草地早熟禾午夜2号植株再生研究

以草地早熟禾(Poa pratensis L.)品种午夜2号成熟种子为外植体,进行植株再生研究,建立高频再生体系,为草地早熟禾进行原生质体培养和细胞融合奠定基础。结果表明:诱导愈伤组织的最佳培养基为MS+2,4-D(1mg/L)+6-BA(0.1 mg/L)+3%蔗糖+0.7%琼脂,其诱导率为52.3%;最佳继代培养基为MS+2,4-D(1mg/L)+6-BA(0.3mg/L)+3%蔗糖+0.7%琼脂;最佳分化培养基为MS+NAA(0.5 mg/L)+6-BA(1 mg/L)+3%蔗糖+0.6%琼脂、分化率为57.5%;生根培养基同分化培养基,供体材料经100d的培养后获得再生植株。     

发根农杆菌介导的百脉根的基因转化

本文报道了豆科植物简单有效的转化再生实验系统。百脉根子叶外植体被含发根性Ｒｉ质粒载体的发根农杆菌感染，该载体带有一个ｕｐｔ－Ⅱ基因和一个甘露碱合成酶基因，在含卡那纱的筛选培养基上，外植体能诱导出毛根，并不断生长，毛根诱导频率为４５．５％。切取毛根根段在筛选培养基上培养，毛根能膨大，并分化再生成苗和植株，其再生率为７６７．９％。抗性植株形态正常，浅层根系发达，ＤＮＡ斑点杂交与Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交证明     

农杆菌介导的葡萄风信子愈伤组织遗传转化体系的优化

葡萄风信子(Muscari spp.)为百合科葡萄风信子属植物的总称,该属植物多具有稀少的正蓝色花色,是研究单子叶植物花青苷合成机理的模式材料。为开发一种高效的葡萄风信子遗传转化体系,本试验以葡萄风信子常见种亚美尼亚(M.armeniacum)、栽培品种‘黑眼睛’(M.aucheri‘Dark Eyes’)为材料,用叶片和花蕾分别诱导获得愈伤组织,对愈伤组织的潮霉素敏感性进行测试,对根癌农杆菌介导的愈伤组织遗传转化体系进行优化。试验结果表明：葡萄风信子亚美尼亚和‘黑眼睛’愈伤组织的潮霉素临界浓度分别为150 mg·L^-1和120 mg·L^-1。GUS染色结果显示不同基因型、不同农杆菌菌株及不同功率超声处理的愈伤组织瞬时转化效率差异不显著。而液体培养的花源愈伤组织能获得更高的瞬时转化效率,为葡萄风信子遗传转化的最优受体。其最高瞬时转化效率为98.73%。试验共获得了209块抗性愈伤组织,经PCR和RT-PCR检测,阳性率可达90%。本研究为在葡萄风信子中快速有效的开展基因功能研究奠定了技术基础。     

根癌农杆菌介导的1─磷酸甘露醇脱氢酶基因转化百脉根的研究

本文以百脉根子叶外植体为受体材料，通过根癌农杆菌介导的方法，导入外源目的基因1－磷酸甘露醇脱氨酶（mtlD）基因和npt－Ⅱ基因，建立了转化系统，获得转基因植株，转化频率为9．7％．转化处理的外植体再生植株的茎段在含卡那霉素的分化培养基上膨大，再生成苗和植株。抗性植株的形态正常，移入盆栽后生长良好。PCR扩增与扩增产物的Southern杂交证明外源基因已整合到百脉根基因组上。     

甘肃陇西野生草地早熟禾植株的再生体系

以甘肃陇西野生草地早熟禾(Poa pratensis)成熟种子为外植体,研究不同激素及其浓度组合对愈伤组织诱导及分化的影响。结果表明,不同浓度2,4-D处理下,愈伤组织的诱导率差异明显。MS+1.0 mg·L-1 2,4-D是陇西野生草地早熟禾愈伤组织诱导的最佳培养条件,诱导率为41.40%;单独使用2,4-D,愈伤组织的诱导率和质量要优于2,4-D和6-BA配合使用的情况。2 mg·L-1 6-BA适合甘肃陇西野生草地早熟禾愈伤组织的分化,在MS+2 mg·L-1 6-BA基础上添加0.5 mg·L-1 NAA和0.2 mg·L-1 2,4-D,绿苗率显著提高(P0.05),分别为22.88%和19.72%。生根培养基同分化培养基,生根率为100%。     

影响草地早熟禾愈伤组织诱导和分化的相关因子研究

以草地早熟禾品种午夜2号,新格莱德和橄榄球2号种子为外植体,采用不同温度及浸种时间处理后进行愈伤组织的诱导和分化培养。结果表明:4℃浸种16～24h可以促进愈伤组织形成,不同品种间差异不明显;午夜2号和橄榄球2号继代1次的愈伤组织分化能力最强,新格莱德继代2次的胚性愈伤组织分化率最高。     

硫酸铜,硝酸银和脱落酸对草地早熟禾胚性愈伤诱导的影响

试验以草地早熟禾4个品种的成熟种子为外植体,研究了CuSO4、AgNO3、脱落酸(ABA)对草地早熟禾胚性愈伤诱导的影响,结果表明,K3诱导培养基中添加CuSO4对草地早熟禾胚性愈伤组织的形成有促进作用,除DP192-10之外的3个品种都发生了明显的形态上的变化,DP-LF-300和2W42-117在添加5μmol/LCuSO4的培养基上诱导出了乳白色、致密的胚性愈伤组织,2W42-117的胚性愈伤率高达40%。在MS基本培养基中添加AgNO3、ABA对草地早熟禾4个品种的胚性愈伤组织的诱导没有作用。     

草地早熟禾转CMO-BADH双基因和转CMO基因耐盐性分析

通过对非转基因草地早熟禾(Poa pratensis L.)、转CMO-BADH双基因草地早熟禾、转CMO基因草地早熟禾进行不同浓度的NaCl胁迫试验,测定其细胞膜的透性,丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性、过氧化物酶(POD)活性、氧化氢酶(CAT)活性,评定各株系耐盐能力的强弱,同时还验证并比较了CMO-BADH双基因和CMO基因的耐盐性功能,为耐盐新品种的选育提供了理论依据。结果表明:所有株系的相对电导率、MDA含量均随盐浓度增加而增大,在NaCl胁迫下相对电导率和MDA含量的大小顺序为:非转基因株系>转CMO基因株系>转CMO-BADH双基因株系;在NaCl的胁迫下,各个株系的SOD活性、POD活性、CAT活性都有明显的提高,此3种指标的大小顺序为:转CMO-BADH双基因株系>转CMO基因株系>非转基因株系;综合考虑各个指标,各株系耐盐性强弱顺序为:转CMO-BADH双基因株系>转CMO基因株系>非转基因株系。     

草地早熟禾愈伤组织遗传转化受体系统的建立

以草地早熟禾成熟胚为外植体，并去除部分胚乳，或用浓盐酸处理，选择NB＋2，4-D2mg／L为诱导培养基，NB＋6-BA2mg／L为分化培养基，1／2NB＋IAA0．5mg／L＋NAA0．5mg／L为生根培养基，建立了这些品种的胚性愈伤组织高频诱导与再生系统，确定了G418（40-50mg／L）Hpt（50mg／L）的筛选临界浓度，确定了最佳分化时间，探讨了建立草地早熟禾转化受体系统的必要条件。     

农杆菌介导的桑树遗传转化条件的研究

本实验探讨了多种因子对桑树遗传转化的影响,结果表明:菌株LBA4404 比C58Cl转化效率高;不同外植体转化效率有差异,以叶盘、茎尖和愈伤组织为受体转化频率分别为8.7% 、5.6% 和2.8% ;农杆菌菌液浓度、感染时间、共培养时间等对桑树叶盘转化效率有一定影响;AgNO3 对遗传转化具有明显的促进作用。     

草地早熟禾牧草生长的气象条件分析

根据新疆乌鲁木齐市牧业气象试验站牧草观测资料,对草地早熟禾牧草生长期、生长高度和产草量的气候条件进行了分析,以期为开展牧业气象服务提供依据.     

刈割对青海早熟禾再生性的影响

通过对青海草地早熟禾不同刈割强度下再生性的研究,结果表明:刈割高度与频度不同,牧草再生能力不同。低茬高频的刈割,即留茬高度5cm、刈割频度7天/次,青海草地早熟禾再生性达到最佳水平,产草量也随之增加。     

海波草地早熟禾品种比较试验

2007～2009年,在天水甘谷完成海波草地早熟禾的品种比较试验,试验结果表明:该品种青绿期≥300d,坪用性状综合评价得分8.1分,为优.生长速度(0.58mm/d)缓慢,抗旱性强(年需水量为0.55t/m2左右),可节约养护成本50％.分蘖数393个/100cm2、密度31株/100cm2、单株分蘖数12.68个/株,三项指标均高于对照品种.游离脯氨酸含量81.5634μg/g,丙二醛含量0.0025μmol/g,可溶性糖含量4.5063％,与对照品种差异显著(P＜0.05)或差异极显著(P＜0.01),表明该品种具有明显的抗旱性和抗寒性.叶绿素总含量22.12mg/L,平均叶宽0.37cm,色泽较深,建坪的景观好.     

洽草、草地早熟禾与草坪杂草竞争能力的比较研究

本文在2011年6月-10月期间利用田间试验方法研究了洽草、草地早熟禾与草坪重要杂草-早开堇菜的种间竞争季节动态.结果表明：（1）早开堇菜的生物量、分枝数、有性繁殖能力在与两种草坪草竞争中均受到显著抑制,草地早熟禾对其抑制强度高于洽草;（2）在竞争中洽草的生物量、分蘖数显著增加,取得比较明显的竞争优势,草地早熟禾的株高、地上生物量显著升高,但根系以及分蘖能力受到早开堇菜显著抑制;（3）早开堇菜趋于增加地下部分竞争能力,而洽草和草地早熟禾更趋向于增强地上部分的竞争能力.     

草地早熟禾愈伤组织诱导及植株再生

以成熟种子和胚轴为外植体诱导草地早熟禾愈伤组织,比较草地早熟禾四个品种的愈伤诱导情况和不同6-BA浓度、愈伤年龄等因素对愈伤组织分化能力的影响。结果表明:成熟种子的出愈率与胚性愈伤诱导率均高于胚轴;MS 2,4—D(2mg/L) 6-BA(0.1mg/L)培养基为草地早熟禾Mardona品种较为合适的愈伤培养基,其诱导率为58.3%;MS BA(3mg/L) KT(0.2mg/L)为较为适合的分化培养基,再生率高达70%;随着继代次数的增加,草地早熟禾分化能力能够继续保持。选择致密、易碎、生长迅速的愈伤继代能够保持草地早熟禾的胚性,可以为遗传转化提供长期良好的植物材料。     

高效液相色谱法测定草地早熟禾4种内源激素的方法

建立了高效液相色谱法测定草地早熟禾中玉米素（ZT）、吲哚乙酸（IAA）、脱落酸（ABA）和赤霉素（GA₃）的方法。样品用80%甲醇水溶液冷浸提取。色谱柱为Extend-C₈（4.6×150 mm,5 μm）色谱柱,流速为1 mL·min^-1,进样量均为20 μL。前3种激素的流动相为甲醇和0.6%冰乙酸梯度洗脱;检测波长为254 nm。GA₃流动相为乙腈：0.6%冰乙酸=60：40等度洗脱;检测波长为208 nm。4种激素在一定检测范围内具有良好的线性关系,相关系数均达0.99以上;平均回收率为83.78%～99.09%;相对标准偏差均小于5%。结果表明：该方法灵敏度、精密度和准确度好,可以满足草地早熟禾ZT,IAA,ABA和GA₃ 4种激素的检测。     

转基因技术在草地早熟禾育种中的应用及展望

草地早熟禾Poa pratensis具有诸多优良性状,是一种优质的冷季型草坪草,在城市绿化、运动场建设和高速公路绿化等方面广泛应用.从草地早熟禾再生体系、遗传转化两大方面综述了近20年来国内外草地早熟禾转基因技术育种的研究状况和进展,结合我国实际,展望了转基因技术在我国草地早熟禾育种中的发展前景.     

草地早熟禾高效丛生芽体系的建立

本试验以草地早熟禾无菌种子苗茎尖为外植体,建立了高效的草地早熟禾丛生芽离体培养体系。结果表明:茎尖在附加0.5mg/L2,4-D和3.0mg/L6-BA的MS培养基上可诱导茎尖部位基部膨大,且诱导率最高。膨大的基部在2.0mg/L6-BA的丛生芽诱导培养基上,其诱导频率最大,然后将丛生芽转入附加3.0mg/L6-BA和0.07mg/L2,4-D的培养基上可进行继代培养,丛生芽在1/2MS培养基上生根率达100%。