不同碱裂解法快速提取甜菜大群体DNA的研究

尝试使用一种新的方法提取甜菜干种子DNA,该方法不需要使用CTAB、SDS及其它提取DNA中需要使用的常规药剂,该方法仅需要使用NaOH一种试剂,提取几十份DNA只需要10几分钟的时间,并且提取的DNA完整性很好,完全可以满足甜菜SSR扩增的需要,为将来快速鉴定甜菜品种纯度和真伪性等工作奠定了坚实的基础.     

甜菜DNA提取新方法初探

本文报道了一个全新的甜菜DNA提取方法，该方法较以往的甜菜DNA提取方法有所不同。它是利用鲜嫩的花蕾为试材，以略有改进的苯酚／氯仿抽提法提取DNA。利用冷冻研磨或者用玻璃棒直接捣碎试材，来提取DNA。该方法简单，易操作，DNA纯度较高，可以直接用于RAPD分析，实验效果较好。     

不同方法对甜菜不同组织中总DNA的提取效果

以甜菜的幼嫩叶片、幼嫩花序、萌动种子及糖分积累期块根为提取材料,分别采用高盐低p H法、改良十二烷基硫酸钠(SDS)法、改良十六烷基三乙基溴化铵(CTAB)法及碱裂解法4种不同方法进行总DNA提取,对比不同提取方法及提取部位对提取效果的影响。结果表明,CTAB法适宜于叶片的DNA提取;SDS法适于对花的提取,而且对根和种子的提取效果也优于其它3种方法 ;碱裂解法具有简便快速的优点,但得率低,杂质去除不彻底,有可能影响后续试验,适用于对产量与质量要求不高时的快速提取;高盐低p H法提取的DNA浓度及得率均较低,且产物纯度不高,不建议作为首选方法。甜菜4种组织中,叶片最适合作为提取材料,花次之;根和种子的提取难度较大,建议提取时增加纯化与浓缩步骤。     

甜菜基因组DNA三种提取方法的对比研究

采用CTAB法、SDS法、蛋白酶K法分别提取甜菜基因组DNA,并对得到的DNA进行含量测定、PCR扩增效果鉴定、限制性内切酶酶切。比较3种方法的提取效果,结果表明:CTAB法提取的DNA产量最高,蛋白质和多糖含量低,PCR结果和酶切结果均比较好;SDS法提取的DNA产量也较高,PCR结果不如CTAB法效果好;蛋白酶K法提取的DNA产量最低,且含有较多的RNA,PCR扩增无结果。所以,CTAB法是适合于甜菜基因组DNA提取的最佳方法。     

不同方法对甜菜叶片基因组DNA提取效果比较与适用性探讨

对比了7种不同原理的提取方法对甜菜叶片基因组DNA的提取效果,从得率、纯度、耗时等多方面分析DNA提取效果,为不同研究目的确定了最适的提取方法。最终确定了SDS法是最适合自甜菜叶片中低成本大量提取DNA的方法,CTAB也基本能满足要求,吸附柱法是最适合高通量提取优质DNA的方法,碱裂解法是最适合样品迅速检测的方法,必要时可改用ROSE法。柠檬酸钠法产物质量不高且操作不够简便,尿素法产物纯度过低且耗时过长,在应用上未见优势。     

甜菜ISSR-PCR反应体系的优化

以甜菜基因组DNA为模板,研究了ISSR的主要影响因素,建立一套适宜于甜菜的ISSR优化反应体系及程序,并对该优化体系进行了验证.实验结果表明:①优化的ISSR扩增的反应体系为:20μL的反应体积中包括2.5mmol/L MgCl2,0.25mmol/L dNTPs,1.5U Taq DNA聚合酶,0.5μmol/L引物,10×PCR Buffer 2μL,100ng DNA模板.②优化的PCR扩增条件为:94℃预变性3min,然后94℃变性30s,45℃退火30s,72℃延伸1min,35个循环后,72℃延伸5min.③利用优化的反应体系仅用1条引物就能将10份甜菜材料区分开.     

用RAPD方法证实离子束注入甜菜诱变的新种质研究

以N^＋离子注入诱变技术获得了两份甜菜高糖、早熟突变新种质,该材料不仅在田间有稳定的突变表现,通过RAPD分析证实了在DNA水平上也同样存在差异,离子注入诱变甜菜引发了DNA水平上的变异,这种变异是可遗传的。     

不同PCR程序对甜菜DAMD引物扩增效果的影响

为了开发甜菜品种高效鉴定的DAMD-PCR分子标记技术,优化相应的检测技术流程。利用6种DAMD引物,以8个不同甜菜品种的DNA为模板,分别采用常规PCR扩增程序和touchdown PCR(TD-PCR)扩增程序对模板进行扩增。扩增产物利用8%的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳进行分离,经银染后观察不同PCR程序对甜菜DAMD引物扩增效果的影响。结果表明,TD-PCR扩增程序扩增效果明显好于常规PCR扩增程序,条带明亮、清晰,非特异性条带数量明显减少。推荐在甜菜DAMD引物的扩增中使用TD-PCR扩增程序。     

我国华北区甜菜苗期未知叶斑病害的诊断鉴定

对2014年我国河北省和内蒙古两地甜菜种植区纸筒育苗苗期甜菜叶片上出现的新的叶部枯斑病害,利用马铃薯葡萄糖琼脂培养基分离、培养、保存病原菌。结合分离菌落形态,提取发病叶片或分离的菌株菌丝DNA,利用真菌检测的通用引物ITS1及ITS4检测结果得到长541 bp单一条带,并测序。无论是直接提取病叶DNA的PCR产物测序还是分离的病原菌提取菌落DNA测序得到的序列相同,NCBI比对结果为极细链格孢菌(Alternaria tenuissima)。进一步利用组蛋白3基因引物H3-1a和H3-1b扩增分离物菌丝DNA结果得到600 bp左右单一条带,测序结果同真菌通用引物检测结果一致。采用甜菜叶片涂抹法接种进行致病性试验出现了相同的叶斑症状,并从接种后出现病害症状的叶片上分离检测确认了病菌。因此,从河北和内蒙采集的甜菜苗期叶部病害病原菌为极细链格孢菌,为有效控制此类病害、减轻甜菜损失提供了理论指导。     

甜菜SSR-PCR反应体系的优化

为了建立适宜甜菜的SSR反应体系,笔者以甜菜不育系TB005A为试验材料,研究了甜菜SSR技术中PCR反应体系的主要成分对SSR扩增结果的影响。对SSR反应体系中的DNA模板浓度、引物浓度、Taq聚合酶浓度、dNTPs浓度以及退火温度进行了探索,确立了适合甜菜的SSR反应体系为;在20μL反应体系中,模板DNA为60ng,引物（50ng／μL）1．2μL,Taq DNA聚合酶1．0U,dNTPs（2、5mM／L）0．6μL。并利用该反应体系对30个甜菜不同品系进行SSR反应,用6％的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,不同品系间DNA谱带多态性丰富,证实该体系稳定可靠。     

甜菜根际土壤AM真菌分离与分子鉴定

为了揭示丛枝菌根(arbuscular mycorrhiza,AM)真菌与甜菜的共生关系,收集甜菜根系及根际土壤,采用湿筛倾析-蔗糖离心法分离甜菜根围土壤AM真菌孢子。利用形态学和分子生物学方法对分离得到的AM真菌孢子进行分类鉴定,并应用Nested-PCR技术检测甜菜根际土壤AM真菌侵染甜菜根系情况。依据AM真菌孢子形态特征及25S rDNA D1/D2区域序列分析,鉴定出甜菜根围土壤中具有摩西球囊霉(Glomus mosseae),并且应用Nested-PCR技术从甜菜根内检测到了G.mosseae,表明G.mosseae侵染甜菜根系。     

RAPD分子标记技术及其在甜菜上的研究进展

ＲＡＰＤ技术自１９９０年由Ｗｉｌｌｉａｍｓ等首先创立以来,由于该项技术具有快速、简便、通用性好、ＤＮＡ用量少、标记的多态性高等优点,已被国内外学者广泛用于植物遗传资源的诸多研究领域中。近几年来,ＲＡＰＤ技术也被有效地应用到了甜菜的研究中。本文就该技术的原理、可靠性和应用以及在甜菜上的研究进展作一简要介绍。     

国外甜菜种子在新疆的表现及应用

本文对90年代中期以来国外甜菜种子在新疆进行的品种比较鉴定、区域试验以及大面积生产示范、种子繁殖及销售活动情况进行了详细分析和评价。外国甜菜品种在多方面表现出很强的优势，在有的方面优势不明显。还对外国甜菜种子在新疆的应用前景进行了分析，基于现实状况及未来发展趋势，外国甜菜品种大量进入中国是不可避免，应积极采取主动措施，合理应用引进的外国甜菜品种。     

我国甜菜多倍体品种的RAPD分析

利用RAPD分子标记技术对15个甜菜多倍体品种进行了遗传分析。从以前在甜菜中使用过的14个随机引物中筛选出具有非常明显多态性的引物8个,它们在多倍体品种间共扩增出47条不同位置的带,平均5.9条,特异带32条,特异带比率为68%;两个“双引物”共扩增出10条带,公共带仅1条,多态性频率高达90%。15份材料的遗传相似系数在0.75￣0.99。经聚类分析,可将这些材料分成5个组。RAPD聚类结果基本与血缘、系谱及其在生产实践中的表现相吻合,但也有例外。从分子水平上进一步证明了我国糖甜菜育种中存在的遗传材料基础狭窄的问题。     

甜菜块根农艺性状的遗传变异及相关性和主成分分析

以25个新疆甜菜品系(种)为材料,对块根8个主要农艺性状进行变异系数、相关性和主成分分析。结果表明:根头长度的变异系数较大为29.14%,根宽的变异系数最小为7.86%。在相关性上,糖甜菜根宽、根颈周长、根头长与根重呈极显著正相关;甜菜含糖率与根体长度呈极显著的正相关。主成分分析结果表明,前3个主成分对含糖率变异的累计贡献率达到85.21%,对根重变异的累计贡献率达到88.53%。首先对变异大的性状进行选择是非常重要的,在含糖率性状选择上,应注意选择根颈长度、根颈周长、根体长度大,根沟较深的品系(种)。在根重性状选择上,应注意选择根宽、根颈周长、根颈长度大,根沟较浅的品系(种)。     

甜菜贮藏损失分析研究

调查分析甜菜贮藏损失原因主要有两方面,一量人为因素;二是保鲜技术问题。通过对内蒙古宁城地区各项气象因子测定,从菜堆表层、内部、堆形等３方面进行了损失估算,得出由重量损失估算糖分损失的回归方程使甜贮藏损失分析更加科学化。     

不同浓度NaCl对甜菜生长的影响

研究了营养液中不同盐度(2～280mmol/L)对甜菜生长状况的影响,结果表明,NaCl浓度低于10mmol/L,对甜菜的各生长指标没有明显影响;而NaCl浓度在50mmol/L左右比较适合甜菜生长;超过100mmol/L的高浓度NaCl对甜菜的生长有胁迫作用,浓度越高胁迫作用越强。营养液中盐浓度在280mmol/L以内对甜菜光合作用影响不显著。     

甜菜纸筒育苗移栽机械化技术

介绍了甜菜纸筒育苗机械化的主要设备及其工艺流程,阐述了甜菜纸筒育苗移栽的技术要求及甜菜移栽机的类型和工作原理.实现甜菜纸筒育苗移栽机械化不仅能够保证甜菜纸筒秧苗的移栽质量,而且能够提高劳动生产率,已成为甜菜生产的必然选择.     

几种长残留除草剂对后茬作物甜菜的影响

1992-2003年进行了模拟普施特和豆磺隆土壤残留对后莅作物甜菜的安全性试验。研究结果表明，普施特低剂量62．5mL／hm^2。即对甜菜有严重药害，甜菜苗鲜重降低90．9％；普施特125mL／hm^2以上各处理，甜菜苗全部死亡。豆磺隆低剂量0．25g／hm^2对甜菜的保苗株数、苗高、苗鲜重影响较小，但产量降低17．9％；高剂量2、4g／hm^5处理药害严重，甜菜死苗率90％以上，产量降低92％以上。广灭灵975-3000mL／hm^2各剂量处理施药后12个月，对甜菜均无明显药害。株鲜重和产量与不施药对照相近。金豆1000、1500mL／hm^2低剂量处理，施药后12个月对甜菜药害轻微，可以种植，24个月后可以安全种植甜菜；金豆2000、3000mL／hm^2高剂量，施药后12个月对甜菜有明显药害，不可以种植；24个月后药害轻微，可以种植甜菜。金普施特低剂量1250mL／hm^2和倍量2500mL／hm^2处理对甜菜均有药害。施药后12个月药害重于24个月和36个月。但36个月后高、低剂量下仍有药害，仍不能安全种植甜菜。阔草清60、120、180g／hm^2各处理，施药后12个月均有较重药害．不能种植；施药后24个月时，60g／hm^2低剂量处理药害虽然较轻，但仍与不施药对照有较大差异，也不能安全种植，高剂量处理药害仍很严重。