几种热带作物白粉菌寄主范围研究

研究了橡胶，芒果，大丽，大叶相思，瓜类等热带作物白粉菌的寄主范围，发现刺头婆、山麻秆是橡胶白粉菌的野生寄主；野艾蒿，马鞭草是大丽菊白粉病的野生寄主。南瓜白粉菌可以侵染苦瓜，毛瓜，不能侵染冬瓜，丝瓜，黄瓜，用５种瓜的白粉妆种南瓜均不成功，芒果、大叶相思白粉菌未发现野生寄主。     

橡胶树白粉病菌rDNA-ITS序列及其系统发育分析

由橡胶树粉孢属(Oidium heveae B.A.Steinm)真菌侵染引起的橡胶树白粉病是橡胶树最严重的病害之一.从海南、广东、广西和云南等天然橡胶主产区共收集橡胶树白粉病菌样品20份,提取其基因组DNA进行rDNA-ITS区序列扩增,并对5.8S rDNA及其两侧ITS序列进行分析.通过序列结果分析发现,供试样品可分为2个群体.     

橡胶树褐根病菌的分子检测

利用褐根病菌的一对特异性引物G1F/G1R,对不同来源橡胶树褐根病菌菌株的r DNA-ITS区进行PCR扩增,对发病组织进行分子检测,并构建橡胶树褐根病菌系统发育树。结果表明:10株不同来源橡胶树褐根病菌菌株DNA均能扩增出一条653 bp的特异性片段,而橡胶树红根病菌、紫根病菌、臭根病菌、白根病菌和清水对照均无扩增条带。发病组织检测结果表明,该引物能特异性检测到橡胶树褐根病菌的存在。引物对基因组DNA检测灵敏度为100 ag/μL。基于r DNA-ITS系统发育分析结果表明,供试菌株与Gen Bank中的菌株KF233592、KM079591聚在同一分支上,其亲缘关系最近,均属于Phellinus noxius。     

假臭草和九里香甲醇提取液对橡胶树白粉病菌抑菌活性的测定

为筛选防治橡胶树白粉病安全有效的植物源杀菌剂,采用孢子萌发抑制法测定22种植物甲醇提取液对橡胶树白粉病菌孢子的抑菌活性.结果表明,假臭草和九里香提取液浓度在0.1 g/mL时,对橡胶树白粉病菌孢子的萌发抑制率分别为43.98％和47.62％,极显著优于其它植物和对照.进一步测定假臭草和九里香提取液的EC50和EC75值,以及其盆栽试验的防治效果与橡胶树叶片丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)和苯丙氨酸解氨酶(PAL)的活性.结果表明,假臭草和九里香对病原菌孢子的EG50值分别为0.26 g/mL和0.20 g/mL,EC75值分别为1.12 g/mL和0.99 g/mL.假臭草和九里香提取液浓度在EC75值时,防病效果分别为20.00％和18.67％,显著高于对照.假臭草和九里香提取液处理后,橡胶树叶片的MDA含量极显著低于对照,CAT、SOD和PAL活性则显著或极显著高于对照.由此可见,假臭草和九里香提取液不仅能抑制病原菌的萌发和生长,而且能提高橡胶树的抗病性.     

一株芝麻枯萎病菌的鉴定及其生物学特性

为明确发生在南阳芝麻田块的芝麻枯萎病菌原物,以有效防治病害,从南阳市采集枯萎病显症芝麻植株,用常规组织分离法获得一株镰刀菌ZY-2,依据柯赫法则确定ZY-2对芝麻幼苗的致病性,显微观察形态特征,检测生物学特性,并依据核糖体基因内转录间隔区（rDNA-ITS）序列和翻译延伸因子1α基因(tef)序列对该菌进行分子鉴定。在基于rDNA-ITS序列构建的系统发育树中,菌株ZY-2与2株尖孢镰刀菌Fusarium oxysporum的参比菌株（GenBank登记号：AF69310和EU285553）在自举值98%相聚一群。在基于tef基因序列构建的系统发育树中,菌株ZY-2与3株F. oxysporum的参比菌株（GenBank登记号：KF030591、KF301636和FJ985299）在自举值100%相聚一群。该菌适宜生长温度为22~31℃,最适为28℃;pH2.0~10.0范围内均可生长,最适为pH6.5~7.5;能利用多种碳源和氮源进行营养生长,但在以葡萄糖和L-脯氨酸分别作为唯一碳源和氮源的培养基上不产生分生孢子。      

橡胶树多主棒孢菌rDNA–ITS区的分子鉴定及检测

以来自国内外的18个多主棒孢病菌[Corynespora cassiicola(Ber.&Curt.)]菌株为研究材料,提取其基因组DNA进行rDNA-ITS区序列扩增,并进行了5.8S rDNA及其两侧ITS序列分析.序列分析结果表明,种内各菌株间ITS序列同源性高达99.9%以上,部分菌株间出现个别碱基的差异.根据ITS区序列设计的一对特异引物(CorP1/CorP2)可以在供试的多主棒孢病菌中扩增出1条约277 bp的特异谱带,其余18个参试菌株和橡胶树叶片组织未能扩增出该特异谱带,检测灵敏度可达浓度为0.1 pg的目标DNA.     

木薯细菌性枯萎病菌hrpG和hrpX基因的克隆和初步分析

根据黄单胞类病原菌hrpG和hrpX基因序列，设计简并引物，通过PCR扩增从我国木薯细菌性枯萎病菌中克隆到这2个基因。结果表明：10个菌株的hrpG基因编码区长度均为792 nt，编码263个氨基酸，相互之间最多有4个碱基和1个氨基酸的差异；而hrpX基因编码区长度均为1 431 nt，编码476个氨基酸，相互之间最多有4个碱基和3个氨基酸的差异。所获hrpG基因序列和辣椒斑点病菌等黄单胞菌同源基因相似性最高，核苷酸序列为95%，氨基酸序列为96%。所获hrpX基因核苷酸序列和辣椒斑点病菌等的相似性最高，为97%，而氨基酸序列和柑橘溃疡病菌等同源基因相似性最高，为99%。这2个基因的聚类分析结果表明，木薯细菌性枯萎病菌和豆褐色黄单胞菌、柑橘溃疡病菌和甘蓝黑腐病菌的亲缘关系最近。     

巴西橡胶树棒孢霉落叶病菌Slt2类MAPK同源基因CMP1的克隆与序列分析

根据几种丝状真菌Slt2类MAPK的保守氨基酸序列设计简并引物,从巴西橡胶树棒孢霉落叶病菌[Corynespora cassiicola(Berk.Curt.)Wei]中扩增出MAPK同源基因的部分片段,再利用染色体步移法延伸该片段的上、下游邻接序列,获得MAPK编码基因的全长序列,命名为CMP1(GenBank Accession No.GU321364)。序列分析表明,该基因含有5个外显子和4个内含子,编码417个氨基酸的多肽,推测分子量为47.5 ku,等电点为5.57。CMP1含有一个参与双重磷酸化作用的MAPK蛋白激活域(TEY),其氨基酸序列与丝状真菌的MAPK,AAslt2和MAP-kinase等高度同源。系统聚类结果显示,该基因与白菜黑斑病菌(Alternaria brassicicola)、细交链格孢菌(A.alternata)和玉米小斑病菌(Cochliobolus heterostrophus)的Slt2类MAPK基因具有较高的同源性。Southern杂交分析表明,CMP1基因在巴西橡胶树棒孢霉落叶病菌基因组中以单拷贝形式存在。     

杂交竹枯萎病病情调查与病原鉴定

于2006和2008年在广西和江西等地的杂交竹枯萎病调查中,在11个地点发现了枯萎病并分离到病原菌。病原菌菌落圆形,分别为白色、粉红色或紫色,大分生孢子为镰刀形,小分生孢子肾形,厚垣孢子卵圆形。rDNA-ITS序列分析结果表明这些菌株和尖孢镰刀菌同源性在99%以上,确认这些病菌均为尖孢镰刀菌,为该病的有效防治提供了理论依据。     

一株市售人参的分子鉴定

目的 以核糖体转录间隔区(rDNA ITS)序列为分子标记,对一株市售人参属植物归类到种提供分子证据.方法 改良CTAB法提取植物总DNA,利用通用引物ITS5/ITS4扩增rDNA ITS序列,经克隆、测序后,运用Clustal X,BioEdit和PAUP等软件进行序列分析并构建系统发育树.结果 测序得到该植物的rDNA ITS区序列长度为722bp,序列分析结果显示该植物与Genbank中已有的人参(PanaxGingsen,FJ593178)rDNA ITS区序列之间相似性达100％,在系统发育树中并排聚类成一枝.结论 基于rDNA ITS区序列的测序分析和系统发育树构建的分子生物学方法,能够对供试品进行准确的分子鉴定.