IFN-γ在大鼠脾脏内的定位研究

观察大鼠脾脏内IFN-γ免疫反应产物的特征与分布。应用免疫组织化学链酶菌抗生素蛋白-过氧化物酶法(Streptavidin-perosidase,SP法),结合葡萄糖氧化酶-DAB-硫酸镍胺呈色。IFN-γ反应产物在大鼠脾脏的小梁、白髓、红髓和边缘区均有分布,证明了脾脏内存在IFN-γ,为“免疫-神经-内分泌网络”提供了形态学依据。     

IFN-Y在大鼠海马内的免疫组化定位

应用免疫组织化学SP法结合葡萄糖氧化酶-DAB-硫酸镍铵呈色法研究IFN-Y免疫反应性产物在大鼠海马内的分布。结果表明,IFN-Y免疫反应主要分布于海马CAl、CA2、CA3区,有少量分布于灰被,齿状回。这为海马具有免疫调节功能的观点提供了新的证据。结合文献,推断IFN-Y在海马-下丘脑-垂体-肾上腺的免疫调控中起主要作用。     

IFN-γ在大鼠胸段脊髓内的分布

为进一步探讨免疫 -神经 -内分泌三大系统之间的关系 ,用免疫组织化学 SP法 ,对大鼠胸段脊髓内 IFN-γ样免疫反应产物的分布进行了研究。结果表明 ,IFN-γ样免疫反应产物广泛分布于胸段脊髓各板层。其中背角 、 、 层 ,胸髓中间带外侧核 ,腹角 层内可见到较高密度的阳性胞体和树突。中间带和腹角内的阳性胞体的树突还伸向外侧索和腹索 ,有时可达脊髓边缘     

应用免疫组织化学法研究γ-干扰素在大鼠室管膜中的定位分布

用免疫组织化学 SP法结合葡萄糖氧化酶 - DAB-硫酸镍铵呈色法 ,对正常成年大鼠室管膜上 IFN- γ的特征和分布进行了研究。结果表明 :IFN- γ免疫反应阳性细胞分布于大鼠侧脑室壁、第三脑室壁、中脑导水管、第四脑室壁的室管膜中。其中侧脑室、第三脑室、第四脑室壁上存在有伸长细胞 ,发出基突伸向周围灰质。提示 IFN-γ可能作为一种新的脑神经肽存在于室管膜中 ,参与脑 -脑脊液回路的调节     

IFN-γ在流产大鼠下丘脑的表达

为了探讨下丘脑对妊娠的调节作用,采用免疫组织化学SP法研究了妊娠中期,正常妊娠大鼠及流产大鼠下丘脑内IFN-γ阳性神经元的形态与分布,同时利用图像分析软件测定了其灰度值。结果显示,正常妊娠大鼠和流产大鼠IFN-γ主要在下丘脑的视前大细胞核、室旁核、视上核、下丘脑前核等部位分布,而流产大鼠的IFN-γ阳性细胞数多于正常妊娠组且表达强于正常妊娠组。表明IFN-γ在下丘脑的表达对妊娠大鼠的神经内分泌调节有重要影响。     

甲低大鼠垂体前叶内IFN-γ样免疫反应阳性物质的表达

应用免疫组织化学(SP)法结合H2O2-DAB黄色呈色法进行显色。IFN-γ样免疫反应阳性物质位于细胞的胞浆内,其阳性细胞只分布于垂体前叶,而后叶和中间部未见免疫反应阳性物质;对照组均未发现免疫反应阳性细胞。甲状腺素低下可以诱导大鼠垂体前叶内IFN-γ样免疫阳性物质的表达,提示甲状腺素低下会影响垂体前叶的内分泌功能。     

鸵鸟小肠中IFN-γ的随龄性表达

为探讨γ-干扰素(IFN-γ)与鸵鸟小肠发育及小肠黏膜免疫的关系,运用免疫组织化学SP法分别对3日龄、3周龄和11月龄鸵鸟小肠中IFN-γ的表达进行研究。结果表明,IFN-γ免疫阳性细胞主要分布于肠上皮间淋巴细胞,在绒毛和肠腺的上皮细胞及杯状细胞内也有阳性产物表达,黏膜固有层的IFN-γ阳性细胞集群分布或沿血管周围密集排布,肌层和肌间存在大量梭形的阳性细胞和串珠状的阳性纤维;IFN-γ阳性产物的相对表达量随着年龄的增长而增加,3日龄和3周龄表达差异不显著(P0.05),11月龄与3周龄鸵鸟表达差异显著(P0.05);不同肠段IFN-γ阳性产物的相对表达量均表现为自十二指肠至空肠的递减趋势,其中3日龄、3周龄鸵鸟各段小肠中差异不显著(P0.05),11月龄鸵鸟空肠中IFN-γ阳性产物的相对表达量较十二指肠显著降低(P0.05),回肠与空肠相比亦显著降低(P0.05)。表明IFN-γ通过多种途径参与鸵鸟小肠的发育和黏膜免疫。     

Leptin长型受体在大鼠听觉核团中的免疫组化定位

采用免疫组织化学SP法,对leptin长型受体(LR-b)在大鼠听觉核团中分布进行了定位研究.结果表明,在大鼠的耳蜗神经核、上橄榄核、外侧丘系核、下丘、内侧膝状体和听皮质中均有LR阳性神经元的分布.推测,leptin作用于听觉传导通路相关核团中的神经元,可能与维持大鼠正常的听觉功能有关.     

Leptin长型受体在大鼠听觉核团中的免疫组化定位

采用免疫组织化学SP法,对leptin长型受体(LR-b)在大鼠听觉核团中分布进行了定位研究.结果表明,在大鼠的耳蜗神经核、上橄榄核、外侧丘系核、下丘、内侧膝状体和听皮质中均有LR阳性神经元的分布.推测,leptin作用于听觉传导通路相关核团中的神经元,可能与维持大鼠正常的听觉功能有关.     

怀孕期山羊腺垂体中IFN-α和IFN-γ的表达研究

【目的】研究α-干扰素(IFN-α)和γ-干扰素(IFN-γ)在怀孕前期(怀孕1～30d)、中期(怀孕31～120d)、后期(怀孕121～150d)山羊腺垂体中的分布及表达量的变化特点。【方法】以怀孕前、中、后期的山羊为试验动物,放血致死后采取其腺垂体制备切片,采用免疫组织化学SP法分别对怀孕前、中、后期山羊腺垂体内IFN-α、IFN-γ阳性细胞的分布及表达变化进行研究。【结果】2种干扰素阳性物质主要分布于腺垂体嗜酸性细胞、嗜碱性细胞和嫌色细胞中。不同怀孕期,IFN-α和IFN-γ的分布存在明显差异,前期和后期表达量较高,中期明显降低;在前、中、后各个怀孕时期,IFN-α的相对表达量均比IFN-γ多,在后期更为明显。【结论】IFN-α和IFN-γ在山羊腺垂体中的表达量因怀孕时期的不同而存在明显差异,其可能在不同怀孕时期发挥作用或相互协同调节垂体激素的合成与分泌,参与动物生殖的调节。     

抗牛IFN-γ单克隆抗体的制备与鉴定

试验以纯化的rHis-BoIFN-γ蛋白为免疫原免疫4～6周龄BALB/c鼠,3次免疫后,取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,用纯化的rGST-BoIFN-γ作为检测抗原,以间接ELISA和有限稀释法进行筛选,并初步鉴定其生物学特性。结果表明,试验共获得4株能稳定分泌抗rBoIFN-γ单克隆抗体的杂交瘤细胞株。抗体亚类均为IgM,轻链为κ链;其中腹水效价2株均达到5×104以上;通过Western blot结果表明,4株单抗均可特异性的结合rGST-BoIFN-γ蛋白,而不与GST标签蛋白反应。间接ELISA试验证明,4株单抗只与rBoIFN-γ反应,而不与GST蛋白和rGoIFN-α、rGoIFN-γ、rBoIFN-α等细胞因子发生交叉反应。通过间接免疫荧光显示,4株单抗均与真核细胞BHK21表达的rBoIFN-γ反应产生强荧光反应,证明了单抗能够与接近天然的BoIFN-γ反应,证实了单抗的特异性。阻断ELISA检测结果表明,3D10株单抗能够与牛外周血诱导产生的天然干扰素发生反应,证实了该单抗具有实际的应用价值。     

IFN-γ在不同生殖周期奶山羊卵巢中的表达

应用免疫组织化学SP法检测γ-干扰素(Interferon-γ,IFN-γ)在不同生殖周期奶山羊卵巢中的表达情况,探讨IFN-γ的变化规律及其与生殖的关系。结果显示,在间情期三级卵泡颗粒细胞胞膜、发情期三级卵泡和成熟卵泡颗粒细胞、妊娠期卵泡颗粒细胞、妊娠7周粒黄体细胞、妊娠12,16和20周膜黄体细胞胞核中均有IFN-γ的表达;在三级卵泡和成熟卵泡的卵泡液中也有IFN-γ的表达;妊娠12,16和20周粒黄体细胞上IFN-γ表达量很低。IFN-γ可能在不同类型的细胞上发挥着不同的作用。     

IFN—γ在大鼠胸段脊髓内的分布

为进一步探讨免疫－神经－内分泌三大系统之间的关系，用免疫组织化学SP法，对大鼠胸段脊髓内IFN－γ样免疫反应产物的分布进行了研究，结果表明，IFN－γ样免疫反应产物广泛分布于胸段脊髓各板层，其中背角Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ层，胸髓中间带外侧核，腹角Ⅺ层内可见珐较高密度的阳性胞体和树突，中间带和腹角内的阳性胞体的树突还伸负外侧索和腹索，有时可达脊髓边缘。     

应用免疫组织化学法研究γ—干扰素在大鼠室管膜中的定位分布

用免疫组织化学SP法结合葡萄糖氧化酶－DAB－硫酸镍铵呈色法，对正常成年大鼠室管膜上IFN－γ的特征和分布进行了研究，结果表明，IFN－γ免疫反应阳性细胞分布于大鼠侧脑室壁，第三脑室壁，中脑导水管，第四脑室壁的室管膜中，其中侧脑室，第三脑室，第四脑室壁上存在有伸长细胞，发出其突伸向周围灰质，提示IFN－γ可能作为一种新的脑神经肽存在于室管膜中，参与脑－脑脊液回路的调节。γ     

川芎嗪联合IFN-γ对哮喘大鼠GATA-3、IL-4和IL-5的影响

目的观察川芎嗪联合γ-干扰素(IFN-γ)对哮喘大鼠转录因子GATA-3、白介素-4(IL-4)和白介素-5(IL-5)影响。方法50只健康SD大鼠,随机分为健康对照组、空白对照组、川芎嗪组、IFN-γ组和川芎嗪 IFN-γ组。每组10只;除空白组10只外,余均制作哮喘大鼠模型,哮喘激发前分别给予生理盐水、川芎嗪、IFN-γ和川芎嗪 IFN-γ。检测支气管肺泡灌洗液细胞总数和分类I、L-4I、L-5含量、肺组织中GATA-3的表达情况的变化。结果(1)空白对照组中BALF上清液中细胞总数明显增多,嗜酸性粒细胞数量上升;川芎嗪 IFN组细胞数量下降,嗜酸性粒细胞比例下降明显,与川芎嗪或IFN组比较有统计学意义(P<0.05)。(2)空白对照组中IL-4和IL-5明显增多,与健康对照组组比较有统计学意义(P<0.01);川芎嗪 IFN-γ组IL-4和IL-5下降明显,与川芎嗪或IFN-γ组比较有统计学意义(P<0.05)。(3)空白对照组支气管管壁较健康对照组增厚,川芎嗪 IFN-γ组与川芎嗪组、IFN组比较有统计学意义(P<0.05)。4 GATA-3免疫组化结果:空白对照组气道和肺组织有GATA-3表达,川芎嗪和IFN-γ组可见部分GATA-3表达,川芎嗪 IFN-γ组基本无表达或仅见很弱的GATA-3表达。结论川芎嗪联合IFN-γ能抑制哮喘大鼠GATA-3表达,降低IL-4和IL-5含量,减轻支气管管壁炎症反应。     

猪瘟疫苗免疫后IFN-γ水平的检测

［目的］通过检测猪瘟疫苗免疫后的IFNγ水平探讨仔猪细胞免疫情况。［方法］采用超前免疫和普通免疫2种方法对仔猪进行猪瘟免疫,用流式细胞仪对猪瘟疫苗免疫后仔猪外周血单核细胞（PBMC）中分泌IFNγ细胞数量进行检测。［结果］无论采取哪一种方法进行免疫,仔猪PBMC中分泌IFNγ细胞的比例均显著增多,且一直维持在较高的水平。当在60日龄仔猪进行第2次免疫后分泌时,IFNγ细胞的比例增加更为明显,而对照组仔猪分泌IFNγ细胞的比例在试验过程中则一直维持较低的水平,这说明猪瘟疫苗能够诱导仔猪体内IFNγ水平升高,间接表明猪瘟疫苗注射后激发了机体的细胞免疫应答。［结论］与普通免疫方法相比,采用超前免疫方法能够使仔猪及早地产生针对猪瘟的细胞免疫反应。     

下丘脑IFN-γR和ER免疫组化双标技术探索

[目的]选出一种提高下丘脑中雌激素受体(ER)和γ-干扰素受体(IFN-γR)免疫组化双标阳性检出率和染色强度的方法。[方法]用MaxVision法对大鼠下丘脑冰冻切片和石蜡切片分别进行IFN-γR和ER免疫组化双标染色,其中石蜡切片进行抗原微波修复。[结果]下丘脑石蜡切片抗原微波修复后IFN-γR和ER阳性检出率较冰冻切片有明显提高,且双标着色对比鲜明,易于镜下观察。[结论]下丘脑IFN-γR和ER免疫组化双标染色宜选用石蜡切片并进行微波修复,能提高双标阳性率,且显色强,值得推广。     

多浪羊IFN-γ基因克隆及核苷酸序列分析

为了分析新疆多浪羊的IFN-γ基因,根据GenBank中NM_001009803的mRNA序列设计引物,以新疆多浪羊淋巴细胞的总RNA为模板,用RT-PCR扩增多浪羊IFN-γ基因序列。测序结果表明I,FN-γ基因序列包含了一个582 bp的开放阅读框,通过GenBank中的Blastn序列比较分析,多浪羊的IFN-γ基因与普通绵羊的同源性高达99.82%,为多浪羊IFN-γ的功能研究及多浪羊免疫应答基因的筛选奠定基础。     

PRRSV感染不同时期IFN-γ表达量分析

以猪干扰素γ为研究对象,采用实时荧光定量PCR及ELISA的方法分析在PRRSV感染不同时期猪体内γ干扰素的基因相对表达量及蛋白表达量的变化情况,结果表明:在PRRSV感染后5、7、10 d IFN-γ基因相对表达量都有升高表现。而1-3 d没有明显变化;通过ELISA方法对血清中IFN-γ蛋白表达量进行测定,发现接毒试验组的猪血液中IFN-γ蛋白表达量在接毒后的1-3 d内低于正常对照组,5 d后明显升高且高于正常对照组,7 d时达到最高峰。采用荧光定量相对定量方法测定接毒后猪血液中IFN-γ蛋白表达量,发现接毒试验组的猪血液中IFN-γ蛋白表达量与正常对照组相比,在1-3 d无显著差异,于5 d后明显升高,10 d时达到最高,14 d时快速下降至与正常对照组无显著差异。     

IFN-γ在怀孕早期山羊下丘脑-垂体-性腺轴的表达

为了探讨γ-干扰素(in terferon-,γIFN-γ)在下丘脑-垂体-性腺轴(hypotha lam ic-p itu itary-gonada lax is,HPG轴)中的免疫调节作用,应用免疫组织化学SP法对IFN-γ免疫反应阳性产物在怀孕早期山羊HPG轴的分布特点进行了研究。结果显示,IFN-γ分布于乳头体内侧核、视前内侧核、下丘脑前区、腹内侧核、连接核、室旁核、视上核等20个核团中,各部分核团细胞着色程度深浅不一;在视上核、室旁核分泌部、乳头体内侧核等有大量的阳性神经纤维;同时在室周核、视前外侧核、视前内侧核等13个核团中散布有一些阳性星形胶质细胞,与阳性神经细胞交错共存;腺垂体中腺细胞和神经垂体中神经纤维均有IFN-γ表达;卵泡和黄体中也有IFN-γ存在。表明IFN-γ与动物的神经内分泌活动关系密切,参与了免疫-神经-内分泌网络中的生殖免疫调节。