藏猪心脏脂肪酸结合蛋白基因(H-FABP)组织表达差异性研究

采用半定量RT-PCR法,以GAPDH基因为内参,研究藏猪背最长肌、心肌、肝脏和脂肪组织中H-FABP基因mRNA组织表达差异性。结果显示,H-FABP基因mRNA组织表达差异性显著,脂肪组织表达量高于其他组织(P<0.01);心肌表达量高于背最长肌(P<0.05);背最长肌表达量高于肝脏(P<0.01)。     

宗地花猪1世代的生长发育研究

[目的]研究宗地花猪1世代在初配前不同性别生长发育的规律性以及性成熟对宗地花猪生长发育的影响。[方法]选择宗地花猪公猪9头、母猪10头,在原生态的饲养条件下进行饲养。从双月开始,以月为阶段,对宗地花猪不同性别的生长发育进行测定,并观察、记录公、母猪性行为的外部表现。[结果]公猪初情期为（94.5±5.2）d,母猪初情为（104.0±4.8）d;在3月龄以前公猪和母猪的累积生长、绝对生长及体尺指标差异较小,3月以后上述指标母猪高于公猪,到6月龄母猪显著高于公猪（P〈0.05）。[结论]宗地花猪1世代属性早熟地方品猪;6月龄母猪的生长发育比公猪强烈,物质积累旺盛,体格较大;性成熟对公猪体重的影响明显高于母猪。     

宗地花猪生长激素基因Taq Ⅰ多态性及其对屠宰性状的影响

为给宗地花猪选种选育提供有效途径,利用PCR-RFLP技术,分析了36头宗地花猪的生长激素(GH)基因Taq I酶切位点多态性及其对屠宰性状的影响.结果表明,经Taq Ⅰ酶切,宗地花猪GH基因全序列中产生了AA和AB 2种基因型,AA为优势基因型,A为优势等位基因.在Taq Ⅰ酶切产生的2种基因型个体的屠宰性能中,AA型个体的后腿比率极显著高于AB型个体(P<0.01),其他指标均未达到显著差异.     

心脏型脂肪酸结合蛋白基因的研究与应用进展

心脏型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)是脂肪酸结合蛋白家族中最普遍的一种类型,主要存在于心肌、骨骼肌和乳腺等对脂肪酸高度需求的组织中,其主要作用是防止细胞内堆积游离脂肪酸。H-FABP基因的多态性与肌间脂肪(IMF)含量、肉的嫩度及体重显著相关。本文综述了H-FABP基因的研究与应用进展。     

宗地花猪ESR、FSHβ基因的多态性及其对繁殖性能的影响

为提高宗地花猪核心群的繁殖性能,对贵州宗地花猪保种选育基础群母猪ESR基因和FSHβ基因多态性及其对繁殖性能的影响进行了研究.结果表明:宗地花猪的ESR基因B等位基因有增加产仔效应的趋势,ESR基因各基因型无论是平均产仔数还是产活仔数均为BB型>AB型>AA型,BB型比AA型多产仔1.02头/胎,比AB型多产仔0.82头/胎,3种基因型平均初生重和初生窝重差异不显著(P>0.05);FSHβ基因A等位基因有增加产仔效应的趋势,FSHβ基因各基因型无论是平均产仔数、产活仔数还是初生窝重均为AA型>AB型,平均初生重AB型显著高于AA型(P<0.05),AA型比AB型多产仔0.98头/胎.应重点保留基础群中ESR基因BB、AB型母猪和FSHβ基因AA型母猪进入选育核心群,以提高宗地花猪核心群的繁殖性能,加快选育进程.     

猪骨桥蛋白基因的组织差异表达

为了研究猪骨桥蛋白基因(Osteopontin,OPN)组织特异性的表达规律,采用实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR,qRT-PCR)分析方法,以β-actin基因为内参,对猪OPN基因在心、肝、脾、肺、肾、大脑、小脑、垂体、下丘脑和子宫内膜等10种组织中的mRNA表达水平进行了检测.结果表明,OPN基因在子宫内膜的表达量为最高,其次是在小脑,在心、肝、脾和肺也有不同程度的表达,而在肾、下丘脑和垂体的表达量很少,从而提示OPN基因在子宫内膜中可发挥重要作用.     

金银花花器官实时荧光定量PCR内参基因的筛选

为了筛选金银花花器官基因表达分析的适宜内参基因,试验以金银花花器官6个时期为材料,选取金银花的9个候选内参基因Lonja.ACT11,Lonja.ACT2/7,Lonja.G6PD,Lonja.GAPDH,Lonja.MTP,Lonja.TUA,Lonja.UBQ10,Lonja.EF1A,Lonja.UBC,利用q RT-PCR技术及Ge Norm,Norm Finder软件对它们的表达稳定性进行分析评价。结果表明,Lonja.ACT2/7和Lonja.G6PD在金银花花器官生长的不同时期表达水平较稳定,运用q RT-PCR研究金银花花器官基因表达时可选用Lonja.ACT2/7和Lonja.G6PD组合作为内参基因。     

山羊心脏型脂肪酸结合蛋白基因mRNA的组织表达谱分析

以黔东南小香羊、贵州白山羊、贵州黑山羊、黔北麻羊、南江黄羊为研究对象,采用实时荧光定量技术对肝、肾、心、肺、背最长肌、半膜肌、皮下脂肪中H-FABP基因的表达水平进行测定。结果表明,心内H-FABP基因的表达水平最高,半膜肌、背最长肌次之,再次为肾,肺、皮下脂肪、肝较低,可见心、半膜肌、背最长肌是山羊H-FABP基因mRNA分布的主要组织。     

连翘花器官生长阶段内参基因筛选与评估

为筛选连翘花器官生长阶段稳定表达的内参基因,选取12个(18S、60S、ACT7、EF1α、EF1αH、GAPDH、HIS、LIPL、RP、RPL17、TUB、UBQ)常用内参基因和7个(FS-1、FS-2、FS-3、FS-4、FS-5、FS-6、FS-7)新型基因,采用RT-qPCR技术及Ge Norm、Norm Finder软件分析这19个候选内参基因在长花柱和短花柱连翘花现蕾期、露冠期、初花期、盛花期、末花期的表达稳定性,并利用Excel进行综合评估。结果表明,单从Ct值推测60S变化范围小,且表达量较高,适合作为内参基因;Ge Norm分析得出,ACT7+HIS组合为最适内参基因;Norm Finder分析表明,FS-4基因表达最稳定。综合评价结果显示,可选用FS-4与HIS作为连翘花器官生长阶段的内参基因。     

鹿不同组织中H-FABP与E-FABP基因的表达

以雄、雌性梅花鹿和雌性马鹿为试验对象,以鹿的心(乳头肌)、肝(左叶)、肺(右肺上叶)、肌肉(背最长肌、肋间肌、臀大肌、股四头肌)和皮下脂肪8种组织样品为试验材料,采用实时荧光定量PCR技术检测H-FABP、E-FABP基因在各组织中的表达量及其差异。结果表明：H-FABP、E-FABP基因在鹿不同组织中均有表达,且在同种鹿的不同组织和不同鹿种的同一组织间均存在差异。H-FABP基因在心中表达量显著高于其他组织(P<0.05),而在肺、肝的表达量显著低于其他组织(P<0.05);E-FABP基因在皮下脂肪中表达量显著高于其他组织(P<0.05),而在心、肝、肋间肌和臀大肌的表达量较低;H-FABP、E-FABP基因表达量的高低还与鹿的性别、种类有关。     

脂肪酸结合蛋白4在小鼠子宫蜕膜中的表达

[目的]检测脂肪酸结合蛋白4(FABP4)在小鼠子宫蜕膜细胞中的表达。[方法]获取正常的小鼠子宫蜕膜组织和人工诱导蜕膜化组织,同时利用酶消化分离小鼠子宫内膜基质细胞,进行体外诱导蜕膜化,利用实时定量PCR检测脂肪酸结合蛋白4在子宫蜕膜组织细胞中的表达。[结果]FABP 4在小鼠正常子宫蜕膜组织、人工诱导蜕膜化组织及子宫内膜蜕膜化基质细胞中的表达水平均显著高于对照组。[结论]FABP4可能参与了小鼠子宫内膜蜕膜化过程,为研究蜕膜化机理奠定了基础。     

多不饱和脂肪酸对动物基因表达的调控

多不饱和脂肪酸一直被认为是重要的营养物质。现在许多研究人员的工作更多的着眼于其对基因表达的调控和具体的作用机制上。本文综述了近些年来的研究进展，包括多不饱和脂肪酸(PUFA)对脂肪合成组织和非脂肪合成组织中有关基因的调控和PUFA调控基因表达的具体机制。     

Cloning and Sequence Analysis of Y-box Binding Protein Gene in Min Pig

In order to study the gene sequence of Min pig Y-box binding protein(YB-1)gene,the complete coding sequence of Min pig YB-1 gene was cloned by RT-PCR,the sequence features were analyzed by some software and online website.The results showed that the complete CDS of Min pig Y-box was found to be 975 bp long,encoding 324 amino acids.It contained a conserved cold shock domain and several phosphorylation sites,but had no transmembrane domains,and was consistent with a protein found in the cytoplasm.Min pig YB-1 nucleotides shared high similarity(61.37%-97.66%)with other mammals.     

心肌型脂肪酸结合蛋白的纯化及亲和配体的研究

利用盐析、G-75凝胶过滤层析和DEAE-葡聚糖纤维素离子交换层析技术,从牛心中分离出心肌型脂肪酸结合蛋白,经SDS-PAGE鉴定与免疫印迹(Western blot)分析,获得了纯品H-FABP。采用噬菌体随机展示七肽库,以H-FABP为靶标,对其亲和配体进行筛选,结果获得了与H-FABP有特异性亲和作用的配体序列,为其临床检测急性心肌梗塞新方法的建立奠定了基础。     

猪心脏脂肪酸结合蛋白基因的克隆和测序分析

 根据GeneBank发表的猪心脏脂肪酸结合蛋白（heart fatty acid-binding protein,H-FABP）基因序列,设计合成一对引物,从杜长大三元杂交猪的腰大肌中提取总RNA,对H-FABP基因进行RT-PCR扩增,产物经琼脂糖电泳分析,呈现一条约124 bp的条带,回收纯化后,将其克隆至pMD18-T质粒载体中,然后进行核苷酸序列分析。与GeneBank中报道的H-FABP基因比较后发现,该基因片段与其它的核苷酸的同源性为94%～100%,推导的氨基酸的同源性为100%.     

鸡H-FABP基因外显子2的PCR-SSCP分析

实验选用4个地方品种:清远麻鸡、惠阳三黄胡须鸡、封开杏花鸡、广西霞烟鸡以及3个近年培育的品系:岭南黄快大Ⅱ号配套系、矮小鸡E4专门化品系、AA配套系为材料(每个品种或品系各取5个个体,共35个个体)。采用PCR-SSCP结合DNA测序技术,对H-FABP(心脏型脂肪酸结合蛋白)基因第2外显子区进行了单核苷酸多态性(SNP)分析。结果表明:在第一内含子区含有丰富的SNP位点:580 bp(T→G)、595 bp(A→C)、610 bp(C→-)、617 bp(A→G)、622 bp(A→T)、625 bp(A→-)、627 bp(A→C)、629 bp(A→C)、631 bp(A→C)、677 bp(G→A)和1个双碱基突变586~587 bp(TG→CA);在第二外显子区发现了一个非SNP位点785 bp(C→T);这表明在外显子2上本实验所选品种的序列之间没有差异,但与GenBank上登录号为AY648562的序列相比存在变异。此外在第二内含子区也发现了一个非SNP位点:1018 bp(C→T)。这为进一步分析H-FABP基因的遗传变异及其与肉质性状的相关性以及将该分子标记应用于育种计划奠定一定的理论基础。     

猪H-FABP基因intron3全序列测定

[目的]为将H-FABP基因应用于猪育种过程中的标记辅助选择提供基础资料。[方法]根据GenBank数据库上公开发表的相关的猪H-FABP基因序列设计特异性扩增引物,对H-FABP基因内含子3的PCR产物纯化后直接进行测序。[结果]成功扩增出猪H-FABP基因intron 3的全序列,全长为1 350 bp,已向GenBank数据库提交,检索号为DQ 002993。[结论]该研究为确定影响肌内脂肪沉积的主效基因奠定了理论基础。     

黄淮山羊H FABP基因多态性及其与肌内脂肪含量的关联分析

 运用PCR SSCP技术检测黄淮山羊H FABP基因部分外显子和内含子区域的多态性,采用最小二乘均数法对其与IMF含量的关系进行分析。在2对扩增引物中只检测到1个多态位点,表现为GG和GC两种基因型。GC基因型个体的IMF含量显著高于GG基因型个体,在背最长肌和腿肌中GC基因型个体的IMF含量显著高于GG基因型（P<005）;在胸肌中,GG基因型与GC基因型个体之间的IMF含量无显著差异（P>005）。据此推测,H-FABP基因该多态位点的GC基因型可能是IMF含量性状的有效标记基因型。     

油用牡丹脂肪酸脱氢酶基因FAD3的克隆与表达分析

【目的】ω-3脂肪酸脱氢酶(ω-3 FAD)为植物脂肪酸生物合成途径中的关键酶,通过对油用牡丹‘凤丹’ω-3 FAD基因结构特征及其在不同组织中的表达模式进行分析,为研究FAD3在油用牡丹‘凤丹’脂肪酸形成过程中的调控提供理论基础。【方法】采用RACE和RT-PCR的方法克隆油用牡丹‘凤丹’ω-3 FAD基因,用Vector NTI Advance 11软件进行序列分析,BLAST进行同源性比较,并用MEGA7.0的邻接法(neighbor-joining,NJ)构建系统进化树,利用在线蛋白质分析工具Ex PASy预测FAD3蛋白的基本参数和特性,利用Phyre2预测蛋白质二级和三级结构,并通过实时荧光定量PCR检测该基因在油用牡丹‘凤丹’不同发育期的种子以及不同组织中的特异性表达情况。【结果】获得油用牡丹‘凤丹’脂肪酸脱氢酶FAD3,命名为FAD3(Gen Bank登录号:KX906966)。序列分析表明该基因c DNA序列全长1 723 bp,其中,开放阅读框1 308 bp,编码435个氨基酸,3′端非编码区长287 bp,5′末端非编码区长99 bp,预测成熟蛋白分子量为49.9 k D,理论等电点(p I)为7.42,N端无信号肽,脂肪系数为83.08,不稳定指数35.67,总水平亲水性为-0.222。经FAD3蛋白的二级结构预测,FAD3以α-螺旋、随机卷曲为主,其次是延伸链、β-转角含量较少;多序列比对结果表明,油用牡丹FAD3氨基酸序列含有2个保守结构域,系统发育分析结果显示‘凤丹’与芍药处于同一分支,其亲缘关系最近。TMHMM和Target P亚细胞定位分析得知,FAD3蛋白有3个跨膜区域,可能定位于内质网中发挥功能。组织特异性结果分析表明,FAD3在‘凤丹’的根、茎、叶、花瓣、雌蕊、雄蕊、种子中均有表达,其中,在叶中表达量最高,雌蕊次之,在雄蕊中表达量最低;不同时期种子中,10 d表达量最高,20 d次之,在60 d中表达量最低。【结论】成功从油用牡丹‘凤丹’中克隆获得FAD3全长c DNA序列,其在‘凤丹’不同组织中呈现出多种表达模式。