酒精耐受性枯草芽孢杆菌发酵马铃薯薯渣的研究

从大庆盐碱土中分离到１株高浓度酒精耐受性纤维素降解细菌菌株ZY62。对该株的16sRNA进行序列分析确定其为枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)。以马铃薯渣和汁水作为发酵培养基初步优化ZY62 菌株产羧甲基纤维素（ＣMC）酶条件,试验结果为pH值自然、37?℃、150 r／min发酵时CMC酶活最高;发酵120 h后,薯渣与汁水转化获得的发酵产物中单细胞蛋白含量达到18.5％。小鼠增重试验结果表明马铃薯渣与汁水发酵后产物可部分替代豆粕。     

短小芽孢杆菌产碱性纤维素酶的发酵工艺优化

为了确定短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus S12)产碱性纤维素酶的最适发酵条件,采用液体摇瓶的发酵方法,进行最适发酵条件的单因素试验和正交试验。结果表明,Bacillus pumilus S12菌株合成纤维素酶的最适碳源为CMC和麸皮,最适氮源为酵母膏,有机氮比无机氮更有利于产酶;最适产酶条件为起始pH 8.5,培养温度32℃,装液量为250mL三角瓶装70mL培养液,接种量为3%,在此条件下发酵20h,酶活力可达367.9μg/mL。     

航天诱变复合菌剂发酵生产马铃薯渣菌体蛋白饲料研究

采用航天诱变选育的优良菌株黑曲霉突变株ZM-8、酿酒酵母YB-6混菌与热带假丝酵母、白地霉菌共发酵,用马铃薯渣固体培养生产高蛋白饲料,并对发酵生产蛋白饲料的条件进行了优化。结果表明:航天复合菌剂的最优配比为酿酒酵母YB-61.5 g、热带假丝酵母2.0 g、白地霉菌2.5 g、黑曲霉突变株ZM-8 2.0 g。最优培养基配方为白糖4 g、硫铵7 g、尿素4 g、三十烷醇2.5 mg/L。在此优化条件下发酵马铃薯渣,产物中粗蛋白含量可达32.5%,是原料粗蛋白的5.84倍。     

马铃薯渣生料固态发酵生产菌体蛋白饲料的研究

以马铃薯渣为原料,对采用不灭菌固态发酵法生产菌体蛋白饲料的糖化菌种进行了优选,并对其较适丁艺条件进行了探索研究试验,结果表明：采用黑曲霉培养（28℃,2～3d）．经糖化后,接入白地霉液体曲种发酵62h,可使产物干基蛋白含量从5．80％提高到13．95％。并筛选出较合适的发酵基质配料为：鼓皮10％、尿素10％、（NH4）2SO41．0％、KH2PO40．05％。     

短小芽孢杆菌BPS48对马铃薯生长的影响

以天薯11号为指示品种,研究了短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)BPS48对马铃薯生长期间病害及产量的影响。结果表明,马铃薯用短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)BPS48可湿性粉剂300倍液灌根后,病毒病发病率较轻;折合产量最高,为14 200 kg/hm~2,较空白对照增产2 250 kg/hm~2,增产率18.8%。用芽孢杆菌可湿性粉剂45 g/L浓度下浸种30 min后,马铃薯折合产量为10 600 kg/hm~2,较空白对照减产1 350 kg/hm~2,减产率11.3%。     

柚子皮渣生产单细胞蛋白饲料工艺研究

以柚子皮渣为原料,以康宁木霉、白地霉、酵母菌、产朊假丝酵母为菌体,用卵清蛋白为标准品和双缩脲试剂制定标准曲线,探究单菌株与混合菌株分别固态发酵后产单细胞蛋白的含量。结果表明:白地霉与康宁木霉组合菌发酵效果最好,培养基发酵7d后蛋白质含量达到8.060g,占培养基干重的19%左右。发酵效果受温度、p H值、接种量、培养基含水量等因素影响,用正交实验获得白地霉与康宁木霉最佳发酵条件组合为:最适p H值5.5,最适发酵温度25℃,最适接种量15%,最适培养基含水量65%,且各因素对发酵的影响大小为发酵温度培养基含水量接种量p H。     

酒糟单细胞蛋白饲料生产技术研究

为了充分利用酒糟资源，减轻酒糟对环境的污染，以优良菌种117号产朊假丝酵母、136号热带假丝酵母、白地霉和扣囊拟内了解霉混合发酵酒糟，生产酒糟单细胞蛋白饲料，结果表明：发酵最适起始pH为5.0左右；适宜的发酵培养基配方为80%酒糟，15%麦麸左右%玉米粉，1%豆饼，1%尿素，0.05%磷酸二氢钾，发酵前用适量糖化酶预处理酒糟能明显提高酒糟蛋白质含量，通过扩大发酵试验，100g酒糟中粗蛋白含量由18.1g增加到28.6g，人和成年哺乳动物必需氨基酸及钙、磷含量显著增加，粗纤维和单宁含量明显减少。酒糟单细胞蛋白饲料可作为配合饲料的新型优质蛋白源，采用分割留种培养能生产高质量、低成本的酒糟单细胞蛋白饲料。     

味精渣单细胞蛋白饲料喂猪试验

在浙江嘉善杂交生长猪的日粮中分别按４％、３％、２％和０的比例添加味精渣单细胞蛋白饲料．饲喂试验的结果表明：３％味精渣单细胞蛋白饲料的饲喂效果最好，平均日增重和饲料转换率分别为６９９．９０±５０ｇ和３．５４：１，与对照组比较，差异极显著．     

玉米秸秆与马铃薯薯渣固态发酵蛋白饲料的工艺研究

研究玉米秸秆与马铃薯薯渣固态发酵对菌体蛋白含量的影响,以马铃薯薯渣和玉米秸秆为研究对象,以复合微生物制剂进行固态发酵,考察固态发酵工艺对蛋白工艺的影响,以期为农业废弃物二次利用提供技术依托.     

产碱性蛋白酶菌株Zkud202-4发酵条件的研究

对土壤中分离的一株产耐盐碱性蛋白酶的短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)Zkud202-4株的发酵条件进行了研究,通过单因素试验和正交试验,确定了最适产酶培养基组成:pH9.0、基础培养基中加入质量分数1.5%的葡萄糖为碳源、1.5%的蛋白胨为氮源、0.01%的Ca2 为金属离子.最适发酵条件:接种量V(种子培养液)∶V(培养基)=2%、发酵温度36℃、发酵时间45 h.优化后菌株Zkud202-4碱性蛋白酶的酶活力达到383 U/mL.     

短小芽胞杆菌抑菌蛋白TasA基因克隆及功能分析

为了研究短小芽胞杆菌Bacillus pumilus DX01菌株的抑菌相关基因的功能,采用PCR方法从DX01基因组DNA中扩增出编码TasA基因的全长DNA序列,并构建原核表达载体pET2-TasA,在大肠杆菌Escherichia coli BL21中表达获得TasA基因的融合表达蛋白,分别利用悬滴法和平板打饼法检测融合蛋白对玉米小斑病菌(Bipolaris maydis)分生孢子萌发和对玉米小斑病菌及水稻稻瘟病菌菌丝体生长的抑制活性,结果表明TasA融合蛋白对这2种植物病原真菌的生长有着显著的抑制作用。TasA基因包含1个780bp的完整开放阅读框(GenBank:KC692521),编码259个氨基酸残基;该序列与B.subtilis菌株PEBS2501(GenBank::FJ713581)、B.amyloliquefaciens HF-01(GenBank:JF781312)和B.subtilis菌株BWST7003(GenBank:AP012496)同源抑菌蛋白基因序列相似性达99%。原核表达产物经SDS-PAGE分析检测到约32.3kDa的融合蛋白;经Ni-NTA柱纯化后的融合蛋白对供试病原菌均有显著的抑制作用。经测定发酵液的TasA融合蛋白产率为28μg/mL,短小芽胞杆菌抑菌蛋白TasA基因具有良好的抑菌效果。     

短小芽孢杆菌阿魏酸酯酶的分离纯化及性质研究

通过硫酸铵沉淀、离子交换层析和疏水层析,对短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)发酵液中的阿魏酸酯酶进行分离纯化,并测定其部分酶学性质。结果表明,阿魏酸酯酶的纯化倍数为5.06,回收率达到14.8%。该酶的相对分子质量约为28.6 ku;最适反应温度为50℃,最适pH为5.8,在40~45℃和pH 5.8~8.2都能保持很高的稳定性。K~+、Co~(2+)、Ca~(2+)和DTT对酶活有明显的促进作用,而Cu~(2+)、乙醇和苯甲基磺酰氟严重抑制了其酶活。以阿魏酸甲酯为底物,测得Km为0.25 mmol/L,Vmax为6.27 U/(min·mg)。     

短小芽孢杆菌碱性蛋白酶的提纯与性质研究

将短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)Zkud202-4液体的发酵液离心去菌体,用硫酸铵盐析得粗酶,透析除盐后进行Sephadex G-75柱层析得到电泳纯碱性蛋白酶,用该法提纯的碱性蛋白酶比活力从粗酶液的155.5 U/mg提高到了954 U/mg,回收率为27.6%.该酶水解酪蛋白的最适反应温度为50℃,最适作用pH为10,且该酶具有较高的热稳定性和耐碱性.经SDS-PAGE测定,其分子质量约为2.5 ku.     

GFP标记短小芽孢杆菌LYMC-3在马尾松体内的定殖

为研究松材线虫拮抗细菌短小芽孢杆菌LYMC-3的内生性及其在马尾松体内的定殖规律,采用扫描电子显微镜(SEM)观察菌株在马尾松组培苗体内的定殖,并采用高渗透法将质粒pGFP78转入菌株LYMC-3,对其进行绿色荧光蛋白(GFP)标记,同时测定标记菌株的遗传稳定性.在此基础上,以GFP标记和抗性标记作为示踪手段,将标记菌株接种到2年生马尾松盆栽实生苗的根部,借助激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)和稀释涂板的方法,对马尾松根部、茎部的标记菌株进行定期回收检测.结果显示,通过SEM成功观察到菌株LYMC-3在马尾松体内的定殖,并成功获得LYMC-3菌株荧光表达强烈且遗传稳定的转化子,经过连续8次的稀释培养,其遗传稳定性为96.8％.GFP标记菌株在接种马尾松根部后的第4天,根部、茎部都能回收到大量标记菌株的存在,随后呈持续下降的趋势,且根部的下降速度快于茎部.接种40 d后,根部回收标记菌株数量为0.3×102cfu/g,茎部回收标记菌株数量为0.8×102 cfu/g.以上结果表明短小芽孢杆菌LYMC-3具有内生性,能在马尾松体内良好地定殖和传导.     

农药助剂对短短小芽孢杆菌TW-2菌体及芽孢的影响

采用平皿计数法和抑菌圈法研究了24种农药助剂对稻瘟病生防菌短短小芽孢杆菌TW-2菌株菌体和芽孢存活的影响.结果表明,供试的24种农药助剂中有11种农药助剂(D425、D450、D500、EFW、500、505、507、AEO-5、AEO0、NP-10、OP-10)在供试浓度范围内(12.5～100g· L-1)可以完全杀灭短短小芽孢杆菌TW-2菌株的菌体和芽孢,其它助剂随着浓度的提高,对菌体和芽孢存活的抑制作用也越大.在24种农药助剂中,U-3A和By-110对菌体和芽孢的存活影响最小,可用于短短小芽孢杆菌TW-2菌株固体制剂和液体制剂加工中的湿润展布剂.     

单细胞蛋白的开发及其在畜禽生产中的应用

介绍了生产单细胞蛋白的微生物种类,阐述了单细胞蛋白的安全性评价和营养性评价,以及单细胞蛋白在畜禽生产中的应用效果,针对单细胞蛋白的存在问题提出了相应的解决方法。     

短小芽孢杆菌EN16诱导番茄对细菌性青枯病的抗性

采用盆栽试验法研究了短小芽孢杆菌EN16对番茄青枯病的诱导抗病效应.结果表明,菌株EN16诱导番茄产生对青枯病的防病效果达到49.45%-68.89%;分别在挑战接种间隔期为7-10 d、菌株灌根接种2种处理条件下,菌株EN16表现出较好的诱导抗病效果.测定EN16处理对番茄叶片中几种防御酶的影响,结果显示,在病菌挑战接种前后菌株EN16处理均能引起过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)和苯丙氨酸解氨酶(PAL)等防御酶活性的显著增强.     

短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)DX01转座突变株的构建及转化体系的优化

Tn5转座子及其衍生载体被广泛应用于革兰氏阴性菌的基因功能研究,但尚未见有利用Tn5转座子导入革兰氏阳性菌短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)DX01菌株的报道.本研究通过构建Tn5转座载体,对短小芽孢杆菌DX01菌株进行了Tn5转座插入诱变,获得了大量的突变株.同时,考察了感受态细胞培养浓度、电击电压、电...     

GFP标记的短小芽胞杆菌（Bacillus pumilus）转座突变株的构建初探

以水稻叶面附生菌短小芽孢杆菌(B.pumilus)为研究对象,通过构建pMOD-egfp-Tetr转座复合体,采用电击转化法对短小芽孢杆菌DX01菌株进行了Tn5转座插入诱变,获得了大量的转化子。对转化子进行了遗传稳定性分析和分子鉴定,并且在荧光显微镜下观察到了强烈的绿色荧光,研究结果表明外源DNA已经成功整合进细菌的基因组中,gfp基因在短小芽孢杆菌中实现了组成型表达。