日本鹌鹑艾美尔球虫人工感染试验及内生发育研究

为研究日本鹌鹑艾美尔球虫(Eimeria uzura)内生发育过程及致病性,人工接种8日龄鹌鹑1.0×105个日本鹌鹑艾美尔球虫孢子化卵囊。研究结果发现,日本鹌鹑艾美尔球虫在鹌鹑体内潜隐期为5 d,显露期为13 d,发病率为70.3%,死亡率为7.5%,增重明显受到影响.组织切片观察发现,日本鹌鹑艾美尔球虫主要寄生于鹌鹑十二指肠和空肠前段,内生发育过程经三代裂殖生殖阶段和一个配子生殖阶段,接种后102 h达到裂殖生殖阶段高峰期,接种后114 h达到配子生殖阶段高峰期,感染后120 h形成卵囊;所有内生阶段均在肠上皮细胞内发育。日本鹌鹑艾美尔球虫寄生可引起鹌鹑十二指肠上皮细胞发生轻度颗粒变性、坏死,黏膜固有层有大量炎性细胞浸润,充血出血.试验结果表明,日本鹌鹑艾美尔球虫对鹌鹑有中等致病性。     

鹌鹑球虫病的防治

鹌鹑球虫病是由艾尔美属的各种球虫寄生于鹑的畅道引起的一种急性流行性原虫病。以15-30日龄的雏鹑易感，主要通过食入球虫卵囊而感染。幼鹑感染后，可表现出明显的临床症状和急性经过，可造成大批鹌鹑死亡，带来较大的损失。     

柯氏艾美耳球虫发育史的研究

柯氏艾美耳球虫的内生发育包括２代无性繁殖和１代有性繁殖,第１代裂殖生殖阶段的时间为感染后至４８ｈ,第２代裂殖生殖阶段的时间为感染后４８￣８４ｈ,配子生殖阶段始于感染后７６ｈ。感染后９０￣１３８ｈ在肠绒毛中发现成熟的配子体,感染后９６ｈ在回肠肠腺中发现卵囊,至１３８ｈ仍可见。最短孢子化时间为９￣１２ｈ。柯氏艾美耳球虫的宿主特异性强,不感染虎皮鹦鹉、八哥、鹌鹑和雏鸡。     

转基因柔嫩艾美耳球虫对生态环境的影响

【目的】从表达M2e-EYFP融合蛋白转基因柔嫩艾美耳球虫的稳定性,及其在环境中的传播能力、竞争能力和存活能力方面,分析转基因球虫对生态环境的潜在风险。【方法】稳定性试验包括:转基因球虫感染非靶动物,观察临床症状和卵囊产出情况;转基因球虫继代繁殖,检测荧光率;转基因球虫与毒害艾美耳球虫混合感染,PCR检测卵囊中的外源基因。传播能力试验主要是分析感染鸡和不感染同居鸡的卵囊产量和荧光率。竞争性试验则是用不同混合比例的2种球虫感染鸡,检测卵囊产量和荧光率;存活能力试验是用不同处理方式的卵囊感染鸡,检测卵囊是否产出以分析卵囊存活能力。【结果】转基因球虫不感染小鼠和家鸽,与野生型柔嫩艾美耳球虫宿主特异性相同;连续繁殖传17代后外源基因稳定表达。与毒害艾美耳球虫混合寄生时在异种球虫体内未检测出外源基因。传播能力试验中,46d攻毒时转基因球虫感染与不感染同居组的卵囊产量差异不显著,但与不感染对照组相比均显著减少,且1∶1感染和不感染同居组卵囊荧光率检测结果维持在51.6%67.9%。竟争性试验中,攻毒时各比例感染组卵囊产量均极显著少于不感染攻毒对照组,荧光率检测结果各比例组变化幅动不大,且1∶1组哨兵鸡卵囊荧光率检测结果为41.2%61%。存活能力试验,转基因球虫与野生型球虫在夏季室温条件下均不能存活90d,且与其他不同方式处理的卵囊外界存活时间接近。【结论】说明转基因球虫具有良好的稳定性,在环境中的传播能力、竞争能力和存活能力未呈现显著优于野生球虫的趋势。     

鹌鹑球虫病的症状与防治

鹌鹑球虫病是危害幼鹑的一种急性原虫病,尤以2～10周龄的鹌鹑最易感染。平养鹌鹑的感染机会多于笼养鹌鹑,若发现病情较晚或治疗不当,常会引起大批死亡。球虫大多寄生在鹌鹑小肠,以前段小肠为多;寄生在盲肠和直肠较少,以盲肠球虫致病力最强。1.症状鹌鹑球虫病可分急性和慢性两种,急性型病程为数天到2～3周。病鹑精神萎顿,羽毛蓬松,呆立一角,食欲减退,肛门周围羽毛被带     

河南省鹌鹑肠道寄生虫感染情况调查

为了解鹌鹑肠道寄生虫感染情况,采用饱和蔗糖溶液漂浮法对河南省12个鹌鹑养殖场共711份粪便样品进行检查。结果表明,在鹌鹑体内发现4种肠道寄生虫,寄生虫总感染率达99.2%,其中8个养殖场的寄生虫感染率均为100%。球虫为主要感染虫种,感染率为99.2%,隐孢子虫、圆线虫和蛔虫感染率分别为6.0%、16.0%和1.1%;2～3种寄生虫混合感染率为20.1%。分析表明,鹌鹑肠道寄生虫感染较为严重,应加强其寄生虫病的防治工作。     

张家口部分兔场球虫感染情况调查及形态学观察

试验采用球虫卵囊粪便检查法对张家口市规模较大的3个兔场共900多个粪样进行检查。结果表明,幼兔球虫平均感染率为93.3%、感染强度(每克粪便中的卵囊数,OPG)范围为100～333400;青年兔球虫平均感染率为77.7%、感染强度范围为66～22000,种兔球虫平均感染率为85.7%,感染强度范围为100～28200;共鉴定出10个虫种,分别为斯氏艾美耳球虫、大型艾美耳球虫、肠艾美耳球虫、无残艾美耳球虫、中型艾美耳球虫、微小艾美耳球虫、梨形艾美耳球虫、黄艾美耳球虫、盲肠艾美耳球虫、穿孔艾美耳球虫。为有效防治兔球虫病提供了试验依据。     

泗县黄牛球虫种类及感染情况的调查

本文报道了泗县黄牛球虫种类及其感染情况。泗县黄牛球虫种类计11种,即牛艾美尔球虫、邱氏艾美尔球虫、亚球艾美尔球虫、奥搏艾美尔球虫、椭圆艾美尔球虫、柱状艾美尔球虫、怀俄明艾美尔球虫、加拿大艾美尔球虫、拨克朗艾美尔球虫、阿拉巴艾美尔球虫和一种艾美尔属球虫未定种,均为安徽省首次报道。泗县黄牛球虫感染率为57.83%。其中1岁以内的犊牛感染率为64.77%;成年牛感染率为36.96%。此外,本文还对各种球虫卵囊的形态进行了描述、绘图,对各种球虫的感染率、优势虫种和混合感染等情况进行了详细记述。     

鸡柔嫩艾美耳球虫单卵囊分离技术的构建及致病性研究

构建了一种新的鸡柔嫩艾美耳球虫单卵囊分离技术 ,并对杨陵柔嫩艾美耳球虫地理株进行了分离 ,对继代增殖的纯种卵囊进行了致病性试验。结果表明 ,该单卵囊分离技术简单易行 ,单卵囊感染成功率可达4 0 % ;该虫株对雏鸡有很强的致病性 ,经口接种 1× 10 5个孢子化卵囊 ,致死率高达 80 %。     

杭州地区鸡球虫种类研究

对杭州地区的杭州市区、桐庐及建德等地的大型鸡场及个体养鸡场球虫感染情况进行了调查，通过对球虫卵囊的分离、培养，孢子生殖阶段虫体的形态观察，卵囊、孢子囊大小及卵囊孢子化时间的测定，初步将卵囊分为A型、B型、C型三种类型。分别用这三种卵囊接种雏鸡纯繁后，收集的卵囊人工感染15日龄的小鸡，观察并记录接种后的发病时间，症状及病理变化等，参照有关文献，鉴定球虫种类。经分析判定，杭州地区主要存在3个种，它们分别是柔嫩艾美耳球虫（Eimeria tenella)，毒害艾美耳球虫（E.necatrix)和巨型艾美耳球虫（E.maxima)。     

鸡柔嫩艾美耳球虫西宁株的分离与鉴定

[目的]鉴定鸡柔嫩艾美耳球虫西宁株。[方法]采用单卵囊分离技术从西宁当地鸡粪便中获得1株纯种球虫,经鸡体传代增殖,对该虫体的寄生部位、潜伏期、孢子化时间、形态结构等指标进行观察和测定。[结果]该虫株寄生于鸡的盲肠,卵形指数为1．22,最短孢子化时间为18h,潜伏期为114h。卵囊为卵圆形,卵囊壁光滑,呈黄绿色,孢子化卵囊未见卵膜孔和卵囊残体;孢子化卵囊平均为20．08μm×16．55μm。孢子囊纺锤形,有一斯氏体,其平均大小为8．65μm×4．90μm。综合鉴定该球虫为柔嫩艾美耳球虫,并暂命名为柔嫩史美耳球虫西宁株。[结论]该研究为进一步研究球虫的致病性和药物效应奠定了基础。     

安徽部分地区鸡柔嫩艾美耳球虫单卵囊的分离与鉴定

为获得纯种柔嫩艾美耳球虫虫株,从安徽省巢湖市、霍邱县、定远县3个地区患球虫病的鸡场采集3株混合球虫,培养至孢子化,分离单卵囊接种1～7日龄的雏鸡,感染后7～12 d,收集卵囊,然后通过生物学特性和PCR方法进行虫种鉴定。结果显示,3个地区的单卵囊感染成功率分别为50%、57%和29%,各虫株经生物学特性和PCR鉴定均为柔嫩艾美耳球虫。研究表明:1.0%琼脂单卵囊分离法简便且成功率较高,利用特异性引物PCR鉴定虫株,为纯种地方株的研究奠定了基础。     

肠艾美尔球虫单卵囊分离及ITS-1序列测定

[目的]建立一种有效的鉴定球虫种类分子生物学方法。[方法]采用单卵囊分离技术,分离肠艾美尔球虫,提取卵囊基因组DNA。根据GenBank中发表的艾美尔属球虫18SrDNA和5.8SrDNA序列,设计特异性引物,扩增内转录间隔区1（ITS-1）,PCR产物直接测序。[结果]成功分离出肠艾美尔球虫,PCR扩增出434bp清晰条带,且最低能检测出27个孢子化卵囊。[结论]该研究结果为球虫虫种及虫株的准确鉴定奠定了基础。     

鸡柔嫩艾美耳球虫单卵囊分离技术的建立

以玻璃纸做材料,用单卵囊分离技术,对柔嫩艾美耳球虫进行了分离,实验室单卵囊感染26只鸡,在感染后5～12d,用饱和盐水漂浮集卵法进行检测,其中10只鸡检出卵囊,结果表明,该单卵囊分离技术简单易行,单卵囊感染成功率达38%,单卵囊技术的关键步骤为:(1)滴管拉的尽量细,(2)滴液尽量小,(3)要耐心观察,(4)实验鸡在0～7日龄。     

离体条件下球虫卵囊子孢子囊的释放

利用柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)为试验虫株,盖玻片、载玻片为实验材料,用拇指适当施加压力时,在400倍的光学显微镜下,观察了柔嫩艾美耳球虫卵囊破裂和子孢子囊释放的过程,结果发现,卵囊在适当压力的作用下,在卵囊一端发生破裂,随后子孢子囊逐个从破裂口处溢出,溢出后的子孢子囊内含有2个子孢子,说明球虫卵囊虽然对常规的消毒剂抵抗力很强,但是在鸡的消化道内,尤其在肌胃内球虫卵囊很容易破裂而释放子孢子囊。     

纯种柔嫩艾美耳球虫的分离培养

用琼脂滴稀释法,对4株柔嫩艾美耳球虫进行单卵囊分离,每株各感染5日龄罗曼公雏5只,结果感染成功率分别为60%,40%,20%,20%,总的成功率为35%,能基本满足后续试验的需要。     

柔嫩艾美耳球虫卵囊形成的超微结构

对柔嫩艾美耳球虫卵囊形成的超微结构进行了观察。大配子体系由末代裂殖子侵入盲肠上皮细胞后,长大变圆而形成。大配子体发育、大配子形成、受精、卵囊形成均在带虫空泡内进行,大配子体发育过程的早期,微线、棒状体、椎体、极环等组成的顶复合器消失,随之,首先在大配子体内部形成大量的成囊体 2,成囊体 2有电子稀疏的杆状结构组成,成囊体 2为圆形,外被一层单位膜,结构比较明显,但表面不光滑;成囊体 1较成囊体 2形成晚,其组成成分电子结构十分致密,它也呈圆形,而且表面十分光滑,外被一层不明显的膜;在成囊体形成的同时,支链淀粉和脂肪体也逐渐形成;大配子体和大配子外被单位膜,中央有一个细胞核,核仁不十分明显。卵囊壁形成起始于大配子受精以后,成囊体移向被膜,并且集中于被膜下,首先,成囊体 1解聚,在被膜下形成一层卵囊壁,随后,成囊体 2解聚形成又一层卵囊壁,最后,在内部的合子膜形成第五层囊壁,卵囊形成以后,细胞核位于细胞中央,细胞内有大量的支链淀粉和脂肪体     

毒害艾美耳球虫早熟株致病性与繁殖力的研究

为选育制备弱毒疫苗所需的毒害艾美耳球虫(E.necatrix)早熟株,以临床表现、平均增重、相对增重率、小肠病变记分、血便记分、死亡率、每克粪便中的卵囊数(OPG)、卵囊总产量和每个卵囊的繁殖能力为指标,研究了E.necatrix早熟株与亲本株的致病性和繁殖力。结果表明该早熟株与其亲本株相比,早熟株的致病性降低了,接种相同剂量时早熟株平均增重、相对增重率高于亲本株,病变记分、血便记分和死亡率均低于亲本株;早熟株产卵高峰提前,繁殖力下降至亲本株的55%左右,符合球虫早熟疫苗株的特性。     

11株巨型艾美耳球虫的免疫原性分析

用平均增重和病变记分或卵囊减少率等为试验指标,对11株巨型艾美耳球虫的免疫原性进行了分析。结果显示,各虫株每鸡免疫感染100个卵囊后,不仅对攻击1×105个同源株卵囊均产生大于70%的病变记分降低率,而且使每鸡攻击1×104个同源株卵囊时的卵囊产量均减少97.42%以上,在各虫株间无显著差异。各虫株对异源株的交叉免疫力程度不一致,美国株对国内10个虫株的卵囊减少率为20.09%~82.44%,仅3株大于75%,而国内10个虫株对美国株的卵囊减少率为27.43%~95.26%,有5株大于75%;扬州株、南通株、凤阳株、龙岩株、广州株和上海株间的相互卵囊减少率为-1.72%~96.67%,其中南通株对扬州株、凤阳株、龙岩株、广州株和上海株的卵囊减少率均大于75%,上海株对扬州株、南通株、凤阳株与广州株的卵囊减少率为-1.72%~57.69%。     

Toxoplasma gondii: the oocyst, sporozoite, and infection of cultured cells

The infective form of Toxoplasma gondii fouind in cat feces is an oocyst wihich, when sporutlated, resembles that of the genus Isospora in havinig two sporocysts. Sporozoites obtained by artificial excystation of the oocyst are infective for monkey kidney cell cultures. Ultrastructural characteristics of sporozoites resemble those seen previously in proliferative stages of Toxoplasma gondii.