黄瓜子叶节离体再生过程中内源激素变化

采用酶联免疫吸附法(ELISA),测定黄瓜子叶节再生过程中不同发育阶段愈伤组织的内源激素含量,探讨子叶节再生过程中内源激素的变化规律和激素间的相互关系.结果表明,随着黄瓜子叶节再生阶段的变化,内源激素含量也呈现不同变化.外植体培养0 d时,ABA含量最高,IAA和GA含量最低;愈伤组织诱导期(3～9 d),ABA、IAA、GA、ZR含量先升高后降低;愈伤组织分化期(9～15 d),IAA和GA含量均先升高后降低,ZR含量一直降低,而ABA含量则先降低后升高.     

影响复合针介导的大豆子叶节遗传转化的主要因素的研究

以萌动1d的半片大豆种子为试验材料,用复合针针刺2次,农杆菌LBA4404/pCAMBIA1201侵染,共培养3d,GUS染色检测瞬时表达效率。结果表明:不同基因型和乙酰丁香酮(As)浓度对转化效率有显著影响,As浓度为100或200μmol/L时,转化效率显著提高,其中以合丰25的转化效率最高,平均为8.6个蓝色斑点;农杆菌的侵染时间以30 min为宜;农杆菌的侵染浓度以OD600为0.6时最佳,平均为9.8个蓝色斑点。     

黄瓜子叶节离体再生体系的研究

以6个品系的欧洲温室型全雌系黄瓜子叶节为材料,比较了不同激素组合,苗龄,切割方式和基因型,从而建立了简单快速高效的黄瓜离体再生体系。结果表明:在MS+BA1.5mg·L-1+IAA0.2mg·L-1上启动培养3d为最佳芽启动培养方式,再转入最佳芽诱导培养基MS+TDZ0.02mg·L-1。10d苗龄的子叶节出芽率最高,保留两片子叶各切除1/3为最佳切割处理方式,六种基因型均能生芽,且每外植体出芽数均较高达1.93～3.15。整个过程从种子萌发到驯化移栽,仅需8周。     

黄瓜再生体系和遗传转化的建立

以黄瓜（Cucumis sativus L.）哈研3号为试验材料,采用组织培养技术系统探讨以子叶或子叶节为外植体时不定芽的诱导效率,最终确定以子叶节作为再生体系及遗传转化体系的试验材料;并系统探讨了不同PGRs浓度对不定芽诱导、不定芽伸长及生根阶段的影响;建立了哈研3号黄瓜的高频再生体系;并在子叶节根端膨大阶段进行了抗生素（Km）浓度的摸索,建立了较为适宜的遗传转化体系,为转基因工作打下坚实的基础。     

切割子叶对黄瓜子叶离体培养及去顶苗直接成花的影响

黄瓜离体子叶培养时,整片子叶培养形成花芽的百分率明显高于切除部分子叶的花芽形成的百分率。切除黄瓜幼苗１／２子叶明显促进黄瓜幼苗去顶芽后直接形成花芽的百分率。纵向切除１／２子叶不利于直接花芽的形成。     

根癌农杆菌介导的苦瓜遗传转化

用含质粒载体pB I121的根癌农杆菌转化“南屿”苦瓜子叶节,通过对gus基因瞬时表达情况进行观测,对根癌农杆菌介导的苦瓜遗传转化体系相关因素进行研究.结果表明,苦瓜子叶节必须预培养3 d左右,用D600nm值为0.3-0.5之间的菌液浸泡,侵染时间为10 min,然后共培养3-4 d.再生植株经PCR检测初步证明gus基因已成功整合到苦瓜基因组中.     

甜瓜自交系离体子叶节再生体系的建立

以4个不同甜瓜自交系为试材,研究基因型,激素(6-BA、IAA)组合、浓度对甜瓜离体子叶节再生的影响。结果表明:不同基因型甜瓜之间的再生频率差异较大,CM-15甜瓜自交系为最佳基因型,在培养基M8(MS+1.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L IAA)上再生频率最高,达96.7%,平均每个外植体再生芽数为4;6-BA是甜瓜子叶节再生的必要激素,而IAA是促进子叶节高效再生的激素;MS培养基中添加0.05 mg/L 6-BA能显著促进再生不定芽的伸长。     

穴施不同定植基质对黄瓜生长和产量的影响

以黄瓜(Cucumis sativus L.)为试材,研究施用不同定植基质对黄瓜生长和产量的影响。结果表明,定植基质的容重、通气孔隙、持水孔隙、电导率等理化性质均显著优于对照,施用定植基质缩短了黄瓜幼苗的缓苗期,提高了缓苗率,促进了定植后黄瓜的生长,并且单株前期产量有所提高;其中高浓度营养液浸泡0.8%丙烯酰胺-丙烯酸钾共聚交联物处理对黄瓜生长的促进效果最明显,定植20 d和50 d后,黄瓜的株高、茎粗、叶色指数、地上部鲜重和干重(定植20 d)、根体积(定植50 d)、地下部鲜重和干重均显著高于对照,单株前期产量比对照提高13.2%。表明应用定植基质可以通过增加黄瓜根际的通气性改善根际营养,缩短黄瓜缓苗期,提高缓苗率,促进营养生长和生殖生长,从而提高产量。     

切割子叶地黄瓜子叶离体培养及去顶育苗直接成花的影响

黄瓜离子体子叶培养时，整片子叶培养形成花芽的百分率明显高于切除部分子叶的花芽形成的百分率，切除黄瓜幼苗１／２子叶明显促进黄瓜幼苗去顶芽后直接化芽的百分率，纵向切除１／２子叶不利于直接花芽的形成。     

硝酸银对黄瓜离体子叶培养芽再生的促进效应

以黄瓜品种“津春4号”无菌苗子叶为材料，研究了AgNO3对离体子叶芽再生频率的促进作用。结果表明，在含KT 2mg/L和NAA 0.1～0.4mg/L的MS培养基中附加AgNO3 2～6mg/L，可显著地提高离体子叶芽再生频率，其中最适培养基为：KT 2mg/L+NAA 0.3mg/L+AgNO3 2mg/L，芽再生频率达到77.2%。这种促进作用与AgNO3抑制乙烯的形成有关。     

农杆菌介导的MADS-box基因转化黄瓜初步研究

试验通过叶盘转化法,利用根癌农杆菌介导,将从黄瓜中克隆到的MADS-box同源基因—CSMADS06基因,转化到烟草和2种不同品系的黄瓜S06和S52中,经过除草剂筛选获得14株转化烟草和28株转化黄瓜。PCR检测和GFP荧光检测证实,外源的CSMADS06基因已转入这些植株中。阳性率分别为2.36%(烟草),4.1%和2.9%(黄瓜)。抗性植株已开花结果并获得子一代植株。     

无土栽培黄瓜品种比较试验

对在土壤栽培中表现较好的三个品种“西杂”、“828”和“长春密刺”进行了无土栽培比较试验。观察测定了各品种的生长势、生育期、果实性状、早期产量和总产量。综合分析认为:黄瓜杂一代“828”较为适合无土栽培。     

黄瓜遗传转化体系优化及表皮毛基因Gl的转化

选用黄瓜无毛突变体gl的子叶节为材料,对芽诱导阶段及根诱导阶段潮霉素的浓度进行筛选,分别确定2和3mg/L为其最适浓度;以pCAMBIA2301-gusA为载体,农杆菌GV3101介导,筛选出Silwet L-77(表面活性剂)的最佳体积分数为0.04%,侵染液浓度以原菌液(OD600=0.6)等倍稀释最佳;另外,对快速提取黄瓜DNA方法进行了优化。结果表明,添加500μL 0.5mol/L NaOH与200μL 100mmol/L Tris-HCl的组合最好。用优化的体系对表皮毛基因Gl进行遗传转化,获得7株阳性苗,为研究Gl基因的调控机制奠定了基础。     

黄瓜性型遗传与调控的研究

对黄瓜自交纯系及其杂交组合的性型遗传进行分析,进一步验证了全雌基因F和单性花控制基因M的遗传方式,并明确了不同性型自交系的基因型.对黄瓜不同性型植株的药荆处理结果表明,全雌株(FFMMAA)、强雄株(ffMMAA)、两性花株(FFmmAA)、和雄全株(ffmmAA)对乙烯利和AgNO3溶液处理的反应很一致,即乙烯利能诱导产生雌花,AgNO3诱导形成雄花,说明F和M基因的调控途径均与乙烯作用密切相关.     

黄瓜黄绿叶突变体光合色素变化及相关基因差异表达

【目的】黄瓜黄绿叶突变体是进行光合系统研究和遗传育种研究的重要材料,明确其叶色突变机理,可为进一步利用该性状进行基因定位、基因克隆等研究提供理论依据。【方法】本试验对黄瓜黄绿叶突变体9110Gt叶色黄化和转绿后的光合色素成分、含量和原叶绿素含量进行测定,并利用cDNA-AFLP技术及cDNA-Ad-SRAP技术,进行相关基因差异表达研究,获得差异表达片段。【结果】突变体9110Gt和野生型9110G在叶色素组分上没有显著差异,但突变体的光合色素及原叶绿素含量都低于正常株。从该突变材料中分离到的9条与叶色突变基因相关的差异表达片段与叶绿体和线粒体中基因具有较高同源性。【结论】该突变体叶色黄化是由于原叶绿素合成受阻从而导致叶绿素a合成减少,进而导致叶绿素含量降低,叶片光合色素比例发生变化,叶色发生变异。基因转录水平的研究进一步说明引起该现象的原因可能是与叶绿体发育、叶绿素生物合成相关的基因发生了突变。     

Current status of genetic transformation technology developed in cucumber(Cucumis sativus L.)

Genetic transformation is an important technique for functional genomics study and genetic improvement of plants. Until now, Agrobacterium-mediated transformation methods using cotyledon as explants has been the major approach for cucumber, and its frequency has been up to 23%. For example, significantly enhancement of the transformation efficiency of this plant species was achieved from the cotyledon explants of the cultivar Poinsett 76 infected by Agrobacterium strains EHA105 with efficient positive selection system in lots of experiments. This review is to summarize some key factors influencing cucumber regeneration and genetic transformation, including target genes, selection systems and the ways of transgene introduction, and then to put forward some strategies for the increasing of cucumber transformation efficiency. In the future, it is high possible for cucumber to be potential bioreactor to produce vaccine and biomaterials for human beings.     

硝酸银对黄瓜雌性系的诱雄效应

以黄瓜全雌性系S17为材料,采用不同浓度的硝酸银,对处于不同时期的黄瓜幼苗进行诱雄实验．结果表明,在黄瓜幼苗的2叶期,连续2次对其进行喷施浓度300mg/L的硝酸银溶液,其诱雄效果最好．具体表现在出现雄花的数目多（20节内）,第一雄花节位低,死株率低等特征．     

24-表油菜素内酯对低氧胁迫下黄瓜幼苗碳水化合物代谢的影响

 【目的】探讨外源EBR（24-表油菜素内酯）对低氧胁迫下黄瓜（Cucumis sativus L.）幼苗碳水化合物代谢的影响。【方法】采用营养液水培法,以耐低氧能力较强的黄瓜品种‘绿霸春4号’和耐低氧能力较弱的品种‘中农8号’为材料,研究根际低氧胁迫下外源施用EBR对黄瓜幼苗碳水化合物含量及根系糖酵解代谢酶活性的影响。【结果】通气条件下正常栽培,EBR处理显著促进两黄瓜品种叶片和根系中可溶性总糖的积累,但对根系糖酵解代谢酶活性的影响较小;低氧胁迫下,耐低氧能力不同的两品种幼苗根系淀粉、葡萄糖含量及酸性转化酶、ATP依赖的磷酸果糖激酶活性的变化表现出明显的品种差异;低氧条件下,EBR处理进一步提高了两品种根系中蔗糖和果糖含量及主要的糖酵解代谢酶活性,对叶片中大部分碳水化合物含量均无显著影响。【结论】低氧胁迫下,外源EBR通过促进碳水化合物从叶片向根系的分配及根系糖酵解代谢酶活性的提高,增强黄瓜植株耐低氧胁迫的能力。     

Current status of genetic transformation technology developed in cucumber (Cucumis sativus L.)

Genetic transformation is an important technique for functional genomics study and genetic improvement of plants. Until now, Agrobacterium-mediated transformation methods using cotyledon as explants has been the major approach for cucumber, and its frequency has been up to 23%. For example, significantly enhancement of the transformation efficiency of this plant species was achieved from the cotyledon explants of the cultivar Poinsett 76 infected by Agrobacterium strains EHA105 with efficient positive selection system in lots of experiments. This review is to summarize some key factors influencing cucumber regeneration and genetic transformation, including target genes, selection systems and the ways of transgene introduction, and then to put forward some strategies for the increasing of cucumber transformation efficiency. In the future, it is high possible for cucumber to be potential bioreactor to produce vaccine and biomaterials for human beings.