链霉菌Sa-21对烟草黑胫病的防效及抑菌作用研究

烟草疫霉引起的烟草黑胫病,是烟草生产上的重要病害之一。为了明确链霉菌Sa-21防治烟草黑胫病的应用潜力,用盆栽试验测定了链霉菌Sa-21的生防效果,并用生长速率法等手段探讨了链霉菌Sa-21对烟草疫霉的抑菌作用。盆栽试验表明,链霉菌Sa-21菌株发酵液对苗期和成株期烟草黑胫病有较好的控制效果,最高防效可达98.39%。菌株Sa-21粗浸膏对烟草疫霉菌丝生长的抑菌中浓度为56.1μg/mL,50μg/mL的粗浸膏处理后可以降低50%的菌丝生物量。菌株Sa-21粗浸膏对烟草疫霉孢子囊的产生、游动孢子释放、休止孢萌发以及细胞膜透性均有抑制作用,100μg/mL的粗浸膏基本能够完全抑制孢子囊的产生,并且对游动孢子释放的抑制率达50%以上;粗浸膏浓度为150μg/mL时,对休止孢萌发的抑制率达94.35%;随着粗浸膏浓度增加,菌丝细胞膜的透性也会加大。研究结果表明,链霉菌Sa-21代谢物对烟草疫霉的生长繁殖产生抑制作用,并为链霉菌Sa-21生防菌剂的开发及其对烟草黑胫病的防治提供了理论依据。     

荧光假单胞菌拮抗菌株对烟草疫霉的抑菌机制及控病效果

为探讨烟草根际生防细菌对烟草疫霉Phytophthora nicotianae的抑菌机制,从重庆地区连作烟田健康烟株根际土壤分离获得5株荧光假单胞菌Pseudomonas fluorescens拮抗菌株。通过平板对峙及代谢产物抑菌试验筛选对烟草疫霉具有高效拮抗作用的菌株,其中,P-72-10菌株抑菌效果最强,抑菌带半径达13.0 mm,相对抑制率为68.57%,且该菌株代谢产物对烟草疫霉菌丝生长有明显的抑制作用,相对抑制率达25.39%～46.03%;显微观察发现该菌株可引起烟草疫霉菌丝的分支增多,菌丝顶端膨大呈畸形,多数菌丝中间或顶端细胞的细胞壁加厚、原生质浓缩和产生类似厚壁孢子的细胞。在温室盆栽条件下P-72-10菌株对烟草黑胫病也表现出良好的控病效果,对抗病和感病品种的相对防效分别为53.57%和66.37%。     

多粘类芽胞杆菌LB-9的诱变及抑菌防病效果研究

为获得对烟草疫霉菌生防效果更佳的拮抗菌株,对多粘类芽胞杆菌LB-9进行基因诱变。利用原生质体电转化法,构建了菌株LB-9的Tn-5转座插入突变体库,获得约2000个转化子,通过平板对峙法筛选出对烟草疫霉菌拮抗能力增强且效果稳定的突变菌株3个,其中编号为A13的突变菌株对烟草疫霉菌的抑制效果达到80%以上,与原始菌株LB-9的抑菌率相比提高了20%以上。采用室内盆栽接种法研究了正突变菌株A13对烟草黑胫病的防控效果,并利用实时荧光定量PCR法初步分析了其诱导烟株体内抗病相关基因的表达。结果表明,正突变菌株A13处理烟株7 d后,对烟草黑胫病的防效高于原始菌株LB-9,防效可达80%以上,同时可诱导烟株体内不同信号通路中抗性相关基因的上调表达。本研究为多粘类芽胞杆菌插入诱变育种方法研究提供了理论支撑,对烟草黑胫病的生物防治具有重要意义。     

撕裂蜡孔菌对烟草黑胫病的防治效果及对烤烟生长的影响

为探讨撕裂蜡孔菌Ceriporia lacerata菌株HG2011对烟草黑胫病的防治效果和对烤烟的促生作用,利用该菌株制备发酵液和固体菌剂,通过拮抗和盆栽试验研究其对烟草黑胫病病原菌烟草疫霉Phytophthora nicotianae生长的抑制作用、对黑胫病的防治效果及对烟苗生长和养分吸收的影响。结果表明:撕裂蜡孔菌菌株HG2011能显著抑制烟草疫霉生长;在带毒平板试验中,含20%发酵液的培养基对烟草疫霉菌丝生长的抑制率达54.50%;在平板对峙试验中,菌株HG2011能使烟草疫霉菌丝扭曲、畸形和空泡化,最终完全侵入并覆盖烟草疫霉菌落。在盆栽试验中,施用撕裂蜡孔菌固体菌剂可降低发病烟苗叶片中的丙二醛含量,并能维持正常的细胞膜透性,使烟苗黑胫病发病率比单独接种烟草疫霉处理显著降低了15.55%～37.77%,且预防效果71.16%优于治疗效果17.98%。在化肥配施高量菌剂处理中烟苗的株高、最大叶面积和生物量均最高,比单施化肥处理显著增加9.08%、36.28%和11.84%;烟苗氮、磷、钾的吸收量比单施化肥处理显著增加11.29%、38.73%和12.79%。表明撕裂蜡孔菌菌株HG2011能有效防治烟草黑胫病,刺激烟苗生长、促进养分吸收,表现出良好的防病促生效应。     

烟草疫霉拮抗细菌B44R-1的筛选及其生防效果

为获得烟草疫霉Phytophthora nicotiana的优良拮抗菌,从烟草根际土壤和根系中分离对烟草疫霉具有较好拮抗作用的菌群,并从中筛选具有较强抑菌效果的拮抗菌株。通过形态学、生理生化试验、16S rDNA基因测序分析鉴定拮抗菌株种属,评价其防病效果及对烟草的促生作用。结果表明,从烟草根际土壤和根系分离得到拮抗菌群39个,并从中筛选得到拮抗效果较好的菌株B44R-1,初步鉴定其为皮特不动杆菌Acinetobater pittii。菌株B44R-1对烟草黑胫病的防效达到55.37%,对烟株根系生长发育影响明显,烟株鲜重、干重、株高、茎围、叶数和最大叶面积相比对照均有提高。本研究筛选获得对烟草黑胫病菌的拮抗菌不动杆菌,对烟草黑胫病防治效果和促生作用显著,具有较好的生防潜力。     

玉米根系分泌物对烟草黑胫病菌的抑制活性及其抑菌物质分析

本文研究了玉米根系与烟草疫霉菌游动孢子的互作及玉米根系分泌物对烟草疫霉菌各个生育阶段的抑菌活性,并利用HPLC-MS分析了根系分泌物中具有抑菌活性的物质。结果表明,玉米根系能吸引烟草疫霉菌游动孢子,其分泌物也能使孢子休止并裂解。进一步研究表明,玉米根系分泌物对烟草疫霉菌游动孢子的释放、休止孢萌发及菌丝生长均具有明显的抑制活性,在浓度0.90 mg/m L时抑制率分别为73.8%、87.2%和55.2%。HPLC-MS分析结果表明,根系分泌物中存在苯并嗪类化合物丁布及其降解产物门布,其中门布对烟草疫霉菌菌丝的生长具有明显的抑菌活性,浓度0.30 mg/m L时抑制率达90.94%。综上所述,玉米根系既能吸引游动孢子,又能分泌对烟草疫霉菌具有抑制活性的苯并嗪类化合物。该结果对合理利用玉米与烤烟轮作控制烟草黑胫病的发生具有重要意义。     

烟草疫霉拮抗放线菌的生防潜力评价

由寄生疫霉烟草致病变种Phytophthora parasitica var. nicotianae引起的烟草黑胫病是连作烟田的重要土传病害之一,重发年份常给烟农造成巨大的经济损失。本研究通过稀释分离法从贵州省遵义市烟草黑胫病重病区的健康烟草根际土壤中共分离获得179株放线菌。通过平板对峙培养法筛选得到15株对烟草黑胫病菌菌丝生长有明显抑制作用的菌株。测定了这15个菌株代谢液对烟草疫霉菌丝生长的抑制作用,其中H-3菌株代谢液对烟草疫霉菌丝生长抑制率最高,达到85.68%。研究了H-3代谢液对烟草疫霉游动孢子萌发的抑制作用。结果显示培养6、12和24h对游动孢子萌发的抑制率分别为72.75%、65.20%和63.45%。结合形态特征及16S rDNA序列分析,初步鉴定H-3菌株属于链霉菌属Streptomyces sp.。盆栽防效和田间防效试验结果表明,施用H-3对烟草黑胫病具有一定的防效,当添加H-3固体发酵物22.5 kg/hm2时田间防效最好,防效可达70.42%。通过荧光定量PCR技术检测了烟草根际土壤中烟草疫霉的量,结果发现,随着H-3用量的增加,根际土壤中烟草疫霉的拷贝数呈下...     

拮抗放线菌TA21对烟草根黑腐病菌的抑制及其控病作用

菌株TA21是一株从重庆烟区土壤中筛选出的对烟草根黑腐病菌Thielaviopsis basicola有较强拮抗作用的放线菌,为了明确其抑菌效果和控病作用及其在烟草根黑腐病生防中的应用潜力,本文进行了菌株TA21抑菌活性检测和温室控病测试;并通过形态学、生理生化和分子分类的方法确定其分类地位。室内测定试验表明,菌株TA21对烟草根黑腐病菌的抑菌带宽达12.5mm;温室控病试验发现其对烟草根黑腐病防治效果达85.3%。无菌滤液试验表明,在试验浓度范围内无菌滤液均能有效抑制烟草根黑腐病菌菌丝生长、减少孢子萌发。根据菌株形态特征、培养性状、生理生化特性、细胞组分及16S rDNA序列分析,确定菌株TA21为链霉菌属吸水链霉菌Streptomyces hygroscopicus。     

拮抗细菌B8对烟草黑胫病菌的抑制作用及其菌株鉴定

从烟草根际土壤中分离到对烟草黑胫病菌及其它植物病原菌具有抑制作用的菌株B8,平板对峙培养抑菌带内菌丝畸形、原生质凝集或外渗。其发酵原液和发酵液的无菌滤液均能抑制烟草黑胫病菌和蜡状芽孢杆菌;离体叶片接种法测定其发酵液对烟草黑胫病的防效,结果表明预防作用达100%。室内盆栽试验表明B8菌株发酵液对烟草黑胫病的预防作用可达78.1%,优于治疗作用。该菌菌体杆状,芽孢侧生、椭圆形,经形态学、生理生化性状和16S rDNA序列测定,将其鉴定为侧孢短芽孢杆菌。     

烟草黑胫病拮抗根际芽胞杆菌FB-16的筛选鉴定及其抑菌活性

为获得对烟草黑胫病有较强生防效果的拮抗细菌,从健康烟草根际采集30份土壤样品,分离纯化得到347株细菌,经病原真菌定向筛选后得到1株对烟草黑胫病菌等病原真菌拮抗活性较好的细菌FB-16,其对烟草黑胫病菌的抑菌带宽为23mm。采用菌丝生长速率法、作用机制试验、温室防病试验测定FB-16的抑菌作用,并通过形态学特征、生理生化特征及16S rDNA序列分析对菌株进行鉴定。结果显示,菌株FB-16发酵液对烟草黑胫病菌菌丝生长抑制率为95.96%;其代谢产物对烟草黑胫病菌菌丝有致畸作用;菌株FB-16为解淀粉芽胞杆菌Bacillus amyloliauefaciens(Gen-Bank登录号为JN245982);饱和度25%硫酸铵获得的抑菌物质对烟草黑胫病菌的抑菌活性较高,抑菌圈直径达42.00 mm;FB-16活性产物处理的烟草植株在接种烟草黑胫病菌7天后的防治效果为69.96%。表明菌株FB-16在烟草黑胫病生物防治中具有潜在的利用价值。     

内生枯草芽胞杆菌Itb57对烟草疫霉的抑制及生理生化影响

为明确内生枯草芽胞杆菌Itb57菌株抑制烟草疫霉生长的机理,分别采用电镜扫描法、生化测定法和电导法研究了其对烟草疫霉菌丝形态及生理生化指标的影响。结果显示,经Itb57菌株发酵滤液处理的疫霉菌丝畸形膨大、分枝短粗,孢子囊的形成及萌发受到显著抑制,当发酵滤液浓度为50%时,抑制率分别为79.69%和70.85%;且与对照相比,处理组疫霉菌细胞壁主要成分碱溶性、碱不溶性和水溶性的β-1,3-葡聚糖含量分别降低了51.18%、42.56%和39.42%,β-1,3-葡聚糖合成酶活性降低了72.45%,DNA含量降低了14.64%;线粒体复合酶活性显著低于对照,其中复合酶II活性降低了79.25%,菌丝处理液电导率升高。表明枯草芽胞杆菌Itb57菌株发酵滤液能减少疫霉细胞壁主要成分β-1,3-葡聚糖含量,破坏细胞膜的完整性,导致菌丝生长受阻或产生畸形,对烟草黑胫病的控制具有潜在的生防价值。     

氟噻唑吡乙酮对烟草疫霉的室内毒力及对烟草黑胫病的防效研究

烟草黑胫病是由烟草疫霉引起的一种土传性真菌病害, 对烟叶生产造成严重的危害。为了探究氟噻唑吡乙酮对烟草黑胫病的防治效果, 在室内离体条件下测定其对烟草疫霉菌丝生长、孢子囊形成的抑制作用;并通过室内盆栽和大田试验评价氟噻唑吡乙酮对烟草黑胫病的防治效果及对烟草的安全性。结果表明, 氟噻唑吡乙酮对各个地区烟草疫霉菌丝生长和孢子囊形成的抑制效果均很好, 与其他对照药剂相比, 毒力较高, EC 50分别为0.000 5 mg/L和0.000 4 mg/L。室内盆栽试验结果表明, 10%氟噻唑吡乙酮可分散油悬浮剂4 000倍液对烟草黑胫病的防效为84.33%, 2 000倍液防效则达到了96.00%, 与对照药剂相比有显著差异。田间药效试验结果表明, 10%氟噻唑吡乙酮可分散油悬浮剂2 000、3 000、4 000倍液的防效分别达到了93.82%、90.18%和83.27%, 对照药剂80%烯酰吗啉水分散粒剂2 500倍液和80%代森锰锌可湿性粉剂600倍液防效分别为77.82%和75.27%。此外, 相比于对照药剂, 氟噻唑吡乙酮在株高、有效叶片数、叶长、叶宽和光合速率方面有更好的促进作用。本研究结果表明, 氟噻唑吡乙酮能够有效防治烟草黑胫病, 并在一定程度上可以提高烟草产量和品质。     

烟草黑胫病防治技术

烟草黑胫病是由烟草疫霉菌引起的一种毁灭性土传真菌病害。常年在烟草种植区发生,该病菌容易对化学药剂产生抗药性,在防治上比较困难。针对烟草黑胫病的发生特点,结合烟叶生产实践,介绍烟草黑胫病防治技术,供生产上参考。     

烟草黑胫病和根黑腐病生防假单胞杆菌的筛选与鉴定

为获得对烟草黑胫病和根黑腐病具有双重防病效果且能够促进烟草生长的假单胞杆菌,采用稀释涂布法从40份土壤样品中分离出201株细菌,通过平板对峙和含毒介质法,筛选出对烟草黑胫病和烟草根黑腐病病原菌均具有良好拮抗作用的菌株PA2101和PG3402。盆栽促生试验表明,菌株PA2101和PG3402能协调地改善烟草地上部分的生长和烟草根系发育,均在一定程度上增加了烟草的株高、叶面积、株鲜重、根鲜重、叶片数和根长,提高了烟草的根冠比和根活力。盆栽试验结果表明,菌株PA2101对烟草黑胫病和根黑腐病的防效分别为70.11%和62.67%,均高于其对照药剂;菌株PG3402对两种病害的防效分别为60.92%和60.00%,与对照药剂相当。抗性标记菌株的定殖试验结果表明,菌株PA2101和PG3402在接种后第29 d能定殖于烟草根际土壤和根内,在烟草茎和叶内也能长时间存在,表明两菌株能够良好定殖。16Sr DNA序列、菌落形态和生理生化性状分析表明,菌株PA2101为铜绿假单胞杆菌Pseudomonas aeruginosa,菌株PG3402为格拉纳达假单胞杆菌Pseudomonas granadensis。综上所述,菌株PA2101和PG3402对烟草具有良好的促生作用,并对烟草黑胫病和根黑腐病有较好的防病效果,是具有生防潜力的菌株。     

纳米氧化锌对烟草疫霉菌的抑菌作用研究

烟草黑胫病是由烟草疫霉菌(Phytophthora nicotianae)引起的一种毁灭性真菌病害,发病率高,分布范围广,严重威胁烟草业的可持续发展.目前,抗病育种和化学防治是防治该病害的主要措施,但这些方法存在很多弊端.因此,寻求新策略高效防治黑胫病已经迫在眉睫.本研究在室内条件下研究纳米氧化锌(ZnO NPs)对烟...     

青霉菌灭活菌丝体诱导烟草对黑胫病的抗性研究

以青霉菌灭活菌丝体(Drymycelium of Penicillium chrysogenum,DMPC)作为有机肥进行了诱导烟草抗黑胫病的温室试验.研究结果表明,烟草经青霉菌灭活菌丝体诱导处理后,其黑胫病发病率及病情指数明显降低,防治效果明显,而且防治效果与青霉菌灭活菌丝体浓度及处理时间有关;烟草过氧化物酶(POD)和多酚氧化酶(PPO)等2种细胞防御酶活性提高,对黑胫病的抗性增强.     

芽胞杆菌CQBS03抑菌蛋白TasA基因的克隆及原核表达

为了探讨柑桔溃疡病生防菌芽胞杆菌Bacillus CQBS03菌株TasA基因的功能,采用PCR方法从CQBS03基因组DNA中扩增出编码TasA基因的全长DNA序列,并构建pEASY-E1/TasA原核表达载体,经大肠杆菌Escherichia coli表达获得TasA基因的融合表达蛋白,纸碟法检验融合蛋白对柑桔溃疡病菌Xanthomonas citri citri的抑制作用。结果显示,CQBS03菌株的TasA基因包含1个786 bp的完整开放阅读框（GenBank登录号为JQ309841）,编码261个氨基酸残基;该序列与来源于解淀粉芽胞杆菌B.amyloliquefaciens的1个已知同源TasA基因序列FJ713580的相似性达99.75%。原核表达产物经SDS-PAGE分析,检测到约31 kD的融合蛋白;纯化后的融合蛋白对柑桔溃疡病菌有明显的抑制作用,72 h后抑菌圈直径达11.5 mm。研究表明TasA基因是生防菌芽胞杆菌CQBS03抑制柑桔溃疡病菌的功能基因之一,并且该基因对原核表达宿主没有抑制作用,具有较好的开发利用前景。     

生防链霉菌菌株S16鉴定和防蔬菜根肿病的潜力评价

【目的】为了寻找新的生防资源应对日益严重十字花科蔬菜根肿病。【方法】本实验从根肿病重病田仅存的几株健康白菜的根际土壤中,通过培养组学分离到485株细菌,以辣椒疫霉Phytophthora capsici为指示菌,利用平板对峙和温室盆栽试验筛选对白菜根肿病的生防菌株,并通过形态学特征、16S rDNA序列对其进行鉴定,利用热处理、酸碱处理、紫外线处理和蛋白酶K处理对生防菌的稳定性进行测定,同时利用平板对峙的方法测定了该菌的抑菌谱。【结果】通过对峙培养筛选获得46株有抑菌效果的生防菌株,并利用盆栽实验进行复筛,获得1株对白菜根肿病具有较好防治效果的菌株,命名为S16。该菌株S16对60℃以上的高温比较敏感;对紫外线照射不敏感,有较强的UV稳定性;pH在4～8处理后稳定性较好,且酶处理对菌株产生的抗菌物质几乎没影响。结合形态学特征和系统发育分析结果将该菌株鉴定为灰色橙黄链霉菌Streptomyces griseoaurantiacus。S16对辣椒疫霉Ph.capsici等8种病原真菌具有抑制效果,抑菌谱较广,对白菜根肿病的盆栽防效达到68.74%。【结论】表明灰色橙黄链霉菌S16对十字花科...     

木霉对烟草黑胫病菌的拮抗机制

采用平板对峙法、水解酶平板活性测定、圆孔滤液法与游动孢子萌发检测、挥发性抑菌物检测等方法探讨木霉生防菌株对烟草疫霉Phytophthora nicotianae Brada de Hann的拮抗作用机制。结果表明,TR13、TR14、TR17对烟草疫霉有竞争、重寄生和抗生作用,但不同木霉菌株对烟草疫霉的拮抗作用有所不同,TR13、TR14的竞争作用较强;水解酶平板活性测定表明,3个木霉菌株均产生β-1,3-葡聚糖酶、纤维素酶,两种酶均参与烟草疫霉细胞壁的消解,以TR13与TR14酶的活性较高;3个菌株均产生非挥发性抗生素抑制烟草疫霉菌孢子萌发,但对疫霉菌菌丝的生长影响不大;TR13、TR14几乎不产生挥发性抗生素,TR17则产生挥发性抗生素,明显抑制疫霉菌生长。     

4种生防菌对烟草黑胫病的防治作用

烟草黑胫病是烟草生产中分布广泛、最具毁灭性的世界性土传病害,其病原菌可以侵染烟草的任何生育阶段,主要为害大田期烟株。概述芽孢杆菌、假单胞杆菌、放线菌、木霉菌4种生物防治菌对烟草黑胫病的防治进展,为烟草黑胫病生物防治提供参考。