禽致病性大肠杆菌(APEC)菌蜕的制备研究

菌蜕是通过PhiX174噬菌体溶菌基因E的可调控表达而形成的、缺少细胞浆和核酸且无繁殖能力的革兰氏阴性细菌菌体。这种非变性的灭活方式使菌蜕完好保留了细菌的各种抗原成分和免疫黏附分子,具有优良的免疫原性和固有的免疫佐剂性质以及免疫系统靶向性质。菌蜕的这些生物学特点使其在作为新型非变性灭活菌苗、作为递呈异源抗原的重组疫苗以及作为DNA疫苗甚至药物的载体方面都显现出巨大的研究开发前景。本研究成功构建了热敏诱导、pR、pL串联双启动子表达E基因的、具有不同抗性标记和复制起点的系列溶菌载体,比国外用pR或pL单启动子的溶茵载体在K-12株大肠杆菌(如XL1-blue)的溶茵效率高一个指数级。本研究还成功制备出禽致病性大肠杆菌(Avian pathogenic E.coli,APEC)野毒株的菌蜕,为进一步进行菌蜕疫苗的开发研究奠定了技术基础。     

猪源致病性大肠杆菌菌蜕的制备

为制备仔猪水肿病源致病性大肠杆菌菌蜕,本实验克隆phiX174裂解基因E,构建温控溶菌表达载体,将其转入猪源致病性大肠杆菌JLBC1501中,制备菌蜕计算其裂解率,并用电镜进行观察。结果显示:扩增出片段大小为274bp的裂解基因E,成功构建温控溶菌质粒载体pBVE,制备了猪源致病性大肠杆菌菌蜕,其裂解率最高为99.72%,扫描电镜观察,菌蜕株内容物大量排出、细菌发生明显皱缩。研究结果为仔猪水肿病的防治奠定了基础。     

沙门氏菌菌蜕研究进展

沙门氏菌是一种具有侵袭性的传染性人兽共患病原菌。抗生素防治沙门氏菌病有一定的效果，但不能完全防止细菌感染，并且长期使用存在耐药性与药物残留等诸多问题。疫苗是降低畜禽病原感染的重要手段，但传统疫苗在免疫效力、安全性等方面存在一定问题。细菌菌蜕是一种只含有细菌内外膜完整结构的死菌体，但保留了完整细胞表面结构及成分，具有良好的免疫原性，相较于传统疫苗，菌蜕疫苗能刺激机体产生高水平的体液免疫、细胞免疫以及黏膜免疫，表现出更好的保护力。文章综述了沙门氏菌菌蜕的研究进展，总结了不同血清型沙门氏菌菌蜕作为灭活疫苗、抗原载体、药物载体和佐剂等方面的应用，为沙门氏菌病新型疫苗的开发提供科学参考。     

鸭源大肠杆菌O_(78)菌蜕的制备及免疫原性研究

为制备大肠杆菌(E.coli)菌蜕并研究其免疫原性,本研究将带有裂解基因E的质粒pHH43转化致病性鸭源E.coli O78,构建获得E.coli O78/pHH43重组菌。于不同培养温度下研究重组菌E裂解蛋白表达所介导的宿主菌的裂解情况,结果显示在42℃培养时最佳诱导时间为4h,约90%的重组菌被裂解失活,以冻干法及添加庆大霉素完全灭活未裂解的细菌后制备"菌蜕疫苗"。雏鸭免疫试验表明,接种E.coli O78/pHH43菌蜕两周后免疫雏鸭可产生对同源强毒菌株致死剂量攻击的免疫保护。比较E.coli O78/pHH43菌蜕与甲醛灭活的同株E.coli所诱导的免疫保护效果,结果免疫保护率分别为87.5%和75%,表明菌蜕比甲醛灭活法能更有效地诱导机体的特异性免疫应答。     

鸡白痢沙门菌pagC基因缺失株菌蜕疫苗的制备和免疫保护效果评价

为了在鸡白痢沙门菌pagC基因缺失突变株的基础上制备可用于鉴别诊断的菌蜕疫苗并评价其免疫保护效果,本研究利用细胞穿膜肽MAP制备ΔPagC菌蜕,透射电镜和荧光显微镜观察菌蜕形态和核酸残留情况;将ΔPagC菌蜕与佐剂ISA206混合乳化制备菌蜕疫苗并进行无菌检测;基于ICR小鼠评价菌蜕疫苗对鸡白痢沙门菌CVCC1800、肠炎沙门菌ATCC19585和鼠伤寒沙门菌CVCC542感染的交叉保护效果;结合基于PagC蛋白的沙门菌血清学检测方法评价pagC基因缺失株菌蜕疫苗的鉴别诊断效果。结果显示,菌蜕制备最佳条件为用终浓度为50μmol/L MAP溶液处理OD_{600 nm}=0.3的菌液1 h以上,灭活效果可达99.00%;菌蜕保持基本细胞形态的同时内容物大量释出,核酸残留水平较低;菌蜕疫苗针对上述3种血清型沙门菌的免疫保护率分别为25%、100%和100%;菌蜕疫苗与基于PagC蛋白的沙门菌血清学检测方法联用可在一定程度上起到鉴别诊断作用。结果表明,制备所得菌蜕疫苗在保护小鼠的同时,能够在一定程度上区分人工免疫和自然感染,为沙门菌的净化工作提供帮助。     

沙门氏菌菌蜕佐剂增强结核分枝杆菌4种蛋白的免疫作用研究

探究肠炎沙门氏菌菌蜕(ghost)佐剂对结核分枝杆菌(MTB)4种抗原的免疫增强作用,本研究以MTB中的Rv3802、Rv0394c(SEC)、Rv0199及E6c10(ESAT6与CFP10融合蛋白)蛋白为免疫原,应用小鼠模型评价沙门氏菌菌蜕对MTB4种抗原的免疫佐剂效应。结果显示,蛋白加菌蜕佐剂组可以刺激小鼠产生持久高水平的抗体,并且菌蜕佐剂的免疫增强效果高于弗氏不完全佐剂;IgG1/IgG2a的比率增高,提示蛋白加菌蜕佐剂组小鼠趋向于Th2型免疫反应,同时可以诱导淋巴细胞分化为CD4+T细胞亚群并产生IFN-γ及IL-4细胞因子;病理组织学显示以菌蜕佐剂配伍蛋白制备的亚单位疫苗具有良好的安全性。本研究为结核病的预防和新型疫苗的研发奠定了一定的基础。     

鸡白痢沙门菌pagC缺失株的构建及菌蜕制备

为了开发具有鉴别诊断功能的鸡白痢沙门菌疫苗,通过λ-Red同源重组敲除鸡白痢沙门菌CVCC1800的pagC基因,成功获得ΔpagC菌株;合成细胞穿透肽(cell penetrating peptide,CPP)制备菌蜕并对处理条件进行了优化。结果显示:作用浓度为50μmol/L,ΔpagC菌液OD_(600 nm)=0.4左右时CPP灭活效果最好。本研究制备的基于ΔpagC鸡白痢沙门菌菌蜕,在保留抗原性的同时为鉴别诊断提供了靶点,为后续开发针对鸡白痢沙门菌的鉴别诊断菌蜕疫苗奠定了基础。     

细菌菌蜕的研究进展

菌蜕是通过基因灭活的方法,利用噬菌体PhiX174的裂解蛋白E在革兰氏阴性菌细胞膜上形成一个跨膜孔道结构使其胞质内容物由孔道排出所形成的细菌空壳结构。这种空壳结构因其保留了细菌的完整结构,不仅可用作疫苗制备的抗原物质,还可作为药物、异源抗原、核酸等的递送载体,具有广泛的应用前景。     

猪霍乱沙门菌菌蜕的制备及免疫保护效力研究

为制备猪霍乱沙门菌菌蜕并研究其免疫保护效力,克隆噬菌体phi X174裂解基因E,与p BV220连接,构建温控溶菌表达载体,将该载体转入猪霍乱沙门菌TTB1中,制备菌蜕并对其裂解率、安全性以及对小鼠的免疫保护效力进行了研究。结果显示:成功克隆了裂解基因E、片段大小274 bp,构建了温控溶菌质粒载体p BVE,制备了猪霍乱沙门菌菌蜕,其裂解率最高为99.46%、经冻干灭活残余活菌,安全性试验检测证实其安全后,对小鼠进行了免疫保护试验,其保护率为70%、与弗氏佐剂灭活苗保护率相当、优于甲醛灭活苗。研究为猪霍乱沙门菌感染的防治奠定了基础。     

猪霍乱沙门菌菌蜕的制备及免疫保护力研究

为制备猪霍乱沙门菌菌蜕并研究其免疫保护力,本实验克隆噬菌体phiX174裂解基因E,与pBV220连接,构建温控溶菌表达载体,将该载体转入猪霍乱沙门菌TTB1中,制备菌蜕并对其裂解率、安全性以及对小鼠的免疫保护力进行了研究。结果显示：成果克隆了裂解基因E、片段大小274bp,构建了温控溶菌质粒载体pBVE,制备了猪霍乱沙门菌菌蜕,其裂解率最高为99.46%、经冻干灭活残余活菌,安全性试验检测证实其安全后,对小鼠进行了免疫保护试验,其保护率为70%、与弗氏佐剂灭活苗保护率相当、优于甲醛灭活苗。研究结果为猪霍乱沙门菌引发疾病的防治奠定了基础。     

禁牧对内蒙古克氏针茅草原表层土壤细菌群落结构的影响

为探究克氏针茅草原禁牧初期表层土壤细菌的变化情况，本文利用2018—2020年内蒙古克氏针茅草原的细菌高通量数据和土壤理化性质数据，对自然放牧向禁牧转变初期的表层细菌群落和土壤理化性质的变化及其相互关系进行分析。在自然放牧向禁牧转变初期，细菌相对丰度发生较大变化，但优势菌种组成没有显著变化，其中，相较于2018年，2019年放线菌门和变形菌门相对丰度均增加，2020年变形菌门相对丰度超过了放线菌门。自然放牧条件下，细菌丰度、细菌多样性均与土壤体积含水量存在显著负相关关系，细菌丰度与土壤温度显著正相关；禁牧初期，细菌丰度与pH、土壤有机质、土壤温度显著正相关，与土壤体积含水量显著负相关。细菌丰度比细菌多样性更容易受到禁牧和土壤理化性质的影响。因此，本研究结果为进一步研究禁牧后表层土壤细菌群落变化提供了一定的理论依据。     

祁连山中段退化高寒草地土壤细菌群落分布特征

为探究祁连山中段不同退化高寒草地土壤细菌群落分布特征,采用Illumina HiSeq PE250高通量测序平台对轻度、中度和重度退化草地土壤细菌群落变化特征进行研究,并对土壤细菌群落与土壤酶活性、土壤理化因子间关系进行分析。结果表明:随着退化程度加剧,植被盖度、高度、地上生物量和多样性指数均明显降低(P<0.05);土壤理化性质和酶活性变化各异且差异显著(P<0.05)。高通量测序共得到257971条有效序列,219017条优质序列和2004个OTUs。细菌群落丰富度指数依次为轻度>中度>重度,多样性指数为轻度>重度>中度,Beta多样性分析表明各样地间差异为轻度>重度>中度。其中,放线菌门(Actinobacteria)、厚壁菌门(Firmicutes)、酸杆菌门(Acidobacteria)和变形菌门(Proteobacteria)为3种退化草地土壤的优势菌门,在轻度、中度和重度退化草地土壤中分别占77.25%、84.27%和78.66%;乳球菌属为3种退化草地土壤的优势菌属,在轻度、中度和重度退化草地土壤中分别占14.29%、38.84%和7.39%。冗余分析表明:土壤酶活性和土壤理化性质均对细菌群落的组成具有影响,其中土壤pH是影响土壤细菌群落分布的主要驱动因子。祁连山中段不同退化高寒草地土壤细菌群落的变化主要受土壤理化性质和酶活性的影响。     

不同利用方式下呼伦贝尔草甸草原土壤细菌群落特征与理化性质的关系分析

为了研究4种不同利用方式下呼伦贝尔草甸草原土壤细菌群落结构及多样性与土壤理化性质的关系,揭示不同利用方式对草原土壤微生物多样性及土壤理化性质的影响情况,试验采用高通量测序技术,比较贝加尔针茅群落放牧+刈割(S1)、羊草群落放牧(S2)、羊草群落刈割(S3)以及贝加尔针茅群落刈割(S4)4种不同利用方式下的呼伦贝尔草甸草原土壤细菌群落结构及多样性,分析土壤理化性质与物种相对丰度、细菌多样性的相关关系。结果表明:S1、S2、S3、S4四个样本土壤细菌分别有31,27,26,28个门,酸杆菌门、变形菌门、疣微菌门、放线菌门是土壤中的优势群落;四个样本中S1的细菌多样性最高,S3的物种数最低;草甸草原土壤细菌群落相对丰度的排序为S1S4S2S3,多样性排序为S1S2S3S4;土壤全氮、全磷、速效氮和有机质对细菌群落多样性和物种相对丰度的影响较大,呈显著正相关。说明呼伦贝尔草甸草原土壤细菌物种组成丰富,四个样本土壤细菌群落结构相似,植被类型、利用方式和理化性质等都是影响细菌群落结构和多样性的因素。     

引起幼貂大量死亡的肺炎克雷伯菌的分离和鉴定

采用西蒙式枸橼酸盐琼脂培养基从山东威海地区肺出血死亡幼貂的肺脏和肝脏中分离到1株细菌,对所分离的细菌进行形态特征、理化性质、16S rRNA测序鉴定,并对该分离菌进行了药敏试验和人工感染试验。结果显示,该菌16S rRNA序列与GeneBank登录号为CP006648的肺炎克雷伯菌16S rRNA序列同源性为95%,分离菌具有高度的耐药性,对小鼠具有较强致病作用,并可复制出与水貂类似的病理变化,由此推断肺炎克雷伯菌是导致幼貂大量死亡的主要致病菌。     

家蚕蜕皮物和蝉蜕制备壳聚糖的理化特性与抑菌活性分析

壳聚糖在医用材料等领域有广泛用途。以家蚕5龄幼虫、蛹的蜕皮物以及蝉蜕为材料制备壳聚糖,并测定样品的结构、理化性质和抑菌活性。3种材料制备壳聚糖的红外光谱与壳聚糖标准品基本相似,只存在个别峰值、峰位的差异,表明3种壳聚糖样品的基本结构相同。3种壳聚糖的粘度和分子质量存在一定差异,其中蝉蜕制备壳聚糖的粘度达到90.4 m Pa·s,家蚕5龄幼虫蜕皮物(简称5龄蚕蜕)制备壳聚糖的粘度则低至11.7 m Pa·s,蚕蛹蜕皮物(简称蛹蜕)和5龄蚕蜕制备壳聚糖的相对分子质量分别为2.6×104、1.2×104,均小于蝉蜕制备壳聚糖的相对分子质量(1.0×105);蝉蜕和蛹蜕制备壳聚糖的脱乙酰度接近,均高于5龄蚕蜕制备壳聚糖的脱乙酰度。3种壳聚糖抑菌的最适p H在4.5~6.5,依据测量抑菌圈的大小,以5龄蚕蜕制备壳聚糖的抑菌效果最好,其次是蝉蜕和蛹蜕制备的壳聚糖。测试结果提示,家蚕5龄幼虫和蛹的蜕皮物以及蝉蜕等均是开发昆虫壳聚糖的优质原料。     

防治桑蚕细菌病新药“蚕菌清”的研制与应用

为提高防治桑蚕细菌病的效果,我们研制成功了防治桑蚕细菌病新药"蚕菌清".该药抗菌广谱,性质稳定,稀释倍数高,对人、畜、蚕安全,使用方便.经桐乡、湖州,海宁,德清等市、县试用,蚕菌清的防病效果显著优于氯霉素,是目前防治桑蚕细菌病的理想药剂.现将该药的药效、性能、使用方法报告如下.一、药效试验(一)供试病原(1)细菌类:黑胸败血病菌,用前以无菌水洗落菌膜,充分分散,配成所需浓度;沙雷铁氏菌(灵菌)、球菌及卒倒菌,所需菌液浓度根据试验要求配制.     

不同治沙措施对土壤细菌群落多样性及理化性质的影响

为探究复合型治沙措施对土壤细菌多样性及理化性质的影响，采用Illumina高通量测序技术，分析尼龙网格沙障+人工梭梭(Nlw+H)、粘土沙障+人工梭梭(Nt+H)和编织袋沙障+人工梭梭(Bzd+H)措施区土壤细菌群落结构及多样性。结果表明：研究区土壤共有25门细菌，放线菌、变形菌和蓝藻菌相对丰度占细菌群的69.42%以上，属于土壤优势菌群；绿弯菌、拟杆菌、酸杆菌和芽单胞菌属于土壤中的主要细菌。3种措施区土壤细菌群落组成及结构相似，但细菌多样性指数差异显著。3种措施下土壤多样性Chao1指数和Shannon指数均显著高于Ld+H(P<0.05)。土壤有机质、全氮、全磷、速效钾等养分含量在3种措施区显著提高。土壤pH值、有机质和速效钾与土壤细菌群落之间存在显著相关关系，是影响土壤细菌群落结构及多样性的主要因子。综上所述，治沙措施有助于提高土壤细菌多样性及改善荒漠土壤微环境。     

利用温控双表达载体制备印第安纳沙门菌菌蜕

为制备安全高效的印第安纳沙门菌菌蜕,本研究以温控质粒pTCV为载体,分别构建出只含噬菌体PhiX174裂解基因E的pTCK01质粒、同时含裂解基因E和金黄色葡萄球菌核酸酶A(SNA)的pTCK02质粒及对裂解基因E和SNA密码子优化后的pTCK03质粒,分别转化印第安纳沙门菌S1105后经42℃诱导表达,并对各重组菌开...     

光合细菌在水产养殖业中应用现状及作用机理探讨

光合细菌是一种水生微生物，作为饲料添加剂应用于水产养殖业日益受到人们重视。其应用不仅具有明显的增产作用和防病效果，而且可改善水质，降低氨氮和有机质，防止水体富营养化。本文就光合细菌在水产养殖业的应用现状作一简单介绍，并对其作用机理进行了初步探讨。1光合细菌的性质及营养组成1.1光合细菌的性质光合细菌是一种能够利用光能进行生长繁殖的水生微生物，主要分布在水沟、沼泽、河川、海、活性污泥和土壤中，在富含有机质的污水中生物量一般可达10~5─10~7个菌体／ml。光合细菌中以紫色非硫菌研究和应用的最多，它能较好地利用…     

可提高对虾饵料利用率的添加剂

近年来,对虾养殖十分盛行。随之而发生的问题是对虾的种种疾病,它是影响饲料利用率的因素之一。在对虾的疾病中,我们已知道成年对虾是由于丝状菌引起的丝状菌症;稚虾是由病毒引起的中肠线白浊症。最近,在养殖池放养对虾后,比较大的对虾经常发生细菌性疾病,其危害不容忽视。作为该细菌性疾病的病原菌之一,我们鉴定为弧菌属菌。另外,该弧菌属菌与以前报道的那些种类(如:弧菌属等),具有不同的性质。