期(22~42日龄)2个阶段。结果表明:1)与空白对照组相比,负对照组肉仔鸡试验各阶段的平均日增重(ADG)均显著降低(P0.05),22~42日龄和1~42日龄时的料重比(F/G)显著增加(P0.05);饲粮中添加7.5和15.0 mg/kg GPC显著改善了柔嫩艾美尔球虫攻毒引起的22~42日龄和1~42日龄时ADG的降低和F/G的增加(P0.05);而饲粮中添加30.0 mg/kg GPC显著降低了22~42日龄时的ADG、平均日采食量(ADFI)和1~42日龄时的ADG(P0.05)。2)与负对照组相比,饲粮中添加GPC显著降低了肉仔鸡的盲肠病变评分、血便堆数和球虫卵囊排出数(P0.05)。3)饲粮中添加GPC显著抑制了柔嫩艾美尔球虫攻毒引起的肉仔鸡脾脏指数增加(P0.05);柔嫩艾美尔球虫攻毒引起T淋巴细胞转化率显著增加(P0.05),饲粮中添加7.5和15.0 mg/kg GPC使T淋巴细胞转化率进一步增加(P0.05);饲粮中添加7.5和15.0 mg/kg GPC可使B淋巴细胞转化率增加(P0.05);柔嫩艾美尔球虫攻毒引起外周血γδT细胞比例显著增加(P0.05),饲粮中添加15.0 mg/kg GPC使外周血γδT细胞比例进一步增加(P0.05)。4)与空白对照组相比,柔嫩艾美尔球虫攻毒显著增加了回肠上皮内淋巴细胞(IEL)数量和盲肠黏膜分泌型免疫球蛋白A(s Ig A)水平(P0.05),饲粮中添加7.5和15.0 mg/kg GPC使IEL数量和s Ig A水平进一步增加(P0.05)。综上所述,饲粮中添加GPC可提高感染柔嫩艾美尔球虫肉仔鸡的免疫功能,缓解柔嫩艾美尔球虫感染造成的生长抑制,其中7.5和15.0 mg/kg GPC的抗球虫效果较好。     

牛副结核分枝杆菌多组分亚单位疫苗的初步研究

为筛选出最佳的预防副结核病的候选疫苗,本研究评价了副结核分枝杆菌(MAP)培养上清、MAP细胞壁和MAP灭活菌体的免疫保护效果。将160只6周龄雌性BALB/c小鼠随机分为8组,每组20只,分别为PBS组、菌影(Ghost)组、弗氏不完全佐剂(IFA)组、上清+Ghost组、上清+IFA组、细胞壁+Ghost组、细胞壁+IFA组和灭活苗组,分别经皮下注射免疫后在不同的时间点采集小鼠尾静脉血,利用间接ELISA检测小鼠血清中抗体效价。三免后以5×10~8cfu/只剂量进行腹腔攻毒。结果显示:细胞壁+IFA组小鼠的抗体水平明显高于其它组(p0.001),细胞壁+Ghost组次之(p0.001);除阴性对照组外,各组小鼠IgG1的滴度均高于IgG2a (p0.001);细胞壁+IFA组和细胞壁+Ghost组的小鼠脾脏淋巴细胞培养上清中IFN-γ、IL-4和IL-10的含量显著高于其它实验组(p0.001);细胞壁+IFA组IL-2的含量明显高于其它实验组(p0.001),细胞壁+Ghost组次之(p0.01);细胞壁+IFA组小鼠的肝脏、脾脏和小肠组织的荷菌量显著少于其它实验组(p0.01),细胞壁+Ghost组次之(p0.05),表明MAP细胞壁可以刺激机体产生较高水平的抗体,机体的免疫反应倾向于体液免疫,且细胞壁对攻毒小鼠的保护效果最好。本研究为反刍动物副结核病疫苗的研制提供了实验依据。     

猪圆环病毒2型和副猪嗜血杆菌5型二联灭活疫苗研制与免疫效力研究

猪圆环病毒2型(PCV2)和副猪嗜血杆菌(HPs)混合感染十分普遍,造成我国养猪业严重经济损失。本研究将杆状病毒表达的重组PCV2 Cap蛋白(BCap)和PCV2灭活病毒液(i PCV2),分别与HPs血清5型(HPs5)灭活菌液混合,加入水性佐剂混合制备成BCap/HPs5与i PCV2/HPs5二联灭活疫苗,进行猪体免疫保护试验。仔猪免疫保护试验结果为:两种疫苗免疫后均可诱导猪体产生PCV2和HPs抗体。免疫后35天用PCV2攻击,两免疫组猪均无明显临床症状,相对日增重(RDWG)与空白对照组相似,但高于攻毒对照组(P0.05);攻毒后14天,病毒血症明显低于攻毒对照组(P0.05);攻毒后28天剖解,腹股沟淋巴结PCV2载量明显低于攻毒对照组(P0.05),病理学变化明显轻于攻毒对照组。免疫后35天用HPs攻击,对照组猪均出现明显临床症状,但两免疫组猪无明显临床症状;攻毒后14天剖检,两免疫组病理学变化方面相似,但明显轻于攻毒对照组。结果表明,BCap/HPs5与i PCV2/HPs5两种二联苗免疫仔猪后均能诱导机体产生免疫应答,产生免疫保护作用,具有较好应用前景。     

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)疫苗不同免疫程序对细胞因子分泌的影响

为分析仔猪首次免疫猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)弱毒疫苗对血清细胞因子分泌水平的影响,本试验筛选PRRSV抗原与抗体均为阴性的7日龄仔猪40头,平均分为4组,其中试验A、B、C组均为14日龄首次免疫经典弱毒疫苗,试验A组35日龄二免用高致病性灭活疫苗,试验B组35日龄二免用经典弱毒疫苗,试验C组35日龄注射生理盐水,对照组均注射生理盐水。分别于首免后1,2,3周和二免后1,2,3,4,5,6周前腔静脉采血分离血清,采用细胞因子ELISA方法检测IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-10和IL-12细胞免疫水平。结果显示,仔猪14日龄首次免疫弱毒疫苗后能迅速分泌细胞因子,首免3周以内,试验组IFN-γ分泌量均高于对照组,差异极显著(P0.01);试验组TNF-α分泌量高于对照组,差异极显著(P0.01),且试验A组试验B组试验C组,其差异不显著(P0.05);试验组IL-2分泌量高于对照组,试验A组最高,其差异显著(P0.05);试验组IL-10分泌量高于对照组,试验C组最高,其差异显著(P0.05);试验组IL-12分泌量高于对照组,试验A组最高,其差异显著(P0.05)。35日龄二免弱毒疫苗或灭活疫苗3周后,除IFN-γ外,试验A组的TNF-α、IL-2、IL-10和IL-12分泌水平均高于试验B组和试验C组。结果表明,14日龄首免PRRSV弱毒疫苗和35日龄二免PRRSV灭活疫苗的免疫效果优于仅单独2次免疫PRRSV弱毒疫苗或1次免疫PRRSV弱毒疫苗。     

共表达猪IL-4/6与抗菌肽融合基因的重组酵母菌的生物活性及其对小鼠免疫增强作用研究

为开发高效安全经济的免疫调节剂,本研究构建了共表达猪IL-4/6和猪抗菌肽融合基因VRP的重组毕赤酵母SG46P。通过猪淋巴细胞增殖试验和抑菌试验检测其发酵上清液的生物学活性和抑菌活性,并用该重组毕赤酵母对30只21日龄雌性ICR小鼠进行灌胃接种。接种后,每周采集小鼠尾部静脉血进行免疫功能分析试验;并在第28 d用大肠杆菌和金黄色葡萄球菌进行小鼠腹腔攻毒试验。结果显示:实验组SG46P的发酵上清液较对照组能显著刺激猪淋巴细胞的增殖(p0.05),且该发酵上清液具有明显的抑菌作用(p0.05)。接种重组毕赤酵母SG46P的小鼠的体质量有所增加(p0.05)且其外周血中白细胞数量、血红蛋白含量均显著高于对照组(p0.05);其血清中Ig G、Ig G1和Ig G2a抗体水平均较对照组显著增加(p0.05),其外周血中CD4+T和CD8+T淋巴细胞数量均显著高于对照组(p0.05);TLR4、TLR9、IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-6、CD62L、IL-7、IL-23、CAMP和Crp4基因的转录水平均显著高于对照组(p0.05)。攻毒后,接种SG46P的小鼠的生存率显著高于对照组(p0.05)。结果表明:重组毕赤酵母SG46P不仅能够显著提高小鼠免疫基因的转录水平,有效提高动物的先天和获得性免疫水平,还可明显增强小鼠抗感染能力,这为研制高效安全经济的分子免疫调节剂和防治动物传染病开拓了新途径。     

表面展示副结核分枝杆菌抗原MAP3007的大肠杆菌活载体疫苗株的构建与免疫效力评价

为构建表面展示副结核分枝杆菌抗原MAP3007的大肠杆菌活载体疫苗株,本研究将冰核蛋白(INP)作为展示平台,将目的基因克隆于构建的pET-INP表面展示载体中,转入大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达后,对目的蛋白的表达与定位进行检测。将110只雌性BALB/c小鼠随机分为PBS组(30只),INP-28a对照组(30只),INP-MAP3007重组菌免疫组(30只),空白未攻毒组(20只),其中对照组INP-28a与重组菌INP-MAP3007免疫组以5×10~5cfu/200μL/只剂量分别免疫INP-28a空菌与INP-MAP3007重组疫苗,PBS组注射等体积PBS,3免后以5×10~8cfu/只进行副结核分支杆菌K-10株攻毒试验,空白未攻毒组不做处理,通过检测各组小鼠抗体水平、细胞因子、CD4~+和CD8~+T细胞亚群、增重率以及肠、肝脏和脾脏的病理损伤综合评价疫苗的免疫效果。结果显示,目的蛋白MAP3007正确表达且定位于细菌表面;经3次免疫后疫苗组与其他对照组相比能产生较高的抗体水平(p0.001);攻毒后与其他对照组相比,疫苗组小鼠细胞因子IFN-γ和IL-4极显著升高(p0.001),同时抗炎性细胞因子IL-10降低;疫苗组CD4~+T、CD8~+T淋巴细胞数量极显著增加(p0.001),且疫苗组小鼠体重增长速度与未攻毒组基本一致;病理组织学结果发现疫苗组各器官病变情况相对较轻或无显著病变。上述结果表明表面展示活载体疫苗能够诱导小鼠产生细胞免疫和体液免疫进而提供较好的免疫保护,且可以降低其病理损伤程度,减缓病程。本研究为新型副结核杆菌疫苗的研制奠定了基础。