普安银鲫胚胎发育的初步研究

经人工催产、人工授精获得普安银鲫受精卵,对其胚胎发育过程和各发育时期外部形态特征进行了连续观察,并研究了不同温度条件下其胚胎发育的特点。研究结果表明,普安银鲫受精卵近似圆球形,淡灰色,沉性卵,强粘性;卵径1.50mm,吸水后1.88mm;受精后开始形成卵间隙,且植物极的卵间隙大于动物极的;卵间隙形成过程中卵黄收缩,略变小。普安银鲫胚胎发育过程可分为23个发育期,水温18℃时需98.72h出膜,水温24℃和26℃时分别需要56.48h、48.2h出膜。不同温度条件下,普安银鲫胚胎发育早期(胚盘～原肠胚)在18℃恒定水温条件下存活率最高,发育后期阶段(神经胚～出膜)在24℃恒定水温条件下存活率最高。     

普安银鲫胚胎发育中抗氧化酶活性及外源维生素C的作用

在水温24℃下测定了普安银鲫胚胎发育过程中超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶的活性。试验结果表明,超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶在成熟卵中具有活性,分别为（10．213±0．458） U／mg、（8．701±0．371） U／mg和（55．485±4．896） U／mg ,属母源性抗氧化酶。对照组从成熟卵发育至出膜前期,超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性逐渐升高,而过氧化氢酶的活性呈“升高-降低-升高”的趋势,在心跳期降到最低,为（6．175±0．532） U／m g ,随后其活性开始上升。30 m g／L的维生素C组,普安银鲫胚胎从受精卵至出膜前期,超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性总体上高于对照组。胚胎发育过程中母源性抗氧化酶发挥重要作用;孵化水体中适宜质量浓度的维生素C提高了胚胎期的抗氧化能力。     

维生素C对普安银鲫胚胎发育中两种脂酶活性的影响

在水温24℃下,研究了普安银鲫(Carassius auratus)胚胎发育过程中脂蛋白脂酶(LPL)、肝脂酶(HL)和总脂酶(GE)活性的变化特点及维生素C溶液浸泡对其影响。结果显示:(1)胚胎中LPL、HL和GE的比活力与全活力比成熟卵中高。(2)随胚胎发育,LPL、HL和GE比活力与全活力上升,自原肠中期始,LPL和HL的活性显著升高(P<0.05),出膜前期达最高。(3)30mg/L维生素C溶液浸泡促使普安银鲫胚胎发育过程中LPL、HL和GE比活力与全活力升高。合子中LPL和HL基因可能在原肠期开始表达,合成脂质水解酶分解脂质,为胚胎发育提供能量。在水体中添加适宜水平的维生素C能促进普安银鲫胚胎发育,维持机体内脂质的正常代谢。     

葡萄糖、维生素C对普安银鲫早期发育的影响

为探究葡萄糖和维生素C（VC）对普安银鲫（Carassius auratus gibelio）早期发育的影响,采用静水溶液浸泡法研究了葡萄糖和VC溶液浸泡中普安银鲫仔鱼出膜时间、孵化率、成活率及卵黄囊仔鱼生长特点。结果显示,葡萄糖溶液质量浓度低于15 g·L^-1,仔鱼出膜时间随着葡萄糖质量浓度的增加而缩短,孵化率、成活率、体质量和全长则升高;葡萄糖溶液质量浓度高于15 g·L^-1对普安银鲫的早期发育表现出抑制作用。VC溶液质量浓度低于30mg·L^-1时,仔鱼出膜时间随着ρ（VC）的增加而降低,孵化率、成活率、体质量和全长则升高。ρ（VC）高于30mg·L^-1对普安银鲫的早期发育表现出抑制作用。研究表明适宜浓度的葡萄糖和VC能促进普安银鲫的早期发育。     

普安银鲫(Carassius auratus gibelio)卵黄囊期脂蛋白脂酶和肝脂酶基因的表达及葡萄糖、维生素C对其的影响

为了探讨普安银鲫(Carassius auratus gibelio)卵黄囊期脂蛋白脂酶(Lipoprotein lipase, LPL)和肝脂酶(Hepatic lipase, HL)的表达特点及葡萄糖和维生素C溶液分别浸泡对它们的影响,本研究采用荧光定量PCR技术检测LPL和HL基因在普安银鲫卵黄囊仔鱼发育中的表达情况及mRNA表达水平,并检测了葡萄糖、维生素C对这两种基因mRNA表达量的影响。结果显示,LPL和HL基因在普安银鲫内源营养期、混合营养期和外源营养期均有表达,且LPL和HL mRNA表达量呈上升变化。葡萄糖组LPL和HL mRNA表达量呈上升变化,维生素C组也呈上升变化。在内源营养期、混合营养期和外源营养期,葡萄糖能显著上调LPL和HL mRNA的表达量(P<0.05);在内源营养期、混合营养期和外源营养期,维生素C能显著上调LPL mRNA的表达量,而HL mRNA的表达量在混合营养期和外源营养期显著高于对照组(P<0.05)。研究表明,普安银鲫发育至混合营养期时,机体内脂质分解代谢增强。适宜水平的葡萄糖、维生素C能诱导LPL和HL mRNA的表达。     

温度与孔雀石绿浓度对银鲫胚胎发育的影响

温度与银鲫的胚胎发育有着密切的关系：温度升高，胚胎发育速度加快；银鲫胚胎发育的适宜温度为１６℃－３２℃．最适温度为１８℃—３０℃，临界温度为１５℃和３３℃。孔雀石绿对银鲫的胚胎发育有一定的毒害作用．其安全浓度与处理时间有关．     

普安银鲫早期发育中载脂蛋白B、总胆固醇和甘油三酯的含量及葡萄糖和维生素C对其影响

为探究普安银鲫早期发育中载脂蛋白B、甘油三酯和总胆固醇的含量变化及葡萄糖溶液和维生素C溶液分别浸泡对它们的影响,采用生化方法测定分析了普安银鲫早期发育中载脂蛋白B、总胆固醇和甘油三酯的含量变化特点。结果显示:载脂蛋白B、总胆固醇和甘油三酯的含量在整个早期发育中均呈"下降-上升"趋势。从受精卵到外源营养期,葡萄糖组载脂蛋白B、总胆固醇和甘油三酯含量呈"上升-下降-上升"趋势,且从原肠中期到内源营养期,葡萄糖组载脂蛋白B和甘油三酯含量显著高于对照组,而总胆固醇含量从原肠中期到混合营养期显著高于对照组(P0.05)。维生素C组载脂蛋白B和总胆固醇含量呈"下降-上升"趋势,甘油三酯含量均呈"上升-下降-上升"趋势,且载脂蛋白B含量从原肠中期到内源营养期显著高于对照组,同时在外源营养期也显著高于对照组,甘油三酯含量从原肠中期至外源营养期显著高于对照组(P0.05),而总胆固醇含量在整个发育中仅稍高于对照组。研究表明,载脂蛋白B、总胆固醇和甘油三酯参与普安银鲫早期发育中能量代谢和各器官、组织膜物质的构建,同时适宜水平的葡萄糖溶液、维生素C溶液均能促进普安银鲫早期发育中载脂蛋白B、总胆固醇和甘油三酯的合成。     

普安银鲫早期发育中ACCα和FAS基因表达及外源物质的影响

为了探讨普安银鲫(Carassius auratus gibelio)早期发育中乙酰辅酶A羧化酶α(acetyl-Co A carboxylas eα,ACCα)和脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FAS)表达特点及葡萄糖和维生素C溶液分别浸泡对它们的影响,采用荧光定量PCR技术检测ACCα和FAS基因在普安银鲫卵黄囊期的表达情况及mRNA表达水平,并检测了葡萄糖、维生素C对这两种基因mRNA表达量的影响。结果显示,FAS和ACCα基因在普安银鲫内源营养期、混合营养期和外源营养期均有表达。普安银鲫卵黄囊期ACCα和FAS mRNA表达量呈"下降-上升"变化。在15 g/L葡萄糖处理组中,从内源营养期发育到外源营养期,FAS和ACCα的mRNA表达量呈上升变化,且2种基因的表达均显著高于对照组(P0.05)。在30 mg/L维生素C处理组中,FAS和ACCα的mRNA表达量呈上升变化,且在混合营养期和外源营养期,2种基因的表达均显著高于对照组(P0.05)。研究表明,普安银鲫发育至混合营养期时,机体内脂质合成代谢减弱。适宜水平的葡萄糖和维生素C均能诱导ACCα和FAS mRNA的表达,有利于鱼体内脂质的合成。     

外源性Vc对普安银鲫仔鱼抗氧化酶活性的影响

将维生素C添加到普安银鲫的孵化水体中,维生素C浓度设置为20、25、30和35 mg/L,记录孵化率及仔鱼存活率,测定各浓度组中普安银鲫(Carassius auratus gibelio)仔鱼发育过程中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性,研究维生素C(Vc)对普安银鲫仔鱼发育的影响。结果显示:SOD和CAT的活性随着普安银鲫仔鱼发育时间的延长而增加,而GSH-Px活性则随着发育时间的延长而降低;30 mg/L的Vc溶液能显著(P0.05)提高普安银鲫仔鱼SOD、CAT和GSH-Px活性,且SOD的活性在出膜72 h后开始显著降低(P0.05),而CAT和GSH-Px则无显著变化(P0.05)。结果表明:普安银鲫仔鱼中抗氧化作用以SOD和CAT为主;适宜浓度的Vc添加到普安银鲫的育苗水体中能提高仔鱼的抗氧化能力。     

银鲫crh基因的克隆、组织表达谱及其对摄食的影响

为研究crh (Corticotropin-releasing hormone)基因对鱼类摄食的调控作用,首次克隆了银鲫(Carassius auratus gibelio) crh基因c DNA全长序列。运用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术检测crh基因m RNA在不同组织的表达及餐前、餐后和禁食对其表达的影响。结果显示,银鲫crh基因的c DNA序列全长为920 bp,其中,5’-UTR为53 bp,3’-UTR为378 bp,开放阅读框(Open reading frame,ORF)为489 bp。推导银鲫crh基因的ORF区编码蛋白由162个氨基酸组成,其中,含有11个氨基酸的保守区,24个氨基酸的信号肽,41个氨基酸的成熟肽。氨基酸序列的多重比较分析显示,银鲫crh基因与金鱼(Carassiusauratus)的同源性为99%,与鲤(Cyprinuscarpio)的同源性为96%。荧光定量PCR表达分析显示,银鲫crh基因在下丘脑中的表达量最高,其次是端脑和心脏。crh基因的表达量在餐前与餐后没有显著变化(P0.05),在禁食第5天、第7天出现极显著降低(P0.01),而在复投喂后第9天、第11天出现极显著升高(P0.01)。以上结果显示,crh基因在银鲫摄食调控方面可能扮演着重要角色。     

大菱鲆脂质代谢相关基因PPARs的组织表达及其对高温胁迫的响应

为研究大菱鲆过氧化物酶体增殖物激活受体家族(PPARs)的组织分布和高温胁迫下PPARs在肾脏中的表达情况。实验采用荧光定量PCR(qPCR)技术检测PPARs基因3种亚型在大菱鲆不同组织中的表达情况以及高温胁迫下大菱鲆肾脏中PPARs的表达情况。qPCR结果显示,大菱鲆PPARs 3种亚型的组织分布存在显著差异。PPARα1和PPARα2在心脏中的表达量显著高于其他组织;PPARβ在大菱鲆的各个组织中普遍表达;PPARγ在大菱鲆的鳃中出现了显著性的高表达。大菱鲆肾脏中PPARs的mRNA水平随着温度升高呈现出不同的响应模式。PPARα随温度升高表达水平先显著降低,后有所升高;PPARβ的表达量在14、20、23和25℃时差异不显著,当温度升高至大菱鲆的致死温度28℃时,表达量出现了显著性的升高;PPARγ在14℃时表达水平很低,但随着温度的升高不断增加。研究表明,大菱鲆中存在PPARα、PPARβ和PPARγ3种亚型,而且三者可能以组织特异性的方式参与脂质代谢的调节,首次指出PPARs 3种亚型在温度胁迫中的表达变化,对PPARs的研究将推动鱼类脂代谢研究,揭示鱼类PPARs在脂质代...     

普安银鲫细菌性败血症的防治措施

普安银鲫是在贵州省普安县青山镇一带独特的高原自然环境条件下形成的一个鲫鱼地方种,是用营天然雌核发育的普安银鲫A型为母本、兴国红鲤等鲤鱼为父本繁育的子一代,因其食性杂、生活力强、群体产量高,在各地均有养殖,且有了较快发展,但同时频频暴发细菌性败血症鱼病,给水产养殖生产造成严重的经济损失。因此,对普安银鲫细菌性败血症的诊断与防治就显得尤为重要。     

热应激对银鲫生化指标和HSP70 mRNA表达的影响

本研究旨在探讨热应激对银鲫(Carassius auratus gibelio)生化指标及肝脏HSP70 mRNA表达的影响,选取平均体重为(72.8±10.1) g的银鲫,分别在热应激前(25℃,对照组)、热应激后(32℃,0 h、2 h、6 h、10 h)和恢复适温后6 h (25℃,恢复组)的条件下,测定机体血浆乳酸(LD)、血浆葡萄糖(Glu)、肝糖原(Gly)、己糖激酶(HK)、丙酮酸激酶(PK)和肝脏HSP70 mRNA表达量变化。研究表明,实验组乳酸含量从热应激开始至恢复期,差异始终不显著(P>0.05);实验组血浆葡萄糖水平在热应激后0 h、2 h、6 h,极显著高于对照组(P<0.01);实验组肝糖原水平在热应激0 h时,极显著高于对照组(P<0.01),其余时间点差异不显著(P>0.05);己糖激酶活力在热应激后2 h,显著高于对照组(P>0.05);丙酮酸激酶活力在热应激后6 h,极显著高于对照组(P<0.01);热应激后2 h,肝脏中HSP70 mRNA表达量达到最高(P<0.01),恢复至适温后,表达量与应激前无差异(P>0.05)。本研究为进一步探究银鲫的高温应激作用机制及调控机理提供参考数据,同时,也为银鲫养殖和育种等生产实践提供相应参考依据。     

分级对银鲫生长和个体大小差异的影响

在室内水槽进行12周的饲养实验以检验分级对银鲫生长和鱼群内个体大小差异的影响。用隔网将实验水槽分为两部分,每个水槽内放养10尾大鱼（体重8.0~9.0 g）和10尾小鱼（体重6.5~7.5 g）,分级时将个体大小相近的10尾鱼分布在隔网同一侧。实验中,3组鱼分别隔1周、2周或4周分级1次,1组鱼不进行分级作为对照。鱼摄食率和生长率随分级间隔时间缩短而降低。实验结束时,隔1周分级1次的鱼体重低于对照组,隔4周分级1次的鱼体重与对照组无显著差异。实验结束时被分级的鱼群中大鱼体重的变异系数高于小鱼,表明大鱼对分级操作更敏感。本实验结果表明,分级未能明显提高银鲫生长速度和降低鱼群内个体大小的差异程度。     

普安银鲫暴发指环虫病的诊断与防治

<正>普安银鲫(C.auratus),属鲤形目、鲤科、鲃亚科、鲫鱼属,俗称鲫鱼,是在贵州省普安县青山镇一带独特的高原自然环境条件下形成的一个鲫鱼地方种,1991年经上海市水产研究所鉴定为天然雌核发育鲫鱼,     

鲫血髓过氧化物酶的表达及其与血药浓度的关联性

为了研究在吡喹酮代谢过程中,鲫血髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)m RNA表达与血药浓度的相关性,以体重为(80±10.5)g的鲫鱼(Carassius auratus)为试验动物,单剂量(10 mg/kg)口灌吡喹酮(praziquantel,PZQ)后,在鲫血液中选取β-actin为内参基因,通过设计特异性引物,利用荧光定量PCR,分析了不同时间点鲫血MPO m RNA水平的相对表达量的变化;利用高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)测定了吡喹酮在鲫鱼体内的血药浓度,分析两者之间的相关性。结果显示,吡喹酮能够迅速进入血液,并被快速消除,药时数据符合二室开放模型。在1 h时,血液中吡喹酮的浓度达到最大值,为2.85?g/m L,96 h后血液中检测不到吡喹酮;灌药后,MPO基因表达量随时间呈先升后降趋势,在1 h时髓过氧化物酶表达量最高。此外,0.25 h、0.5 h、1 h、3 h与6 h组与对照组差异性极显著(P0.01),12 h组与对照组差异显著(P0.05)。48 h与96 h组与对照组差异不显著(P0.05)。相关性分析发现,MPO m RNA相对表达量与血液中吡喹酮的浓度之间相关系数r=0.96,为高度相关,并且推测MPO可能参与吡喹酮的氧化代谢。结论认为:(1)MPO m RNA相对表达量的升高与外源性药物吡喹酮的摄入有关。(2)血液中吡喹酮的残留量与MPO m RNA相对表达量线性相关。本研究旨在提供一种从分子水平评价水产动物体内药物残留的新思路。     

水温对额尔齐斯河银鲫幼鱼耗氧率及窒息点的影响

为鱼类养殖生产和苗种运输过程中溶解氧的科学调控提供理论依据,该试验采用密闭呼吸室法测定了20、22、24、26、28、30℃水温下额尔齐斯河银鲫幼鱼的耗氧率和窒息点。结果表明,水温在20～30℃时,额尔齐斯河银鲫幼鱼的耗氧率随水温的升高而显著上升(P<0.05)。水温为20℃时耗氧率最低,为0.263 mg/(g·h);水温为30℃时耗氧率最高,为0.571 mg/(g·h)。耗氧率与水温的拟合方程为:y=0.0093x^2-0.0027x+0.2604(R^2=0.9896)。额尔齐斯河银鲫幼鱼的窒息点在20～30℃水温下,随水温的升高而上升,其中水温为20℃时窒息点最低,为0.947 mg/L;水温为30℃时窒息点最高,为1.713 mg/L。水温和窒息点的回归关系方程式为:y=0.0271x^2-0.0629x+1.0452(R^2=0.9116)。     

微囊藻对银鲫生长和消化酶活性的影响及毒素积累

研究了淡水常见养殖品种银鲫(Carassius auratus)在有毒微囊藻环境条件下的生长和消化酶活性以及微囊藻毒素在鱼体内的积累情况.实验分为添加有毒微囊藻的实验组和不添加微囊藻的对照组2组,每组设3个平行,每个平行10尾银鲫,实验周期42 d.结果表明,有毒微囊藻能够极显著的抑制银鲫的生长(P＜0.01),添加微囊藻实验组的增重率为38.6%,不添加微囊藻的增重率为87.70%;有毒微囊藻能显著降低银鲫的消化酶活性(P＜0.05),添加微囊藻的实验组的银鲫的肠、肝胰脏蛋白酶活性和肠、肝胰脏淀粉酶活性分别是对应不添加微囊藻的对照组活性的60.6%、71.3%、65.4%、68.2%;而且毒素会最终在银鲫体内积累,并可通过食物链传到人类,从而对人类构成潜在的风险.因此,养殖水体微囊藻水华应该被引起足够重视.     

AFLP技术的优化及在三倍体银鲫DNA指纹图谱中的应用

扩增片段长度多态性(Amplified Fragment Length Polymorphism,AFLP)技术具有多态性丰富,所需DNA量少,灵敏度高等优点,但流程繁琐,花费时间长。本文根据AFLP技术的特点,在酶切-连接和聚丙烯酰胺凝胶的制备,这两方面做了很大改进。采用优化的AFLP技术分析三倍体银鲫的DNA指纹图谱,不仅缩短了实验所需时间,而且获得了稳定清晰的扩增带型。     

额尔齐斯河2种类型雌性银鲫的形态特征及D-loop基因序列比较

2008年5月调查发现,在额尔齐斯河主河道(185团)的雌性银鲫(Carassius auratus gibelio)群体中存在2种形态类型,按照体长比体高的形态学性状区分,分别为高背型(1.78~2.14)和低背型(2.18~2.39)。形态学分析表明,高背型和低背型的侧线鳞分别为31和30,侧线上(下)鳞为分别7和6,两者在体高、头高、尾柄高、体宽、头宽等性状上存在显著差异(P<0.01),高背型比低背型具有明显的体型优势。生长特性分析表明,在相同体长或年龄的雌性群体中,高背型的平均体质量约为低背型的1.3~1.9倍,而表现出更为优越的生长性能。线粒体控制区序列分析表明,高背型和低背型群体各自独享1个单倍型(分别为EG1和ED1),为2个不同的遗传谱系类群,遗传分化仅为0.004,远低于属内种间的0.020~0.045,两者尚属群体内变异;在分子系统关系中,高背型和低背型分别与方正银鲫的2个单倍型(FZ1和FZ13)共享并聚为单系,推测额尔齐斯河银鲫源自于黑龙江(方正银鲫)。与国内其他地方群体或品种比较表明,额尔齐斯河2种类型雌性银鲫,特别是高背型具有更为突出的生长优势,可作为优良的开发养殖品种和更具潜力的鱼类育种材料。