产纤维素酶真菌的筛选与鉴定

为从秸秆中分离出能够降解纤维的菌株,试验采取秸秆样品接种马铃薯琼脂培养基,在室温环境下培养,取分离菌接种纤维素刚果红琼脂培养基,筛选能形成较大降解圈的细菌,并进行形态学和分子生物学鉴定,测定其纤维素酶性质。结果表明,经分子生物学鉴定,筛选菌为黑曲霉菌,该菌在室温环境能够生长,菌株降解圈直径(H)与菌落直径(C)的比值(H/C)为7.64。筛选菌在20 ℃环境下培养5 d酶活达到最高值,为42.18 U/mL。纤维素酶最适pH为7.0,最适反应温度为20 ℃,在20~40 ℃或pH 6.0~8.0环境下作用1 h,相对酶活力仍保持在90%以上。综上所述,本试验分离的黑曲霉菌株是低温产纤维素酶菌株,产酶能力较强,具有潜在的开发价值。     

产纤维素酶细菌的分离筛选与鉴定

通过筛选获得高产纤维素酶细菌菌株,为纤维素酶制剂研制及纤维素酶工程菌构建提供试验材料。采用刚果红平板从牛羊粪便及腐败的玉米秸秆和木屑中分离产纤维素酶菌株,以DNS法测定酶活,根据酶活复筛产纤维素酶分离菌株;观察分离菌株的形态、染色与培养特性;应用16S rDNA通用引物扩增菌株基因组DNA,测序结果提交GenBank数据库进行Blast比对分析和相似性搜索,作出复筛菌株种的鉴定。结果表明:分离获得16株纤维素酶产量较高的细菌菌株,均为革兰氏阳性菌,菌体呈短杆状、具中央芽孢,经16S rDNA序列比对分析和相似性搜索,鉴定为10株枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、6株解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。     

高产纤维素酶菌的筛选及鉴定

为了获得高产纤维素酶的菌株,从纤维素含量丰富的地方进行取样,如稻秆堆积土壤、腐木堆积土壤等,以刚果红水解圈的大小作为判断标准,从12份样品中筛选出6株产酶能力强的菌株,并对其进行生理生化及16S r DNA鉴定,结果表明,2号为蜡状芽孢杆菌,5号为枯草芽孢杆菌,9号为巨大芽孢杆菌,10号为地衣芽孢杆菌,11号为微小杆菌,12号为绿色木霉。并把这些菌种用于固态发酵,选择麸皮和米糠两种不同的纤维质材料来进行发酵,用CMC法测量了发酵后的酶活力,发现地衣芽孢杆菌发酵后的活力最强,酶活值分别达到3 437 U/ml和8 541 U/ml,在生产上有潜在的应用前景。通过对地衣芽孢杆菌发酵温度、时间及含水量的初步优化,获得其固态发酵的最优化条件:培养温度30℃,培养时间60 h,初始水分含量40%。试验为进一步利用此菌株进行工业化生产奠定了基础。     

产纤维素酶酵母菌的筛选及鉴定

研究旨在筛选出产纤维素酶较高的酵母菌,并对其生物学特性探讨。试验从生境中筛选到产纤维素酶较高一株酵母菌,通过菌株形态学和分子生物学对该菌株进行了鉴定,并对这株菌的耐酸性、耐模拟肠液性、产酶特性和抑菌能力进行评定。结果表明,所筛酵母菌Y3为酿酒酵母菌,产纤维素内切葡聚糖酶酶活为3.27 U/ml,纤维素外切葡聚糖酶酶活为2.22 U/ml,木聚糖酶酶活为4.21 U/ml,耐酸性、耐模拟胃液较强,而耐模拟肠液能力较弱,不能产生抗金黄色葡萄球菌的物质。试验筛选到酿酒酵母菌Y3是一株较高产纤维素酶菌株并具有良好的生物学特性,对于提高粮食加工副产物的利用率具有非常重要的现实意义。     

产纤维素酶芽孢杆菌的筛选及鉴定

研究旨在通过定向筛选获得能够产纤维素酶的芽孢杆菌。试验从生境中筛选到产纤维素酶较高的一株芽孢杆菌,通过菌株形态学和分子生物学对菌株进行了鉴定,并对这株菌的耐模拟肠液性、产酶特性和抑菌能力进行评定。结果显示,所筛选的芽孢杆菌B13为解淀粉芽孢杆菌,产纤维素内切葡聚糖酶酶活为7.31 U/ml,纤维素外切葡聚糖酶酶活为5.26 U/ml,木聚糖酶酶活为32.46 U/ml,能够产淀粉酶和蛋白酶,耐模拟胃液能力较强,而耐模拟肠液能力较弱,不能产生抗金黄色葡萄球菌的物质。结果提示,本试验筛选到的解淀粉芽孢杆菌B13能够产生纤维素酶并具有良好生物学特性,为降低粮食加工副产物中纤维素含量、提高其利用率提供了参考。     

高产纤维素酶真菌的筛选鉴定与紫外诱变选育研究

试验旨在拟从腐朽木材和腐质土壤中获得1种高效的纤维素酶生产菌,利用紫外线诱变技术对其进行改造。采用刚果红染色法和酶活性试验,筛选出2株纤维素酶产率较高的菌（菌株HS5、菌株1）。经形态学和分子鉴定,菌株HS5为黄曲霉（Aspergillus flavus）,菌株1为烟曲霉（Aspergillus fumigatus）。在固体产酶培养基中,以水稻秸秆为唯一的碳源,28℃培养4 d后,HS5滤纸酶（FPA）的酶活为306 U/g,羟甲基化纤维素（CMC）的酶活为592.2 U/g;菌株1的FPA酶活为214.2 U/g,CMC酶活为523.8 U/g,表现出了较好的降解纤维素的能力。紫外诱变处理得到产酶能力提高的突变菌株为UR-07和URM-13。与原始菌株相比,UR-07的FPA和CMC酶活分别比原始菌株HS5提高了15.86%、16.68%,URM-13的FPA和CMC酶活比菌株分别提高了26.94%、19.03%。研究表明,经紫外诱变后,产纤维素酶真菌的产酶能力有所提升且具有较好的遗传稳定性,两株菌株在纤维素酶的生产和纤维素类物质降解菌剂的研究中具有较高的潜力。     

酒糟中高产纤维素酶菌株的筛选及鉴定

文章采用以羧甲基纤维素钠为唯一碳源的培养基,从酒糟中分离纯化出一株具有产纤维素酶能力的维氏芽孢杆菌(Bacillus velezensis strain) P-7.采用3,5-二硝基水杨酸法测定P-7的内切葡聚糖酶、外切葡聚糖酶和β-葡萄糖苷酶活,并对其进行生理生化、形态学及分子生物学鉴定.结果 表明,编号为P-7的菌...     

高抗菌活性乳酸菌的筛选及菌种鉴定

研究旨在筛选适用于饲料青贮的高抗菌活性乳酸菌,并进行菌种鉴定。以藤黄微球菌、沙门氏菌、大肠杆菌为指示菌,通过牛津杯双层平板法对从玉米、水稻、蔬菜残渣、猪粪、鸡粪等样品中分离出的121株乳酸菌进行抑菌试验。通过生理生化,碳源发酵试验和16S rRNA分子鉴定及recA基因扩增对所选菌株进行鉴定。菌株ZZU 575具有较强抗菌活性,排除酸、过氧化氢干扰后,其发酵上清液对大肠杆菌抑制作用消失,但对藤黄微球菌及沙门氏菌仍有很强的抑制活性;其抑菌活性在酸性条件下较强,在加入蛋白酶K和胰蛋白酶以及100℃以上热处理时明显下降甚至消失;ZZU 575被鉴定为植物乳杆菌。菌株ZZU 575在饲料青贮中具有潜在应用价值。     

病死动物腐败过程中优势菌种的筛选与分离鉴定

本研究旨在筛选出病死动物无害化处理罐中参与动物尸体腐败的优势菌种,为研发加速动物尸体腐败的微生物制剂提供理论依据。收集病死动物无害化处理罐中动物尸体腐败液,按照10倍递增稀释方法,在参与动物尸体腐败的微生物菌群中成功筛选出一株优势菌种,采用传统分离鉴定方法和分子生物学鉴定方法对优势菌种进行鉴定。结果表明,优势腐败菌种为芽孢杆菌属的枯草芽孢杆菌,其16S rRNA基因序列与Bacillus subtilis strain 22（FJ435215.1）的同源性为99.53%。     

一株聚β-羟基丁酸（PHB）产生菌的分离纯化及鉴定

本研究从土样中分离纯化出一株PHB高产菌株P-9,通过对其进行形态学和生理生化反应特征研究,初步鉴定为苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis）。进一步研究P-9菌的生长规律,发现P-9菌生长的延迟期为0-24 h,24 h后进入对数生长期,同时积累PHB,84 h时细胞进入稳定生长期,108 h时PHB产量达到最大,达1.25 g/L。     

饲用高产纤维素酶菌株的诱变选育

以里氏木霉40359为出发菌株,对其进行紫外线、亚硝酸钠、硫酸二乙酯诱变,选育纤维素酶高产菌株。经过平皿初筛和摇瓶复筛,得到一株稳定性好的菌株YB40359,FPA酶活力达到57.31 U/mL,较原始菌株提高了87.12%;CMC酶活达到142.60 U/mL,较原始菌株提高了58.66%,且遗传稳定性好,可以用作饲用纤维素酶的降解菌。     

一株羽毛角蛋白降解菌的产酶条件研究

角蛋白是一种抗性强和难降解的硬性蛋白,角蛋白酶具有专一降解天然角蛋白的功能,可以显著提高角蛋白的消化率。地衣芽孢菌株K-19具有很强的羽毛角蛋白分解能力,本试验对该菌株的发酵产酶条件进行了优化,最终得到摇瓶发酵产酶的最佳培养基和发酵条件为:羽毛粉1.5%、玉米粉1%、黄豆粉1%、NH4Cl0.05%、NaCl0.05%、K2HPO40.03%、KH2PO40.04%、MgCl2·6H2O0.01%、酵母膏0.01%,pH值7.5～8.0;250ml三角瓶里装发酵培养液30ml,37℃,接种量4%,200r/min摇瓶发酵72h,该菌株产角蛋白酶的酶活可达246.8U/ml,比初始酶活128U/ml提高了93%。     

1株抗猪链球菌细菌素产生菌的筛选与鉴定

本试验从健康未断奶的仔猪粪便中分离出一株对猪链球菌有较好抑制作用的菌株1～6,排除有机酸、过氧化氢、菌体细胞等的干扰后仍有抑菌活性;用蛋白酶K处理后, 其抑菌活性消失;进一步硫酸铵沉淀、透析处理后, 其抑菌活性显著增强, 因此确定该抑菌活性物质为蛋白类物质, 进而确定菌株1～6为细菌素产生菌.通过个体及菌落形态、生理生化试验、16S rRNA基因序列同源性比较, 结果证明1~6菌株为屎肠球菌.     

耐酸产蛋白酶芽孢杆菌菌株的筛选及其生料固体发酵豆粕效果评价

以酸性脱脂牛奶培养基为限制性培养基,结合透明圈法进行初筛,以酸性蛋白酶活力为指标进行复筛;通过菌落及菌体形态观察、生理生化特性测定、16S r DNA序列系统发育分析相结合的方法鉴定供试菌株种属;通过室温18℃下固体发酵豆粕试验,探索供试菌株降解大分子抗营养因子、提高酸溶蛋白相对含量的可行性,并以酸溶蛋白相对含量为指标,采用正交试验设计考察料水比、玉米粉含量、硫酸铵含量、菌株接种量4个因素,优化固体发酵豆粕的条件。试验共获得133株初筛菌株,以其中透明圈直径2.00 cm的菌株SD47、SD48、SD56和SD62进行复筛,筛选出SD48菌株,其酸性蛋白酶活力为75.40 U/ml。SD48菌株被鉴定为甲基营养型芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus)。SD48菌株固体发酵豆粕30 d时,发酵豆粕色泽金黄,具有浓郁酸香味,无结块现象;发酵豆粕p H值降低,酸溶蛋白相对含量和抗氧化活性提高,β-伴大豆球蛋白和大豆球蛋白接近完全降解。最优的发酵条件为:料水比11、玉米粉含量10.0%、硫酸铵含量6.0%、菌株接种量8.0%、发酵时间30 d。与基础发酵条件下发酵30 d的结果相比,在最优条件下,酸溶蛋白相对含量提高了127.6%,抗氧化活性提高了185.8%。SD48菌株耐受酸性环境,可在胞外产生蛋白酶,极大地提高发酵豆粕的营养价值,是一株性能优良的发酵豆粕用菌株。     

黑曲霉ZM-8菌株产纤维素酶的固态培养基组分优化

本试验以玉米秸秆粉为主要原料,研究了麸皮添加量、氮源、含氮量、含水量和接种量等因素对一株经航天诱变筛选出的高产纤维素酶菌株黑曲霉ZM-8产纤维素酶的影响.并在确定了最佳氮源的基础上对其他各组分采用正交试验进行了优化.结果表明,其最佳固态培养基组分为:氮源为(NH4)3PO4,含氮量0.6%,含水量250%(m/m),玉米秸秆粉与麸皮质量比为4:1,接种量1:30.在优化后的培养基组分上测定的滤纸酶(FPU)酶活和内切β-1,4葡聚糖酶(CMC)酶活分别为3.32 U/g和12.48 U/g,比优化前分别提高了约50%和56%.     

紫外线—氯化锂复合诱变选育泰妙菌素高产菌株

目的 筛选泰妙菌素高产菌株。方法 以TMⅡ09—003为出发菌株,经UV照射180s后,将菌悬液均匀的涂布于加有0.8%的氯化锂平板上,在避光条件下于温度26℃～27℃,湿度60%～65%的环境下培养成熟后,进行挑取单菌落、初筛、复筛。以HPLC法测化学效价。结果 经UV照射180s后,氯化锂加量为0.8%剂量对菌株的致死率为88.6%。对用此剂量处理获得的诱变菌株进行了筛选,最终获得4支高产菌株,分别为：TMⅡ09—236、TMⅡ09—253、TMⅡ09—441和TMⅡ09—447。     

牛源性蛋氨酸生产菌的分离筛选及发酵条件优化

为了从奶牛瘤胃中筛选出高产蛋氨酸微生物,无菌采集10份成年奶牛瘤胃内容物样本,经分离筛选得到18株菌株,将这些菌株进行分离纯化培养,并利用HPLC法检测各菌株发酵液中蛋氨酸的含量,最终筛选出1株蛋氨酸含量较高的菌株。经过形态观察和16S rDNA序列分析,该菌株与甲基营养型芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus)之间的同源性为100%。利用单因素试验确定了摇瓶发酵的最优条件:葡萄糖15%,硫酸铵3.5%,玉米浆2.5%,磷酸氢二钾1.5%,发酵时间为72 h,装液量为50 mL/500 mL。在最优条件下进行发酵试验,蛋氨酸产量提高到平均2.40 g/L,较发酵优化前产量提高了175.86%。     

木聚糖酶产生菌的筛选鉴定及木聚糖酶基因(Xyn B)的克隆

采用富集培养、透明圈平板筛选的方法,从长期堆放青贮饲料的土壤中分离到7株木聚糖酶产生菌。选取透明圈最大的木聚糖酶产生菌X7作为基础菌,对其进行16S rRNA部分序列PCR扩增测定,经BLAST同源性分析确定X7为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis strain GD3b(Genebank编码:HM055602.1)。然后设计特异引物,以X7基因组为模板,对其进行Xyn B基因序列PCR扩增,扩增产物经BLAST同源性分析表明已成功克隆了X7菌株的Xyn B基因,为日后构建木聚糖酶基因酵母表达载体,培育能够分泌表达具有高活性的木聚糖酶酵母工程菌奠定了基础。     

发酵啤酒糟高产饲用木聚糖酶菌种的诱变选育

啤酒糟是啤酒酿造生产的主要废弃物之一。据测定,鲜啤酒糟含水分79.25%、粗蛋白5.19%、粗脂肪1.86%、粗纤维1.41%、无氮浸出物11.51%、灰分0.78%[1],其中无氮浸出物的主要成分是木聚糖。近年来,我国啤酒工业迅速发展,年产啤酒超过二千多万吨,成为世界上第二大啤酒生产国,由此产生了约1000万吨的啤酒糟。啤酒糟中固形物含量一般为15%～20%,水分含量高,极易腐败变质,给处理和综合利用带来很大问题。长期以来,大多数厂家主要是将湿糟作为粗饲料直接低价出售,其收益甚微;有少数厂家则是将湿糟直接排放,不仅造成严重的环境污染,还导致资源的浪费…