西蓝薹RAPD-PCR反应体系的建立与优化

以新型蔬菜西蓝薹为研究对象,采用改良的十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法提取基因组DNA,并通过单因素多水平梯度试验,筛选了Taq酶、引物、DNA模板、Mg2+、dNTPs的浓度或用量,建立了西蓝薹RAPD-PCR的最佳反应体系:25 μL反应体系中含0.8 U Taq酶、0.40 μmol/L引物、30 ng DNA模板、1.6 mmol/L Mg2+、0.25 mmol/L dNTPs、2.5 μL 10×PCR buffer.利用优化的反应体系,对5个西蓝薹品种进行体系稳定性检测,结果表明该反应体系的重复性和稳定性良好.     

松阿扁叶蜂SSR-PCR反应体系的优化

以SDS-蛋白酶K法提取的松阿扁叶蜂(Acantholyda posticalis Matsumura)基因组DNA为模板,利用L16(45)正交设计对影响松阿扁叶蜂SSR-PCR反应的主要参数DNA模板、Taq DNA聚合酶、Mg2+、引物和dNTPs进行优化.结果表明,松阿扁叶蜂SSR-PCR最优的反应体系为25 μL体系中含1.00U Taq DNA 聚合酶、3.00 mmol/L Mg2+、3.75 mmol/L dNTPs、25.00 ng/μL DNA模板和10.00 μmol/L引物.     

蚕豆RAPD反应体系的建立与优化

利用正交设计L16(45)对蚕豆RAPD-PCR反应的5因素(Taq酶、Mg2+、dNTP、模板DNA、引物)在4个水平上进行优化试验,结果表明蚕豆最佳的RAPD-PCR的反应体系(20μl)为:10×缓冲液2.0μl,1.0 U Taq DNA 聚合酶、1.5 mmol/L Mg2+、0.4mmol/L dNTPs、3 mmol/L引物、200 ng 模板 DNA.     

侧耳RSAP-PCR体系的建立和优化

采用单因素试验和正交设计相结合进行了侧耳(Pleurotus ostreatus)RSAP-PCR反应体系的建立和优化,并对优化后体系的稳定性进行了验证.讨论了Mg2+浓度、dNTPs浓度、引物浓度、Taq聚合酶用量和模板DNA含量对侧耳RSAP-PCR反应的影响,最终得出总体积为25μL的反应体系:30 ng模板DNA,2.0 μL 10倍PCR buffer,Mg2+ 2.5 mmol/L,dNTPs o.25 mmol/L,引物0.32 μmol/L,Taq DNA聚合酶2U,ddH2O 13.2 μL.     

沙棘SRAP-PCR反应体系的优化及引物筛选

为建立适合沙棘(Hippophae rhamnoides L.)的SRAP-PCR反应体系,对影响SRAP-PCR的Mg2+浓度、Taq DNA聚合酶浓度、引物浓度、dNTPs浓度、模板DNA浓度进行了优化.优化后的反应体系为Mg2+3.0 mmol/L、Taq DNA聚合酶2U/25μL、引物0.8 μmol/L、dNTPs 0.25 mmol/L、模板DNA 30ng/25μL,反应总体系25 μL.利用此体系从30对引物组合中筛选出17对适合沙棘SRAP-PCR的引物,有助于沙棘的分子标记辅助育种研究.     

通江百合SRAP-PCR体系优化及引物筛选

利用正交设计和单因素试验相结合的方法,从模板DNA,引物,dNTPs,Taq DNA聚合酶,Mg2+等5因素4水平来优化通江百合SRAP-PCR反应体系,优化后的反应体系为Mg2+ 2.5 mmol/L,Taq DNA聚合酶0.25 U,dNTPs 0.25 μmol/L,引物0.25 μmol/L,模板DNA 50 ng,总体积为25 μL.依据优化后的体系从144对引物中筛选出扩增条带清晰,多态性丰富的引物组合24对,体系验证结果表明,优化后的体系具有较高的稳定性和重复性.     

红花檵木RSAP-PCR反应体系的建立与优化

分别采用单因子试验和正交设计试验对影响红花檵木RSAP-PCR反应体系的5个因素(DNA模板量、Mg2+浓度、dNTPs浓度、引物浓度、Taq酶量)在4个水平上进行优化.结果表明,2种方法得到的影响因素的最优水平存在差异,通过综合比较与分析,选取红花檵木RSAP-PCR最优反应体系为:在25 μL的反应体系中,模板量70 ng, Mg2+浓度1.50 mmol/L,dNTPs浓度0.25 mmol/L,引物浓度0.20 mmol/L,Taq酶量2.50 U.     

半夏RAPD分子标记反应体系优化

从半夏中提取基因组DNA作为模板进行RAPD反应的优化试验,获得RAPD-PCR扩增反应的最佳条件:25μL体系中Mg2+1.5 mmol/L;dNTPs各0.2 mmol/L;模板DNA100 ng;引物0.25μmol/L;Taq酶活性值1.0 U。     

利用正交设计优化异色瓢虫ISSR-PCR反应体系

利用正交设计L16(45)对异色瓢虫(Harmonia axyridis Pallas) ISSR-PCR反应体系的5个因素(Taq酶、Mg2+、模板DNA、dNTPs、引物)在4个水平上进行优化试验,试验结果用DPS软件进行分析,建立了异色瓢虫ISSR-PCR反应的最佳体系,即在20 μL体系中模板150 ng、引物0.5 μmol/L、dNTPs 0.15 mmol/L、Taq DNA聚合酶1.5 U、Mg2+ 1.25 mmol/L.并对反应体系进行梯度退火试验,得到最佳退火温度为53.3 ℃.     

芥菜SCoT分析体系的建立与优化

采用L25(56)正交设计方法,对影响芥菜SCoT-PCR反应的Mg2-,dNTPs,Taq酶,引物,模板DNA等因素的浓度进行优化,建立了适用于芥菜研究的SCoT PCR最佳反应体系:20μL反应体系中,含有Mg2+1.875 mmol/L,dNTPs 0.35 mmol/L,Taq酶2.00 U,Primer 0.875 μmol/L,模板DNA 10 ng.利用芥菜的16个品种对该反应体系进行验证,得到了条带清晰、亮度适中、稳定可靠的电泳图.     

花椰菜RAPD-PCR反应体系的优化

采用正交法对影响花椰菜RAPD-PCR反应的5个实验因素进行了优化,结果表明,花椰菜RAPD反应的优化体系为:dNTPs 0.12 mmol/L,引物0.8~1.6μmol/L,模板DNA为20~80 ng,Taq酶为0.75 U,退火温度34~36℃。试验证明,Taq酶用量对RAPD-PCR反应体系的影响最大,退火温度、引物浓度、dNTPs用量对RAPD-PCR反应结果影响均小于Taq用量,但相差不大,模板浓度的影响最小。     

甘草RAPD-PCR反应体系正交优化研究

[目的]建立一套适合甘草分子学研究的RAPD-PCR反应体系。[方法]以甘草种质为试材,采用正交试验法设计,对影响RAPD-PCR扩增的主要因素dNTPs、引物、Taq酶和DNA模板进行优化筛选。[结果]总体积25μl的甘草RAPD-PCR最佳反应体系为：10×PCR缓冲液（含MgCl2）2.5μl,10 mmol/L dNTPs 2.5μl,50 ng DNA 2.0μl,10μmol/L引物2.0μl,5 U/μl Taq酶0.4μl。对引物的退火温度进行了梯度筛选,34℃时扩增效果较好。[结论]进行甘草RAPD-PCR反应体系的正交优化非常有效。     

甘草RAPD-PCR反应体系正交优化研究(英文)

[目的]建立一套适合甘草分子学研究的RAPD-PCR反应体系。[方法]以甘草种质为试材,采用正交试验法设计,对影响RAPD-PCR扩增的主要因素dNTPs、引物、Taq酶和DNA模板进行优化筛选。[结果]总体积25μl的甘草RAPD-PCR最佳反应体系为:10×PCR缓冲液(含MgCl2)2.5μl,10mmol/LdNTPs2.5μl,50ng DNA2μl,10μmol/L引物2μl,5UTaq酶0.4μl。对引物的退火温度进行了梯度筛选,34℃时扩增效果较好。[结论]进行甘草RAPD-PCR反应体系的正交优化非常有效。     

石榴RAPD反应体系优化及亲缘关系研究

利用正交试验设计,从Mg2+、dNTP、引物、酶4种因素3个水平上对石榴RAPD反应体系进行优化,确立了适合石榴RAPD反应体系:在25μl反应体系中,含1×PCRbuffer、2.5mmol/LMgCl2、200μmol/LdNTP、0.2μmol/L引物、50ng模板DNA、0.5UTaq DNA聚合酶。通过梯度PCR测验,确定了适宜的退火温度37℃。利用优化的RAPD反应体系对11个石榴品种进行亲缘关系分析,结果表明,11个品种之间的多态性比较高,变异大。聚类图结果表明,11个品种被明显分为临选1号、净皮甜、新大甜、临选14号;大粒三白甜、大青皮酸、小红皮酸、白花、江石榴、薄皮糙、玉石籽两个类群。因此,这一优化体系适合于石榴品种间的亲缘关系鉴定。     

珍稀濒危植物银缕梅ISSR-PCR反应体系建立及优化

[目的]建立和优化银缕梅ISSR-PCR反应体系。[方法]采用正交试验和单因子试验对影响PCR扩增体系中的Mg~(2+)浓度、dNTPs、模板DNA及引物浓度、Taq酶用量5个因子进行分析研究。[结果]银缕梅ISSR-PCR 25μL反应体系中5个因子最优水平:DNA模板(20 ng/μL)2.50μL,引物(10μmol/L)1.00μL,Taq酶(5 U/μL)0.10μL,Mg~(2+)(25 mmol/L)3.00μL,d NTPs(2.5 mmol/L)1.50μL。[结论]银缕梅ISSR-PCR反应最优体系的建立为进一步利用ISSR对其进行分子标记辅助育种、分子指纹图谱构建和遗传多样性分析等后续研究奠定了基础。     

萝卜EST—SSR反应体系的建立与优化

利用正交设计L16（4^5）对萝卜SSR—PCR反应体系的5因素（Taq酶、Mg^2＋、模板DNA、dNTP、引物）在4个水平上进行优化,获得了最佳反应体系,即20山反应体系中含有0．10mmol／LdNTP,3．0mmol／LMg^2＋,50ng模板,0．500μmol／L引物,1．0UTaq酶。使用优化的反应体系,扩增条带清晰,可满足不同引物组合和萝卜材料的要求。此研究为今后利用SSR技术对萝卜种质资源进行分类、构建遗传图谱和基因定位奠定了基础。     

卷丹百合RAPD-PCR反应体系的正交优化

以CTAB法提取卷丹百合的基因组DNA,采用正交试验对影响卷丹百合RAPD-PCR扩增的反应组分浓度进行优化。结果表明,最佳的RAPD-PCR反应体系(20μl)中含:10×buffer 2μl,模板DNA60 ng,Mg2+1.875 mmol/L,dNTP 0.8 mmol/L,引物30 ng及Taq酶0.5 U。