EGCG衍生物合成及药理活性研究进展

表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)是茶叶中一类重要儿茶素,在体外细胞实验及动物体内实验中,表现出多种生物活性。但EGCG的多羟基的化学结构具有脂溶性差,生物利用率低以及稳定性差等缺点,影响其被深度利用,而分子修饰能显著的改善EGCG多种理化性质。本文综述了最近国内外EGCG结构修饰的常见方法,合成过程以及相应的药理活性研究,以期为后续EGCG的进一步研究提供参考。     

氧化应激对Vero细胞的损伤及EGCG的保护作用

研究了氧化应激对肾细胞Vero细胞的损伤及EGCG的保护作用。用MTT、吖啶橙染色和DNA凝胶电泳等方法研究了H2O2和Cr6+应激对Vero细胞的损伤,及EGCG对凋亡细胞的保护作用及其机理。结果表明,H2O2和Cr6+剂量效应地抑制Vero细胞活性,IC50分别为175.6和9.8mgL-1;其中50 mgL-1 H2O2和400 mgL-1/2h Cr6+可诱导Vero细胞凋亡。0~60 mgL-1 EGCG有效抑制H2O2和Cr6+应激引起的细胞活性下降,且40 mgL-1 EGCG显著抑制细胞凋亡。对于Cr6+所诱导的细胞凋亡,EGCG的保护作用与EDTA和Vc的协同作用效果相当,表明清除活性氧和络合金属离子都有助于减轻Cr6+应激损伤。可见,EGCG通过清除活性氧和络合离子有效地保护了肾细胞免受应激损伤,这对易遭受活性氧损伤的肾脏无疑具有一定的临床价值。     

EGCG甲基化衍生物酶促合成的反应条件研究

以EGCG-O-甲基转移酶催化EGCG生成EGCG3′′Me、EGCG4′′Me和EGCG3′Me等3种主要的EGCG甲基化衍生物的生成量为主要指标,考察了EGCG甲基化衍生物酶促合成的反应条件。结果表明,EGCG甲基化衍生物的酶促合成最佳反应条件为：温度35℃,pH7.5,DTT和Mg²⁺的浓度为2mmol/L;在该反应条件下,反应体系中EGCG3′′Me、EGCG4′′Me以及EGCG3′Me的生成量分别可达到386.39μg/mL、23.40μg/mL和107.01μg/mL。     

EGCG纳米载体制备技术及其对EGCG活性影响的研究进展

表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)是绿茶中最重要的生物活性成分,在肿瘤形成的各个阶段都有抑癌活性。纳米化途径是提高EGCG稳定性和生物利用度的有效技术之一。已有较多的研究表明,多类材料可用于制备纳米粒子作为EGCG载体,并在改善EGCG生物活性方面效果显著。本文按制备纳米粒子主要材料的不同,对各类纳米粒子的制备方法、特性及其在改善EGCG的生物活性方面的研究进行了分述,并对各种纳米粒的增效作用进行了归纳总结。     

绿茶成分EGCG抗肿瘤作用研究进展

表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)是绿茶的主要活性成分.近年来越来越多的科学工作者将注意力集中在儿茶素单体EGCG的抗肿瘤作用上,证实了EGCG具有广泛的生物学特性和药理效应,能够抑制多种肿瘤的形成和发生,是茶叶中抗肿瘤效应的主要活性成分,本文就近年来国内外EGCG抗肿瘤作用机制研究进行综述.     

EGCG衍生物研究进展

儿茶素具有多种生理活性功能,但因为其自身性质的原因存在脂溶性差,生物利用率低,不稳定等缺点。衍生化修饰的方法能够较好的改进儿茶素的理化性质,促进儿茶素资源的深度开发和利用。     

EGCG与锌离子互作对PC-3细胞能量代谢的影响

采用Hoechst33258荧光染色法观察EGCG、Zn2+和EGCG+Zn2+对前列腺癌PC-3细胞凋亡的诱导作用;采用HPLC法检测了EGCG、Zn2+和EGCG+Zn2+对PC-3细胞内腺苷酸(ATP、ADP、AMP)含量的影响,并分析了能量负荷(EC)和ATP/ADP比值。结果表明,Hoechst33258染色后正常细胞发出均匀微弱的蓝色荧光,细胞核未见异常,EGCG、Zn2+和EGCG+Zn2+处理后凋亡的PC-3细胞都发出较强的蓝色荧光,细胞核DNA断裂及染色体高度浓缩;EGCG、Zn2+及二者混合物处理后细胞内总腺苷酸含量、EC及ATP/ADP比值都下降,表明EGCG与Zn2+对PC-3细胞能量代谢都存在明显的抑制作用。     

EGCG4Me的选择性合成

以EGCG和没食子酸丙酯(PG)为起始化合物,以碘甲烷作为甲基化试剂,通过化学合成的方法选择性地合成了EGCG的甲基化衍生物EGCG4Me,通过核磁共振鉴定其结构。     

TF1与EGCG在Caco-2细胞中的吸收规律研究

为了探究茶黄素单体（TF₁）与表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）在生物体中的吸收规律,本实验建立了体外Caco-2单层细胞模型,模拟小肠对TF₁与EGCG的吸收,并研究了浓度和时间对吸收的影响。结果表明,在10~100βµmol·L^-1范围内,TF₁与EGCG在Caco-2单层细胞模型中的吸收呈现表观渗透系数Papp随浓度增加而上升的规律。但两者的外排率也呈现同样的规律,并且外排率上升的幅度均大于二者吸收率上升的幅度。由于TF₁与EGCG在细胞单层模型中的Papp均小于1×10^-6βcm·s ^-1,说明两者都属于难吸收的药物,但是TF₁在Caco-2细胞模型中的吸收率高于EGCG。因其外排比均大于2,说明两者在细胞模型上的外排是被动转运。从吸收时间看,TF₁的外排规律与EGCG一致。     

EGCG氧化产物不同级分的分析及其抗氧化活性的研究

利用乙酸乙酯在中性和酸性条件下萃取EGCG氧化产物,得到级分A(EOPA)和级分B(EOPB),用化学发光法比较EGCG与EOPA、EOPB的抗氧化活性及其对DNA损伤的保护作用,并通过HPLC-MS分析两级分中的氧化产物。结果表明EGCG及EOPA、EOPB均有较好的清除活性氧和保护DNA损伤的活性,其中EOPA的活性强于未氧化的EGCG。HPLC-MS分析表明,EOPA、EOPB级分中的氧化产物均为二聚体。     

甲基化EGCG的研究现状及展望

EGCG3"Me于1982年首次从绿茶中被分离出来,并发现它具有潜在的抗过敏活性。近年来,甲基化的EGCG不断从茶叶和体内代谢物中被发现。本文对国内外甲基化EGCG的分离方法、功效和合成方法进行了综述。常见的甲基化EGCG分离方法包括葡聚糖凝胶（Sephadex LH-20）、高速逆流色谱、Toyopearl HW-40S中压柱层析、制备型液相色谱（pHPLC）等方法;甲基化EGCG在抗过敏性、抗细胞毒素、抑制脂肪氧化酶、抑制诱导型一氧化氮合成酶（iNOS）、保护肝细胞等方面都优于EGCG;甲基化EGCG的合成主要包括化学合成和生物合成两种途径。     

Protective effects of EGCG on Bifenthrin-Induced Oxidative Stress in the Human Embryonic Lung Fibroblast Cell Line HFL-I

Bifenthrin （BF） is an important type I synthetic fluorinated pyrethroid insecticide and acaricide.Previous investigations have indicated that the metabolisms of BF in human cells were through oxidative processes,and cytotoxicity was induced by the oxidative stress.In this study,the protective effects of EGCG,which is a major individual of green tea polyphenols,on the human embryonic lung fibroblast cell line HFL-I exposed to BF were investigated.The results showed that BF could induce oxidative stress leading to cytotoxicity in HFL-I cells.The pretreatment of EGCG at low concentrations significantly recovered the cell viability and morphology,inhibited excess generation of ROS,enhanced antioxidant enzyme activities and avoided loss of mitochondrial membrane potential.The results suggested that EGCG might eliminate the BF-induced damage in HFL-I cells.     

EGCG-O-甲基转移酶(EOMT)催化EGCG形成的EGCG甲基化衍生物分析

研究了EGCG3′′Me、EGCG4′′Me和EGCG3′Me在正离子模式下的质谱裂解规律,并在此基础上分析了EGCG-O-甲基转移酶(EOMT)催化EGCG形成的反应产物。结果表明,EGCG-O-甲基转移酶催化EGCG后反应体系中生成了10余种不同的EGCG甲基化衍生物,主要包括EGCG3′′Me、EGCG4′′Me、EGCG3′Me、EGCG5′Me、EGCG3′′,4′′-diMe、EGCG3′′,5′′-diMe、EGCG3′,5′-diMe、EGCG3′,5′′-diMe、EGCG3′,3′′,5′′-triMe,以及EGCG5′,3′′,5′′-triMe等。     

EGCG抑制Nicotine诱导肺腺癌H1299细胞JAK2/STAT3 mRNA的表达研究

为探索EGCG对Nicotine诱导肺癌细胞增殖的抑制作用,本研究通过MTT实验筛选出EGCG、Nicotine对肺腺癌细胞H1299的最佳作用浓度,利用实时荧光定量PCR技术检测EGCG、Nicotine对H1299细胞中Bax、Bcl-2、Jak2和Stat3基因mRNA相对表达量的变化。实验结果表明,EGCG对H1299细胞的半抑制浓度IC₅₀值约为32βμmol·L^-1（24βh）、15βμmol·L^-1（48βh）;1βμmol·L^-1的Nicotine对H1299细胞促增殖作用明显;以15βμmol·L^-1的EGCG预处理H1299细胞24βh可显著下调1βμmol·L^-1 Nicotine的促增殖作用（P<0.05）。1βμmol·L^-1的Nicotine处理H1299细胞可明显降低JAK2/STAT3信号通路中Bax基因mRNA的表达,增加Bcl-2、Jak2、Stat3基因的mRNA表达;15βμmol·L^-1 EGCG预处理H1299细胞可反向调控Nicotine诱导所致JAK2/STAT3信号通路中Jak2、Stat3和Bax、Bcl-2基因表达量的变化,结果具有显著性差异（P<0.05）。由此可知,EGCG对Nicotine诱导的肺腺癌H1299细胞增殖及JAK2/STAT3信号通路中促增殖基因mRNA的表达起抑制作用。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对张氏肝细胞DNA修复基因表达的影响

采用MTT法、Comet assay（彗星实验）和RT—PCR法研究了表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对DNA损伤剂卡莫司汀作用后张氏肝细胞的DNA损伤及相关修复基因表达的影响。结果表明：EGCG能阻止卡莫司汀所致张氏肝细胞的生长抑制,卡莫司汀单用对张氏肝细胞的IC50为43．31μg／mL,当用25μg／mL和50μg／mL的EGCG与卡莫司汀联用时,对张氏肝细胞的IC50分别提高至52．46μg／mL和46．65μg／mL。彗星分析结果表明,EGCG还能减小卡莫司汀引起的张氏肝细胞DNA损伤,彗星Olive尾矩值由单用时的9．07±5．48降为联用时的6．02±2．46。EGCG还能使卡莫司汀所致张氏肝细胞的DNA修复基因mgmt和alkb的表达下降得到回升,卡莫司汀（20μg／mL）处理张氏肝细胞24h后,mgmt和alkb的mRNA水平（与外参0634-actin的比值）比未处理组明显下降（分别由0．451±0．041和0．356±0．120下降至0．323±0．046和0．046±0．017,p〈0．05或p〈0．01）,当EGCG与卡莫司汀联合处理24h后,二者的mRNA水平基本恢复到正常（p〉0．05）,与外参β-actin的比值分别为0．451±0．041和0．451±0．041。说明EGCG能保护卡莫司汀对正常肝细胞的DNA损伤,因为它能逆转卡莫司汀所致正常肝细胞内DNA修复酶基因mgmt和alkb的表达下降。     

茶表没食子儿茶素没食子酸酯的提取动力学研究

通过测定水或乙醇提取过程中EGCG的浓度-时间变化,结合数学模型推导,采用二次拟合和析出方程回归,研究并揭示了茶表没食子儿茶素没食子酸酯提取的动力学规律,为其提取工艺设计提供理论依据。研究提出了获得最佳提取时间及不同提取条件下的动力学方程。结果表明该方程拟合是成功的,EGCG提取符合传质扩散动力学规律。     

茶叶中EGCG3"Me和EGCG4"Me的分离制备与鉴定

采用柱色谱和高效制备液相色谱法从茶叶中分离制备2种甲基化EGCG(EGCG 3"Me和EGCG 4"Me)。用含水的乙酸乙酯提取茶叶,粗提液浓缩后经HP-20柱色谱分离,再经制备液相色谱分离,以水和乙腈为流动相进行梯度洗脱得到2种甲基化EGCG。经紫外光谱、核磁共振及质谱分析,进一步确定2种甲基化EGCG分别为EGCG3"Me和EGCG4"Me。所制备的2种甲基化EGCG的纯度在98%以上。     

EGCG对肾缺血再灌注损伤的保护作用及其作用机制的研究

探讨了表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对大鼠肾缺血再灌注损伤的保护作用及其机制。结果表明,与肾缺血再灌注损伤模型组相比,EGCG组肾功能改善,肾组织病理改变,Wnt3a、?-catenin、p53、p21、MDA、IL-6、IFN-?和TNF-?表达明显减少,而CAT,GPX和SOD表达明显增加。说明EGCG预处理减轻肾缺血再灌注损伤与抑制Wnt3a/?-catenin/p53信号通路介导的炎症反应和氧化应激相关。