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本研究取矮脚油鸡7日龄胚胎作为试验材料,用MEM、全培养基和PBS 3种不同的液体对鸡胚组织进行保存,同时在不同保存温度条件下按不同保存时间梯度,采用组织块贴壁培养法进行体外细胞培养。对细胞的保存液变化,细胞形态、细胞生长等情况进行研究,分析样品保存条件对细胞体外培养和细胞系构建的影响。结果发现,4 ℃保存的组织块培养效果明显优于室温保存;无论在4 ℃或常温,基础培养基保存的组织块培养效果明显优于保存液,全培养基效果最好。常温保存48 h以内3种保存液培养效果差别甚微,48 h后培养效果均急剧下降,96 h后保存在PBS中的组织失活,未长出细胞。本研究结果为建立细胞系采集样品的保存提供了一定的参考。 相似文献
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试验旨在探讨卵丘细胞包裹层数、表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)和谷胱甘肽(glutathione,GSH)对兔卵母细胞体外成熟培养的影响。分别采用切割法和针刺挤压法取母兔卵巢表面的卵丘卵母细胞复合体(cumulus oocyte complexes,COCS),将获取的COCS在基础培养液中添加不同浓度表皮生长因子(0ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、30ng/mL)及不同浓度的谷胱甘肽(0μmol/mL、0.5μmol/mL、1.0μmol/mL、1.5μmol/mL、2.0μmol/mL)进行体外成熟培养并观察第一极体排出率。结果表明:①手术刀切割法和针刺挤压法平均回收卵母细胞率分别为(22.83、39.29)枚,针刺挤压法显著高于手术刀切割法(P<0.05)。②3层以上卵丘细胞包裹的卵母细胞体外成熟率为81.27%,显著高于1~3层卵丘细胞包裹的体外成熟率63.75%和裸卵细胞体外成熟率23.45%(P<0.05)。③添加20ng/mL的EGF对兔卵母细胞体外成熟培养后成熟率为82.14%,效果最好,且显著高于对照组10ng/mL和30ng/mL EGF组(P<0.05)。④添加不同浓度的谷胱甘肽可以促进和提高兔卵母细胞体外成熟率,其中添加1.0μmol/mL的谷胱甘肽时,卵母细胞成熟率为71.44%,与添加1.5μmol/mL组的相比差异不显著(P>0.05),但显著高于其他组(P<0.05)。结论为添加20ng/mL的EGF和1.0μmol/mL谷胱甘肽,对用针刺挤压法获得3层以上卵丘细胞包裹的兔卵母细胞体外培养效果最佳。 相似文献
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动物细胞培养实验室的构建 总被引:3,自引:0,他引:3
随着动物细胞培养技术在组织学与胚胎学、细胞生物学、肿瘤学、免疫学、营养学、药理学、毒理学等学科的广泛应用 ,促使细胞培养技术的普及已成为一种可能。目前 ,有许多基层科研机构正在建立动物细胞培养实验室 ,笔者就细胞培养室的硬件建设谈点看法 ,供参考。1 总体原则1 .1 净、污分流 细胞培养室与相关辅助用房必须分开。培养室内环境要求清洁、空气清新、无尘、干燥。1 .2 布局合理 ,方便操作 所有实验室的布局要求统一、协调 ,最好相邻 ,以利于工作 ;室内各项设备安排要紧凑 ,节省空间 ,方便工作 ,避免交叉干扰。2 细胞培养实验… 相似文献
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目前牛卵母细胞体外成熟培养(IVM)技术体系已经建立起来,并在不断的探索与完善当中。国内外的研究热点主要集中在各种因素对体外生产步骤的影响上,尤其是对卵母细胞IVM和胚胎发育阻滞的研究,突破这些难点将有利弄清卵母细胞成熟的机理,促进胚胎操作技术和商业化胚胎IVP快速发展,在奶牛与肉牛的扩繁与母畜资源利用方面发挥巨大作用。本文将就现阶段牛卵母细胞体外成熟培养体系及影响因素的研究情况加以综述。 相似文献
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动物细胞培养技术在生物、医学等研究领域都有着广泛的应用,动物细胞培养方式包括原代和传代培养。培养方式有贴壁、悬浮以及固定化培养等方式。动物细胞的生长除了要给细胞组织提供一个无菌、恒温的环境,还要给予充分的营养。动物细胞培养技术有着很大潜力的开放空间,前景光明,但是它同时也面临着技术方面的诸多问题和挑战。本文将通过分析细胞喂养技术取得的进展,探讨动物细胞培养存在的问题以及动物细胞未来的发展方向,从而建立并筛选出合适的细胞系培养方法。 相似文献
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肠上皮细胞体外培养技术的研究进展 总被引:1,自引:0,他引:1
肠上皮细胞(intestinal epithelial cells,IEC)在一定条件下可进行体外分离和培养。体外细胞培养为研究肠上皮细胞增殖、分化和凋亡提供了简单、快速和准确的手段,广泛用于药物和营养素吸收机制的研究。近年来IEC体外培养研究概况,探讨IEC培养中应注意的问题,并对IEC培养的发展方向做出展望。 相似文献
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影响卵母细胞体外成熟的因素 总被引:2,自引:0,他引:2
卵母细胞体外成熟培养技术是现代生物技术中的重要内容之一。多年来科研人员为了进一步提高卵母细胞体外培养成熟率以及更深入了解卵母细胞成熟机制,对影响卵母细胞体外成熟的因素进行了大量的研究。本文较全面的综述了影响卵母细胞体外成熟培养的有关因素及其机制。 相似文献
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《中国兽医学报》2016,(3):454-458
研究E.tenella子孢子的纯化方法、接种剂量以及细胞生长状态对E.tenella在鸡胚盲肠上皮细胞体外培养中的影响,为E.tenella鸡胚盲肠上皮细胞体外培养模型的建立提供依据。以子孢子回收率和细胞感染率为指标,对DE52纤维素层析法、蔗糖密度梯度离心法和双层目筛过滤法纯化子孢子的效果进行比较;测定了子孢子接种剂量和细胞生长状态对虫体感染率的影响,并对各发育阶段的虫体进行观察。结果表明,采用双层目筛过滤法可得到纯净的子孢子,并且回收率和接种细胞后24、48h的虫体感染率均显著(P0.05)和极显著(P0.01)高于DE52纤维素层析法和蔗糖密度梯度离心法;在48孔细胞培养板中,子孢子的最佳感染剂量为每孔10万个;鸡胚盲肠上皮细胞覆盖率为85%~90%且贴壁细胞融合率在30%以上时接种子孢子,各时间段虫体的入侵率较高,且可以观察到E.tenella主要发育阶段的虫体。本研究获得了能使E.tenella在鸡胚盲肠上皮细胞完成整个内生发育的子孢子纯化方法、接种剂量和细胞生长状态。 相似文献
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猪卵母细胞体外成熟培养为胚胎体外生产、体细胞克隆等研究领域提供了大量廉价实验材料。本文就影响猪卵母细胞体外成熟的因素及其研究进展作简要综述。 相似文献
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影响哺乳动物卵母细胞体外成熟的因素 总被引:2,自引:0,他引:2
卵母细胞体外成熟是哺乳动物体外受精技术的关键步骤之一 ,它直接关系到体外受精技术的成功与否。由于影响哺乳动物卵母细胞体外成熟的因素很多 ,使得这一技术在应用时存在一定难度和问题。人们已经通过大量的试验对许多影响因素进行了分析和研究 ,并获得了有效的结果。本文旨在对影响该技术的几项重要因素进行阐述 ,以供同行们在试验中能形成较全面的考虑 ,从而进一步提高该技术的成功率。1 影响卵母细胞减数分裂的化学物质促减数分裂甾醇 (Meiosis activatingSterols,MAS)是近年来新发现的能够促进哺乳动物生… 相似文献