用甘油蔗糖或乙二醇冷冻保存的牛胚胎直接移植的妊娠率

用甘油蔗糖或乙二醇冷冻保存的牛胚胎直接移植的妊娠率该研究的目的是记录当使用甘油蔗糖或乙二醇作抗冻剂时，牧场中牛冷冻胚胎移植的妊娠率。在１９９３～１９９６年，法国人工授精公司的胚胎移植组生产、冷冻并移植了７日龄胚胎６０８５枚。使用甘油蔗糖冷冻胚胎组共有...     

冷冻牛胚胎解冻后直接移植

冷冻胚胎解冻后能够直接移植给受体母畜，可为胚胎移植技术提供方便，并促进通过体外技术大量产生的胚胎的销售。牛胚胎直接移植技术利用蔗糖作为渗透缓部液，移植前在细管中去甘油、或者将蔗糖添加到防冻液直接移植而不必进行其他步骤。冷冻妆移植的新方法使用１．５Ｍ乙二醇中胚胎可以在保持液中直接再入水，不需要逐步稀释防冻剂，胚胎存活率与在基甘油中冷 冻用逐步法再入水的相同。另外，在１．５Ｍ乙二醇（ＥＧ）中冷冻，解冻     

奶牛冷冻胚胎直接移植法的应用试验

直接移植法大大简化了冷冻胚胎的移植步骤，使胚胎移植的大规模推广应用成为可能。本试验采用１．６１Ｍ的乙二醇代替甘油作冷冻保护剂，共冷冻保存Ａ、Ｂ级奶牛胚胎２７６枚。解冻，在１０分钟内直接装枪移植给受体奶牛。其移植青年牛４２，１８０天后确认妊娠２４头，受胎率为５７．１４％；移植成母牛８５，１８０天后确认妊娠３７头，受胎率为４３．５３％。两者合计，共植受体奶牛１２７头，确认受胎６１头，受胎率为４８．０３     

哺乳动物繁殖研究进展

1　直接移植冷冻的绵羊胚胎获得成功应用简单的胚胎冷冻方法 ,并将解冻的胚胎直接移植有助于降低绵羊胚胎移植的成本 ,加速绵羊品种改良。本实验是要研究胚胎冷冻方法在现场应用的可行性。所用的胚胎都从经ＦＳＨ -处理的情期第 7ｄ供体母羊收集 ,并对胚胎进行形态鉴定 ,用改良的ＰＢＳ清洗 ,于 10 %的甘油 ,10 %甘油和 2 0 %乙二醇中分别培养 5ｍｉｎ ,然后移入冷冻液 (2 5 %的甘油和 2 5 %的乙二醇 )中 ,装管 ,并将其移入液氮中冷冻保存。解冻的胚胎或直接移植或按常规方法处理后移植。结果表明 ,冷冻胚胎和新鲜胚胎的妊娠率和存活率没有…     

牛冷冻胚胎直接移植研究进展

冷冻胚胎解冻后直接移植给受体的方法,应用方便,有利于体外大量生产牛胚胎程序的商品化。牛胚胎直接移植现在用的程序是以蔗糖作渗透压缓冲剂,在冷冻细管里脱除甘油,然后移植,或者将蔗糖添加在冷冻液里,省去专门的脱除步骤。现在研究的新方法是用1.5M乙二醇(ethykne glycol)作冷冻保     

一步吸管法奶牛胚胎移植效果观察

一步吸管法奶牛胚胎移植是相对于奶牛胚胎在冷冻保存和解冻过程中用庶糖二步清除防冻剂而言的、更简便的一种清除防冻剂的方法。即在吸管内无胚胎段吸入0．25moL／L的蔗糖液进行冷冻，解冻后使有胚胎的保存液与蔗糖液混合，剪去上段漂浮的甘油，直接移植。Renard和Leibo等用此法相继在1982年和1984年获得36．7％和45．2％的受胎率。郭志勤用此法在1987年以产犊后计算妊娠率达41．38％。     

奶牛胚胎冷冻新法及移植实验

奶牛非手术法胚胎移植技术最近有新的进展。其方法大致如下:在胚眙缓冲液中按一定配比加入适量的甘油和蔗糖溶液,将胚胎置入,冷冻保存。解冻后,可将胚胎直接移植至受体牛子宫颈,不必另行稀释。缺点是:必须使胚胎与蔗糖溶液充分接触一段时间,使胚胎内保护性化合物(防冻剂—甘油)渗出后才能移植,延长了解冻—移植时间,影响效果。实验用磷酸盐作缓冲液,并加入1.36M甘油和0.25M蔗糖溶液。将供体母牛作超排处理,在受精6.5～8天时用非手     

不同冷冻方法对牛体外受精胚胎冷冻效果的影响

通过采用程序降温法(试验1:分步法10%甘油;试验2:直接法1.8mol/L乙二醇+0.1mol/L蔗糖)和玻璃化法(试验3:20%甘油+0.3M蔗糖+0.3M木糖+3%聚乙二醇+20%乙二醇)对牛体外受精胚胎进行冷冻保存及解冻后进行孵化培养试验,用囊胚孵化率对各方法进行了比较。结果表明,10%甘油组、1.8mol/L乙二醇+0.1mol/L蔗糖组及玻璃化组胚胎存活率分别为85%、82.5%、90%;囊胚孵化率分别为50%、55%和80%(P<0.05)。体外受精胚用玻璃化法保存显著优于程序降温法,可获得较高的胚胎存活率(90%)和囊胚孵化率(80%)。     

切割取样后胚胎的冷冻保存技术的研究

研究了切割取样后小鼠胚胎和牛胚胎冷冻-解冻的技术方法。结果表明：（1）分别以10％甘油、10％乙二醇作为冷冻液以及在以上两种冷冻液中分别添加10％葡聚糖＋0．1mol／L蔗糖作为冷冻液常规方法冷冻切割后的小鼠胚胎，冷冻-解冻后体外培养72h总发育率分别为56．9％（259／455）、81．8％（604／738）、84．8％（540／637）和59．5％（308／518）。（2）取样后胚胎体外短暂培养（0-4h）并不能提高切割取样后小鼠胚胎冷冻-解冻体外培养发育率。（3）切割取样小鼠胚胎在25％甘油＋0．25mol／L蔗糖＋20％的血清为冷冻液，在-100～-110℃左右熏蒸2min快速冷冻后体外培养发育率为73．3％（33／45），切割取样牛胚胎快速冷冻-解冻移植妊娠率为57．1％（4／7）。     

引进加拿大冻胚解冻后直接移植的效果

对进口的加拿大牛冻胚胎进行解冻后移植效果观察。结果共解冻２４枚冻胚,解冻后直接移植给２４头受体牛,妊娠１９头,移植妊娠率７９．２％,其中荷斯坦奶牛冻胚移植２１头,妊娠１７头,移植妊娠率达８１．０％,创造我国牛冷冻胚胎移植成功率的最高记录。     

应用牛冷冻胚胎对秦川系受体牛移植的效果

应用进口加拿大牛冷冻胚胎解冻后对秦川系受体牛进行移植，共解冻6个品种的胚胎175枚，解冻后直接移植给161头受体牛，妊娠83头，移植妊娠率51.6%。其中灵台点移植32头，妊娠20头，移植妊娠率达62.5%。     

牛胚胎冷冻的简易技术

试验了两种适用于生产条件的牛胚胎冷冻保存技术。一种方法是根据蔗糖的渗透压特性,用1.36M 甘油+0.25M 蔗糖/PBS,对胚胎进行预脱水处理.然后以0.3℃/分钟速率慢速降温     

脱防冻剂方法对牛体外受精胚胎冷冻后成活率的影响

为了观察脱防冻剂方法对牛体外受精冷冻胚胎在体内、外发育率的影响,应用常规冷冻法在０．７５ｍｏｌ／Ｌ甘油＋０．５ｍｏｌ／Ｌ丙二醇溶液中冷冻受精后７、８ｄ的囊胚,解冻后在０．２５、０．５ｍｏｌ／Ｌ蔗糖液中二步或在０．２５ｍｏｌ／Ｌ蔗糖液中三步脱防冻剂的胚胎孵化率（分别为６８．６％、６２．２％、６８．７％）与用ＰＢＳ／ＦＣＳ六步脱防冻剂的差异不显著（７０．４％,Ｐ＞０．０５）,但在０．５ｍｏｌ／Ｌ蔗糖液中三步脱防冻剂后,孵化率显著降低（４７．６％,Ｐ＜０．０１）。用０．２５ｍｏｌ／Ｌ或０．５ｍｏｌ／Ｌ蔗糖或海藻糖预先使胚胎脱水后冷冻,解冻后可使胚胎直接在ＰＢＳ中一步脱掉防冻剂,胚胎孵化率（４５．０％～４９．５％）与在０．２５ｍｏｌ／Ｌ蔗糖液中二步脱防冻剂的相似（５１．５％,Ｐ＞０．０５）。移植试验表明,在０．２５ｍｏｌ／Ｌ蔗糖液中二步脱防冻剂获得的妊娠率与六步脱防冻剂相似,与在ＰＢＳ中一步脱防冻剂的亦无明显差异,但妊娠率均偏低（２１．４％～３７．５％）。     

牛体外受精胚冷冻保存的研究

对牛卵泡卵母细胞体外受精（ＩＶＦ）１６８ｈ的致密桑椹胚、囊胚用常规快速冷冻法、预冷和不预冷的超快速冷冻法进行了冷冻保存试验。结果表明：ＩＶＦ囊胚采用含１０％甘油的常规快速冷冻法、含２．１ｍｏｌ／Ｌ甘油和０．２５ｍｏｌ／Ｌ蔗糖预冷５ｍｉｎ的一步冷冻法及含２５％甘油和２５％乙二醇预冷５ｍｉｎ的玻璃化冷冻法等３种方法进行冷冻保存，解冻后的继续发育率（６８．０％，５９．０％，６５．７％）均无显著差异（Ｐ＞０．０５），可用快速、简便、预冷的一步冷冻法或玻璃化冷冻法替代常规快速冷冻法；ＩＶＦ致密桑椹胚可用一步冷冻法（２．１ｍｏｌ／Ｌ甘油＋０．２５ｍｏｌ／Ｌ蔗糖）和玻璃化冷冻法（２５％甘油＋２５％乙二醇或２５％甘油＋２５％１，２－丙二醇）进行预冷的超快速冷冻保存；冻前预冷（５ｍｉｎ）能显著提高ＩＶＦ囊胚的冻后形态正常率和继续发育率（Ｐ＜０．０５）；ＩＶＦ囊胚冷冻—解冻后的继续发育率高于ＩＶＦ致密桑椹胚。     

牛体外受精胚胎一步脱防冻剂冷冻方法的研究

为了研究适合于牛体外受精胚胎的一步除防冻剂的冷冻方法，特进行两个试验。试验１分别用１．５Ｍ甘油＋０．２５Ｍ蔗糖、１．５Ｍ乙二醇和１．５Ｍ丙二醇作防冻剂冷冻体外受精后第７天，已发育至囊胚阶段的牛胚胎。使胚胎降温至－７℃后，植冰，然后以０．３℃／分的速率降温至－３０℃，立即将胚胎投入液氮中冷冻保存。在３７℃水中解冻胚胎后，使其直接在含１５％胎犊血清（ＦＣＳ）的磷酸缓冲液（ＰＢＳ）中脱去防冻剂。经体外培养７２ｈ后，３组胚胎的孵化率分别为７７．２７％（１０２／１３２）、７３．２４％（１０４／１４２）、４７．９０％（５７／１１９），第１、２组的孵化率极显著高于第３组（Ｐ＜０．０１），说明用１．５Ｍ丙二醇溶液冷冻的胚胎，在解冻后不宜直接在ＰＢＳ中脱防冻剂。试验２比较用不同浓度（１．０Ｍ０１．５Ｍ，２．０Ｍ）的乙二醇和不同投液氮温度（－２５℃，－３０℃，－３５℃）冷冻胚胎的效果。结果表明乙二醇浓度和投液氮温度对胚胎孵化率均无显著影响（Ｐ＞０．０５），各组胚胎的孵化率变动于７４．４４％－８５．４８％之间。     

传统稀释液配方中添加不同保护剂对藏羊精液冷冻效果的影响

为探索在传统稀释液配方中添加保护剂对藏羊精子的冷冻保存效果,在传统稀释液配方(果糖-蔗糖-柠檬酸钠-甘油)中,由Tris(三羟甲基氨基甲烷)代替柠檬酸钠,乙二醇代替甘油,在果糖-蔗糖-Tris-乙二醇基础上添加维生素B12、维生素E、维生素C、复合维生素B等,以增强精子缓冲力,减少毒性,提高精子活力、顶体完整率及受精力。结果表明:精液冷冻保存稀释液中添加Tris比添加柠檬酸钠有更好的冷冻保存效果,能有效改善冻后精子活力和顶体完整率;精液冷冻保存稀释液中添加维生素B12对精子有良好的保护作用;用等体积乙二醇代替甘油作为防冻剂,对精子冷冻时的保护作用不亚于甘油;藏羊细管冷冻精液的制作中,用果糖-蔗糖-Tris-乙二醇-维生素B12组合稀释液配方进行2次稀释,8 min冷冻,其冷冻效果最佳,顶体完整率最高。     

扩张囊胚玻璃化超低温冷冻保存及移植技术的研究

本试验探讨了对鼠扩张囊胚玻璃化冷冻保存后，提高发育率的最佳条件。玻璃化溶液是用ＰＢＳ液稀释成的３０％聚蔗糖＋０．５Ｍ蔗糖混合法，再将乙二醇（ＥＧ）调制成２０、３０及４０％（ｖ／ｖ）的溶液，即ＥＦＳ２０、３０及４０。玻璃化冷冻保存是１０、２０及２５℃温度下，将扩张囊胚直接移入ＥＰＳ溶液后投入液氮中一步法令冻保存，其中２５℃下保存后的发育率最高（８７％）。继之将扩张囊胚用１０％ＥＧ溶液经５分钟处理后，再移入ＥＦＳ４０中二步法冷冻保存，发育率高达９４％。利用二步法冷冻保存的扩张囊胚移植后，妊娠受体的产仔率为６６％（１６８／２５５），同时照组产仔率６１％（８０／１３２）相比无显著性差异（Ｐ＞０．０５）。     

在生产条件下牛冷冻胚胎直接移植的效果

以１８Ｍ乙二醇或１６Ｍ丙二醇作抗冻剂冷冻牛胚胎,解冻后在Ｍ－ＰＢＳ中一步脱除抗冻剂体外培养或不脱除抗冻剂直接移植给受体母牛。结果表明用１８Ｍ乙二醇直接移植法的体外培养存活率和移植妊娠率均显著高于１６Ｍ丙二醇组,分别为８４８％比６５５％和４８５％比４００％（Ｐ＜００５）,但与对照组（１４Ｍ甘油常规法）之间无显著差异,分别为８４８％比８６７％和４８５％比５００％（Ｐ＞００５）。     

进口奶牛冻胚一步解冻移植效果的研究

冷冻胚胎移植效果不仅能检验胚胎冷冻保存技术的可靠性,且直接影响牛胚移技术的普及应用与商业利益。与传统的胚胎冷冻一解冻处理技术相比较,牛冷冻胚胎解冻后立即移植给受体牛更适于现场操作,简化了移植前胚胎的分步脱甘油处理,具有省时、不需专门仪器设备等优越性。如果直接移植效果接近或超过冷冻精液人工授精技术水平（情期受胎率平均55％）,则对提高冷冻胚胎的利用率,增进国际问的引种,以及形成胚胎产业化、推动胚胎移植技术商业化具有重要意义。     

进口奶牛胚胎移植试验

为了探索一条以进口奶牛胚胎代替活畜进口的新途径，自2000年5月至12月，我们从加拿大引进179枚奶牛胚胎，并在内蒙、山东等地区进行了移植试验，结果显示：受体母牛在移植前45d强化饲养管理可提高移植妊娠率；常规冷冻胚胎解冻与一步细管冷冻胚胎解冻移植妊娠率无显著差异；用1．5mol/L乙二醇作保护剂冷冻的一枚牧胎移植妊娠率显著高于枚胚胎移植妊娠率。技术人员操作速度及子宫损伤对移植妊娠率明显影响。