活体采卵时间间隔对牛克隆胚胎发育的影响

采用活体穿刺技术（ovum pick up,OPU）,分别间隔3／4（1周2次）、5、7、10、14d对同一批荷斯坦奶牛进行穿刺采卵,根据优势卵泡直径和所有卵丘细胞-卵母细胞复合体的状态确定采卵时卵泡所处的发育阶段,从而确定卵泡波的发育动态变化。并以间隔不同时间采卵获得的卵母细胞成熟后进行体细胞核移植（somatic cell nuclear transfer,SCNT）制备克隆牛胚胎。重构胚体内培养7d后,通过比较克隆囊胚的发育率判定卵母细胞质量的差异,从而确定最佳的采卵时间间隔。结果显示：①穿刺采集所有直径超过3min的卵泡后,可起始1个新卵泡波,大约5d后从属卵泡开始进入凋亡阶段,7d后进入晚期凋亡阶段,第7～10d又起始1个新的卵泡波,第14d时第2个卵泡波中的从属卵泡起始凋亡。②间隔不同时间组克隆囊胚发育率存在差异,间隔3／4d（1周2次）为23．1％,间隔5d组为15．0％,间隔7d组为10．9％,间隔10d组为4．9％,间隔14d组为29．0％。结果显示：间隔不同的时间采卵,卵泡所处的发育状态存在差异。并对卵母细胞质量具有显著的影响。     

羔山羊卵泡诱导发育及活体采卵研究

注射外源FSH诱导羔山羊卵泡发育并活体采卵,比较不同来源FSH、不同采卵间隔时间、不同重复采卵次间的实验效果.结果显示:1)用5 mg新西兰产FSH(Ovagen)处理后每只羊卵巢上平均有(18.3±3.5)个可用卵泡,较中科院产FSH效果(14.9±6.7)好.2)间隔7 d或14 d进行卵泡诱导发育及活体采卵,实验效果无显著性差异.3)羔山羊共4次用5 mg FSH(Ovagen)重复诱导卵泡发育并活体采卵,随次数增加,可用卵泡数和回收可用卵母细胞数呈下降趋势;不同重复次间卵泡直径、回收卵母细胞的可用率无显著性差异(P＞0.05).4)间隔7 d多次重复采卵过程中,平均每次采卵获可用卵8.4枚,COCs回收率和可用率分别为74.2%、78.5%;不同个体间卵母细胞回收率和可用率无显著性差异(P＞0.05).结论:新西兰产FSH(Ovagen)比中科院产FSH诱导羔山羊卵泡发育效果好;手术法活体采卵可获得稳定的卵母细胞回收率和可用率,羔山羊可以进行手术法重复活体采卵且最短采卵间隔时间宜为7 d.     

促性腺激素促进雄性小鼠体内卵巢移植体卵泡卵母细胞生长发育的研究

 【目的】探索外源促性腺激素对卵巢在雄性受体内生长、卵泡发育和卵母细胞成熟与发育能力的影响。【方法】将1日龄小鼠卵巢移植到7～12周龄雄性小鼠肾囊下,回收前用促性腺激素对受体进行处理或不处理,同龄雌性小鼠用促性腺激素进行处理后作为对照。移植21 d后回收移植卵巢,观测移植体的回收率及生长和卵泡发育;对卵母细胞进行体外成熟、体外受精,观察2-细胞胚和囊胚发育率。【结果】移植21 d后,未处理组移植体回收率为85.4%,与处理组（90.7%）差异不显著（P＞0.05）。未处理组移植体卵泡发育至成熟阶段,回收卵母细胞均处在GV期,平均每枚移植体回收卵母细胞数为（41.4±25.8）枚,2-细胞胚胎发育率为17.5%,未能发育至囊胚;处理组移植体有黄体形成,有的卵泡中有扩展的卵丘卵母细胞复合体,平均回收卵母细胞数为（33.4±20.1）枚,其中MⅡ期卵母细胞为（8.5±7.1）枚,GV期、MⅡ期卵母细胞受精后2-细胞胚胎的发育率分别为33.9％和44.3%,囊胚发育率分别为0.48%和6.3%;试验组间回收卵母细胞数差异不显著（P＞0.05）,2-细胞胚胎发育率、囊胚发育率差异极显著（P＜0.01）。试验组卵母细胞2-细胞胚胎发育率显著低于对照组（P＜0.01）,处理组MⅡ期卵母细胞囊胚发育率与对照组差异不显著（P＞0.05）。【结论】外源促性腺激素对雄性小鼠卵巢移植体具有促进卵泡发育、卵母细胞成熟和胚胎发育的作用,但不增加卵母细胞产量。     

牛卵泡微环境对颗粒细胞和卵母细胞及早期胚胎发育的影响

[目的]研究卵泡微环境对颗粒细胞与卵母细胞质量及体外受精胚胎发育的影响。[方法]从不同直径大小的卵泡中收集卵母细胞和颗粒细胞,Hoechst33342染色观察卵母细胞核形态;采用Annexin-V-FITC/PI法染色、流式细胞仪检测颗粒细胞的凋亡情况;进行受精卵体外培养,并计算受精率及受精卵的囊胚率。[结果]大卵泡（〉10 mm）和小卵泡（〈3 mm）内颗粒细胞凋亡率明显高于3～7和7～10 mm卵泡内的颗粒细胞凋亡率（P〈0.05）大卵泡和小卵泡内的大量卵母细胞呈现出染色质固缩、核碎裂及胞浆浓缩等凋亡特征。3～7和7～10 mm卵泡内的卵母细胞成熟率明显高于大卵泡和小卵泡（P〈0.05）。来源于不同直径卵泡的卵母细胞,其卵裂率和囊胚率差异均不显著。[结论]卵泡微环境是影响牛胚胎体外生产的主要环节,直径为3～10 mm卵泡内颗粒细胞质量及卵母细胞的体外成熟率较高,卵泡直径对卵母细胞受精及受精卵的早期发育没有影响。     

催乳素和牛卵泡液对胚胎体外成熟及未成熟的牛卵母细胞的影响

对催乳素和牛卵泡液在水牛卵母细胞体外成熟中的作用进行了探讨．来自屠宰场水牛卵巢的卵母细胞和卵丘细胞复合体,在含体积分数为5％CO2的培养箱中培养24～26h,然后通过体外受精测定其受精和胚胎发育能力．实验1在成熟液中添加1．0μg/mL催乳素(PRL),卵母细胞的囊胚发育比例(12．8％)比对照组(9．1％)高但不显著．实验2添加5％牛卵泡液(BFF),卵母细胞卵裂的比例明显高于对照组,但囊胚形成率则几乎一样;添加1．0μg/mL PRL和5％ BFF组卵母细胞卵裂的比例为38．1％,而发育成囊胚阶段的卵母细胞的比例为14％．试验结果表明：添加适宜浓度的BFF和PRL能促进未成熟的水牛卵母细胞体外成熟后的胚胎发育能力．     

卵泡大小及卵泡液对牛卵母细胞体外受精后发育的影响

 以屠宰场牛卵巢为材料，研究了卵泡大小和卵泡液对牛卵母细胞体外成熟、受精和培养后发育潜力的影响。试验1：按照卵泡大小将卵丘卵母细胞复合体（COCs）分为4个试验组：＞8 mm组、2～8 mm组、腔前卵泡（PF）卵母细胞组和混合（将前3种卵母细胞混合）组。结果表明，卵泡大小直接影响卵母细胞受精后的发育，同时，源自不同大小卵泡的卵母细胞混合培养，可以促进未成熟的腔前卵泡内卵母细胞的发育。试验2：将源自优势卵泡（＞8 mm）、小卵泡（2～8 mm）和混合（所有卵泡液混合）的牛卵泡液（BFF），按照10%添加到成熟培养液中，3个试验组的卵裂率和囊胚率均高于没有添加BFF的对照组(P<0.05)，但添加10%的优势卵泡液使卵母细胞和胚胎发生粘连，易于造成丢失。试验3：与未添加BFF的对照组相比，成熟培养液中分别加入10%、20%和40%的混合BFF，均可明显促进卵母细胞受精后的发育(P<0.05)，但20%组和40%组出现卵母细胞及胚胎粘连。因此，成熟培养液中添加10%的混合BFF较为适宜。     

牛活体采卵及其在体外受精中的应用

利用超声波活体采卵技术(ovumpick-up,OPU)对奶牛的活体采卵技术进行了研究,探讨活体采卵频率以及用FSH处理后对卵母细胞回收的影响,并对比了活体采卵与屠宰场采卵体外受精后胚胎的发育。结果表明:每周采2次与每周采1次可获卵母细胞数差异显著;用FSH在采卵前3d处理不发情母牛和发情母牛,发现两组平均获卵数差异不显著,且回收率和优质卵母细胞率差异不显著;活体采卵和屠宰场采卵的优质卵母细胞数和囊胚率差异显著。     

吉林梅花鹿发情期卵泡发育波研究

本研究通过直肠B超技术监测了经过2种同期发情处理（CIDR＋PG＋PMSG和1G）的9头吉林梅花鹿发情周期卵泡动态发育情况。实验得出：梅花鹿的卵泡发育均呈波形发育,1个发情周期由1—3个卵泡波组成。3个1波周期,3个2波周期,2个3波周期。1波周期的长度是5．3d±0．6d,2波周期的长度是12．3d±4．0d,3波周期的长度是25．5d±2．1d。未发情的216号梅花鹿在整个观察期中出现2个卵泡发育波,而未发情的1号鹿卵泡发育没有出现明显的波。1波周期梅花鹿的最大卵泡平均直径（5．4mm±0．5mm）,比2波周期中第1个（5．1mm±0．6mm）和第2个内波的最大卵泡平均直径（4．8mm±0．5mm）和3波周期中第2个内波的最大卵泡平均直径（5．2mm±0．4mm）都大（P〉0．05）,比3波周期中第1个和第3个内波的最大卵泡平均直径（分别是5．6mm±0．3mm和5．7mm±1．1mm）小（P〉0．05）。2波和3波周期中的所有内波的最大卵泡平均直径差异显著（P〈0．05）,2波周期中的最大卵泡比3波周期中的直径小。2波周期的内波间隔（6．0d±1．4d）比3波周期的所有内波间隔（9．8d±1．5d和5．7d±1．rid）明显短（P〉0．05）。1波周期生长持续期是4．5d±0．7d,2波周期生长持续期（4．7d±1．5d和4．0d±1．7d）和3波周期中卵泡的生长持续期（4．5d±2．1d、6．5d±2．1d和2．5d±0．7d）差异不显著（P〉0．05）。2波周期中第1波（0.5mm／d±0．3mm／d）和第2波的生长速率（0．5mm／d±0．2mm／d）没有显著差异（P〉0．05）。排卵波和闭锁内波的卵泡生长持续期也没有显著差异（P〉0．05）。     

奶牛体外受精相关影响因素分析

[目的]探讨和研究奶牛体外受精（IVF）各技术环节中一些因素,对奶牛IVF整个过程的影响。[方法]研究不同来源的卵母细胞、精液的不同处理方法、不同的培养体系,不同受精时间,受精密度对奶牛IVF的影响。[结果]屠宰场采集的卵母细胞和活体采卵收集的卵母细胞的卵裂率和囊胚发育率差异不显著;对精子分别采用percoll梯度密度离心和上浮法处理,两组的卵裂率囊胚发育率无明显差异,用SOF液和BO液体外培养,两培养体系的卵裂率和囊胚发育率均差异不显著;受精时间为8、10 h及10、12 h的囊胚发育率均差异不显著,但受精8 h的囊胚发育率显著高于受精时间12 h;受精微滴（100μl）中放置成熟的卵母细胞数（20、40个）,两组的卵裂率和囊胚发育率均下降,且差异显著。[结论]随受精时间的延长,卵裂率和囊胚发育率逐渐降低,差异不显著,但受精8 h的囊胚发育率显著高于受精12 h;受精微滴（100μl）中放置20个成熟的卵母细胞,可取得较好的体外受精效果。     

不同因素对牛卵母细胞胞质内精子注射效果的影响

采用胞质内精子注射法（ICSI）构建牛显微受精胚胎,探讨卵母细胞成熟培养时间、精子状态及精子操作液中聚乙烯吡咯烷酮（PVP）浓度对牛卵母细胞胞质内显微受精（ICSI）卵体外发育的影响。结果显示：成熟培养20 h、24 h和28 h的卵母细胞用于ICSI时,ICSI卵的形态完整率分别为94.6%（175/185）、97.2%（173/178）和96.4%（189/196）（P〉0.05）;成熟培养24 h和28 h的卵母细胞,其ICSI卵的卵裂率（73.4%和70.9%）和囊胚发育率（31.8%和29.6%）显著高于成熟培养20 h的卵母细胞（61.1%和20.6%）（P〈0.05）。对成熟培养24 h的卵母细胞注射获能精子时,ICSI卵的卵裂率和囊胚发育率（72.7%和31.4%）高于未获能精子组（69.4%和29.3%）和不运动精子组（71.5%和30.4%）,但无统计学差异（P〉0.05）。采用含5%,10%和15%PVP的精子操作液处理获能精子后对成熟培养24 h的卵母细胞进行ICSI操作,PVP浓度为5%和10%时,ICSI卵的卵裂率（73.2%和66.9%）和囊胚发育率（32.7%和29.7%）差异不显著（P〉0.05）,但二者均显著高于15%PVP浓度组的卵裂率和囊胚发育率（51.0%和16.3%）（P〈0.01）。结论认为,选用获能精子,并使用含5%PVP的精子操作液进行处理,对成熟培养24 h的牛卵母细胞进行ICSI操作,有利于ICSI卵的体外发育。     

发情期蓝狐卵泡发育的显微结构观察(英文)

[目的]对发情期蓝狐卵巢的组织结构和卵泡发育过程的变化进行研究。[方法]采集10只发情期蓝狐的左侧卵巢共计10枚,利用光学显微镜对卵巢的组织结构和卵泡的发育过程进行观察,同时利用目镜测微尺和显微照相技术分别对30个原始卵泡、30个初级卵泡、15个生长卵泡、15个囊状卵泡、15个成熟卵泡及各级卵泡中的卵母细胞进行测量和拍照。[结果]蓝狐卵巢由生殖上皮、白膜、皮质和髓质构成。皮质内分布着大量的间质细胞及不同发育阶段的卵泡,位于卵巢的外周;髓质位于皮质下层,分布着较多的血管。卵泡发育过程中,各级卵泡和卵母细胞的直径差异较大(卵泡为45.45~974.55μm,卵母细胞为30.23~147.27μm),在初级卵泡阶段出现透明带物质。卵泡闭锁发生于卵泡生长的各个时期,主要表现为卵母细胞的皱缩,细胞核固缩;颗粒细胞松散、退化。[结论]为揭示雌性蓝狐的生殖机理提供了组织学依据。     

发情期蓝狐卵泡发育的显微结构观察

[目的]对发情期蓝狐卵巢的组织结构和卵泡发育过程的变化进行研究。[方法]采集发情期蓝狐的左侧卵巢共计10枚,利用光学显微镜对卵巢的组织结构和卵泡的发育过程进行观察,同时利用目镜测微尺和显微照相技术分别对30个原始卵泡3、0个初级卵泡、15个生长卵泡、15个囊状卵泡、15个成熟卵泡及各级卵泡中的卵母细胞进行测量和拍照。[结果]蓝狐卵巢由生殖上皮、白膜、皮质和髓质构成。皮质内分布着大量的间质细胞及不同发育阶段的卵泡,位于卵巢的外周;髓质位于皮质下层,分布着较多的血管。卵泡发育过程中,各级卵泡和卵母细胞的直径差异较大（卵泡为45.45～974.55μm,卵母细胞为30.23～147.27μm）,在初级卵泡阶段出现透明带物质。卵泡闭锁发生于卵泡生长的各个时期,主要表现为卵母细胞的皱缩,细胞核固缩;颗粒细胞松散、退化。[结论]为揭示雌性蓝狐的生殖机理提供了组织学依据。     

Study on Development of Northeast China Fine-fleece Sheep Fetal Follicles

Research on development of fetal ovary was traced to late 70 s. Histological study on fetal horse ovarian germinal epithelium was conducted[1], followed research on germcell proliferation was carried out[2]. In the late 80s,development of 37-118 dfetalrhesus ovaries were studied through continuous ultrathin sec-tion [3]. Histological study on late fetal rhesus ovaries were conducted [4]. It was believed that fetal ovaries had ability to biosynthesis estrogen and response to gonadotrophin after…     

PI3K信号通路关键基因在猪卵泡发育中的表达规律

【目的】研究不同时期猪卵巢卵泡发生的形态特征及磷脂酰肌醇3–激酶(Phosphoinositide 3-kinase,PI3K)信号通路关键基因在卵泡发生发育中的作用。【方法】通过HE染色观察12日龄、30日龄、70日龄、20月龄卵泡期及黄体期、48月龄的长大二元母猪卵巢卵泡发育的形态变化,应用实时荧光定量PCR检测PI3K通路关键基因在这些时期的表达规律,并通过Western blot法检测PI3K通路重要的下游效应因子p-rpS6在不同时期猪卵巢的表达情况。【结果】12日龄母猪卵巢皮质边缘有大量的原始卵泡,皮质与髓质交界处可见少量初级卵泡及个别的次级卵泡;30日龄母猪卵巢次级卵泡数量增加;70日龄出现3级卵泡;20月龄卵泡期、黄体期分别有大量成熟卵泡、大体积的黄体;48月龄较难观察到原始卵泡。PI3K通路抑制因子PTEN、TSC1、TSC2与激活因子PDK1、AKT1、mTOR的mRNA均在12日龄表达量最高,70日龄、48月龄表达量次之,30日龄和20月龄表达量最低;下游效应基因rpS6的mRNA 30日龄表达量最高,20和48月龄表达量最低,p-rpS6蛋白在12日龄、20月龄、48月龄母猪卵巢高表达,在30日龄、70日龄中几乎不表达。【结论】PI3K通路关键基因在不同时期母猪卵巢中的表达水平不同,说明该通路参与了猪卵泡的早期发生及卵泡成熟的调控过程。     

牛不同生长发育时期卵泡AKP酶与G-6-P酶的活性变化

用组织化学方法观察了AKP酶(碱性磷酸酶)和G-6-P酶(葡萄糖-6-磷酸酶)在牛各生长发育时期卵泡的活性变化.结果表明:不同发育时期的卵泡数量与AKP酶和G-6-P酶活性反应阳性之关系极为显著,其中有腔卵泡的酶活性反应显示之数量多于腔前卵泡;但G-6-P酶活性反应之阴性卵泡显著多于阳性卵泡.AKP酶活性强于G-6-P酶.腔前卵泡酶活性位置显示之主要在颗粒细胞和卵母细胞上,而有腔卵泡酶活性位置则主要在内膜细胞上.     

南阳牛卵泡卵母细胞体外成熟培养的研究

［目的］研究南阳牛卵泡卵母细胞的体外成熟培养技术。［方法］以南阳牛卵泡卵母细胞为材料,分别在成熟培养液中添加不同激素（E2、FSH＋LH＋E2、PMSG＋hCG＋E2）、不同血清（0.6%BSA、10%FCS、10%OCS）和牛卵泡液（10%、20%和30%bFF）后对其进行体外成熟培养,研究不同处理对其体外成熟状况及发育潜力的影响。［结果］在激素添加试验中,添加FSH＋LH＋E2的效果最好,卵母细胞的成熟率及卵裂率（72.5%,52.6%）显著高于添加E2（47.5%,35.4%）组;在血清添加试验中,添加10%OCS的效果最好,卵母细胞的成熟率（73.3%）显著高于添加BSA组（51.7%）;在卵泡液添加试验中,卵母细胞的成熟率及卵裂率随卵泡液浓度的增加而降低,成熟培养液中添加10%bFF可取得与添加10%FCS相似的效果。［结论］该研究为牛卵泡卵母细胞的体外成熟培养提供了参考。     

Study on features of female fetal reproductive system development in Chinese northeast fine-wool sheep

Some charaterasics of female fetal reproductive system were studied in different gestation phases of Chinese northeast fine-wool sheep.The results showed that reproductive system consisted of ovary,oviduct,uterus and genitalia.The fetal ovaries were granular in early phase and became elliptic in later phase.The functional formula of ovarian weight,length and volume was obtained. Primary oocyte was encapsulated by monolayer cells in 7-week fetal ovary cortex.Primordial follicles were formed in 8-week fetal ovary,the follicular cells were sporadically arranged and not always regular.Complete organization of primordial follicles appeared until 10-week gestation,most of them scattered in nests in the following weeks of gestation.Two types of follicular complexes were found in fetal.There were continuous and quick mitosis of oogonia in fetal ovaries,large complexes were formed by oogoniaes encapsulated by multilayer of follicular cells,then they differentiated into small complexes,one or more primary oocytes were formed by mitosis of oogonia,primordial follicles which were caused by follicular cell approaching into them developed.