米糠抗氧化肽的分离纯化研究

以DEAE-52离子交换柱层析和SephadexG-25凝胶过滤柱层析纯化米糠抗氧化肽,以硅胶G薄层层析测定其纯度,氨基酸自动分析仪测定其氨基酸组成。实验结果表明：米糠抗氧化肽经DEAE-52柱层析和Sephadex G-25柱层析后基本上得到了纯化;氨基酸组成分析表明,米糠抗氧化肽由14种氨基酸组成,富含两种酸性氨基酸：Asp、Glu,并含有6种人体必需氨基酸（Val、Met、lie、Leu、Phe、Lys）,占米糠抗氢化肽童基酸羔会号的31．89％．且有搪高的营兼价槽知僳馇功能．     

从麦胚清蛋白分离制备高活性抗氧化肽

【目的】探究能有效地从小麦胚芽清蛋白二步双酶酶解物中分离得到高活性抗氧化肽的工艺。【方法】以小麦胚芽清蛋白为原料,DPPH自由基清除率和Fe²⁺螯合能力为抗氧化活性的评价指标,通过胰蛋白酶进行酶解,依次采用超滤膜和凝胶过滤色谱（Sephadex G-75）对酶解产物进行分离纯化,筛选出活性较高的组分;采用碱性蛋白酶对获得的活性较高组分进行酶解,通过凝胶过滤色谱（Sephadex G-15）和反相高效液相色谱（RP-HPLC）分离纯化其酶解产物;采用质谱技术（ESI-TOF MS/MS）对抗氧化活性最高的组分进行结构鉴定。【结果】分离得到3个活性组分（峰）P_a、P_b、P_c,采用DPPH法和Fe²⁺螯合能力测定法测定其抗氧化活性的结果都显示,在3个组分中,提取率为23.1%的组分P_b抗氧化活性最强（P＜0.05）,因此选取组分P_b进行下一步碱性蛋白酶酶解。该酶解物经Sephadex G-15分离后得到P_d和P_e两个组分（峰）,经抗氧化活性测定,选取提取率为52.1%的高抗氧化活性组分P_d（P＜0.05）进一步通过RP-HPLC进行疏水性分离,得到P₁、P₂、P₃、P₄、P₅五个活性组分（峰）,其中提取率为7.3%的组分P₃的抗氧化活性最强（P＜0.05）,其DPPH自由基清除率和Fe²⁺螯合能力的EC₅₀值分别为1 mg·mL^-1、0.6 mg·mL^-1。最后通过质谱技术（ESI-TOF MS/MS）鉴定组分P₃的结构,得到其氨基酸序列为AREGETVVPG,分子量为1 013.51 Da,纯度约为85%,与用化学方法合成的多肽AREGETVVPG（纯度95%以上）的抗氧化活性相比,结果没有显著差异（P>0.05）。【结论】二步双酶酶解结合超滤膜、凝胶过滤色谱和RP-HPLC等蛋白分离纯化技术为直接得到单一的高活性抗氧化肽提供了技术参考。     

制备米糠蛋白降血压肽最佳用酶的筛选

试验以筛选制备米糠蛋白降压肽最佳用酶为目的。选用碱性蛋白酶、碱性蛋白酶Alcalase 2.4 L、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、蛋白酶K和双酶复合水解米糠蛋白,以血管紧张素转化酶（ACE）抑制率为主要指标,筛选出制备米糠蛋白降压肽的最佳用酶。结果表明,米糠降压肽ACE抑制率的大小与酶的种类及配比有关,筛选出碱性蛋白酶Alcalase为试验用酶,在酶解温度45℃,加酶量3 000 U.g-1,酶解pH8.5,米糠蛋白底物浓度3%酶解2 h时达到最大抑制率为71.1%。     

米糠肽的研究与应用

介绍了米糠蛋白的性质及其活性肽在降血压、阿片样拈抗活性、抗氧化、免疫调节等方面的作用,并概述了米糠蛋白及肽在食品行业的应用状况及发展前景.     

动物蛋白源抗氧化肽的研究进展

氧化不仅影响食品的质量而且危害人体健康,因此抗氧化一直是生命科学领域的研究热点之一。动物蛋白源抗氧化肽在食品和生物体中表现出了有效的抗氧化活性（如清除自由基、抑制油脂氧化和螯合金属离子等）;当它作为功能性原料时还具有增强人体健康的作用,因此动物蛋白源抗氧化肽被认为是一种安全的抗氧化物质,得到越来越多的关注。文中介绍了动物蛋白源抗氧化肽的研究状况,阐述了影响抗氧化肽抗氧化能力的因子和抗氧化能力的测定方法,并预测了抗氧化肽的应用前景与面临的挑战。     

大米抗氧化肽的分离纯化及结构鉴定

通过高效凝胶过滤层析和反相高效液相色谱先后对大米渣蛋白酶解后的多肽溶液进行分离纯化,分别得到组分2和组分RF9;再经反相高效液相色谱-质谱联用对组分RF9进行分析鉴定得到抗氧化肽氨基酸序列L-Q-P-Y(Leu-Gln-Pro-Tyr),分子质量为520.277u。合成的抗氧化肽片段L-Q-P-Y质量浓度为1 mg/mL时,对DPPH自由基清除率达到85.84%。     

甲鱼蛋白抗氧化肽的中性蛋白酶酶解条件优化

采用甲鱼蛋白为原料制备抗氧化活性肽,以DPPH(1,1 二苯基 2 三硝基苯肼)清除率和DH(水解度)为评价指标,在单因素试验的基础上,采用响应面法优化了中性蛋白酶酶解甲鱼蛋白制备抗氧化肽的酶解条件。结果表明: 温度5065℃,酶解pH值748,加酶量29%时, DPPH清除率最高,为(8556±152)%,对应的水解度为(768±052)%。     

超声波辅助酶解鲭鱼制备抗氧化肽的研究

针对鲭鱼鱼肉蛋白质含量相对较高的特点,利用超声波辅助酶解制备抗氧化肽。以双缩脲法测得多肽含量,以对DPPH(1,1-二苯基-2-三硝基苯肼)自由基的清除率为指标,探究制备鲭鱼抗氧化肽的最佳工艺条件。结果表明,最佳的酶解制备条件为:中性蛋白酶加酶量3%、酶解温度50℃、底物浓度4%、超声波辅助酶解时间2.5 h,在此条件下,得到的多肽抗氧化能力较强,对DPPH自由基的清除率达到89.33%,采用中性蛋白酶在超声波辅助下酶解鲭鱼蛋白制备抗氧化肽是可行的。     

纤维素酶法制备米糠蛋白的工艺优化研究

采用纤维素酶酶解短时微波稳定化的米糠,以蛋白提取率为指标,通过单因素试验分别研究酶解时间、酶解温度、pH值、加酶量和碱提时间对米糠蛋白提取率影响.在单因素试验结果的基础上,采用Box-Behnke响应面方法优化纤维素酶法制备米糠蛋白的工艺条件,结果表明:纤维素酶添加量为475 U/g、温度为42.7℃、pH值为7.23的条件下,酶解2.5 h,再以pH值9.0碱提45 min,在此条件下米糠蛋白的理论提取率达到81.86％,而验证试验的蛋白提取率为81.25(±0.80)％,接近理论值.     

花生过敏蛋白分离提取及结构预测分析

花生是较常见的重要食物过敏原之一。本研究采用石油醚对花生进行脱脂处理,利用硫酸铵盐析、透析、葡聚糖凝胶（Sephadex G-150）分离纯化花生蛋白,通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）法确定花生主要蛋白分子量为15、20、35和60 ku左右,Western–Blotting免疫印迹试验确定花生过敏原性蛋白分子量为63.5 ku;通过质谱测序得到31条有效蛋白肽段,其中5条肽段的谱图数较高,占总谱图数的49.6%,分别是KLEYDPRCVYDTGAT、AFNAEFNEIRRVLLEE、DNVIDQIEKQAK、PYSPSQDPDRRDPY和QDPYSPSQDPDR,并以此推断这些肽段为花生致敏蛋白Ara h 1和Ara h 2的主要肽段过敏序列,成功运用蛋白肽段推断与之对应的蛋白质种类,为进一步明确花生过敏原的致敏机理奠定基础。但花生过敏蛋白构象结构复杂,需要通过其他手段进一步开展研究工作。     

米糠蛋白的特性及提取工艺

主要研究在稀碱条件下米糠蛋白的提取工艺及所得蛋白的理化特性,确定了合理的工艺并优化了工艺参数.在此工艺条件下,米糠蛋白的提取率可达36%,纯度可达75%.SDS-PAGE分析结果表明米糠蛋白组成成分复杂,其相对分子质量分布主要集中在10 000～90 000之间.     

酶法制备大米活性肽及抗氧化性的研究

以水解液中活性多肽的得率为目标,分别采用5种蛋白酶对大米蛋白进行水解,得出最佳水解酶。水解大米蛋白然后脱盐处理,用铁氰化钾测定了大米多肽的还原能力,并考查了大米多肽对羟基自由基(.OH)、超氧阴离子(O2-.)、二苯代苦味肼酰基自由基(DPPH.)的抑制作用,并同VC做了比较。结果表明:大米蛋白制备活性肽的最佳水解工具酶为枯草杆菌碱性蛋白酶。大米多肽具有还原能力,并对这几种自由基体系具有不同的清除作用。在20.00～50.00 mg/mL时,大米多肽和VC对.OH的清除作用相当;大米多肽对O2-.的清除作用随浓度的增加而增强;在5.00 mg/mL时,大米多肽对DPPH.的清除率达到57.69%,但对O2-.和DPPH.的清除能力均低于VC。     

米糠酚类物质的大孔树脂分离纯化工艺

【目的】建立米糠中酚类物质的大孔树脂分离纯化工艺,比较米糠提取物纯化前后总酚、总黄酮含量及抗氧化能力,为米糠的深加工利用提供参考。【方法】比较9种不同类型大孔吸附树脂(HPD-100、HPD-200A、HPD-300、HPD-700、D101、HPD-722、AB-8、ADS17和HPD-826)对米糠提取物中总酚的静态吸附和解吸性能,筛选出对脱脂米糠酚类物质纯化效果最佳的大孔吸附树脂类型;通过考察其静态吸附动力学曲线,比较不同上样液浓度、上样流速和上样体积下的动态吸附曲线以及采用不同浓度乙醇洗脱的解吸效果,建立米糠多酚的大孔吸附树脂吸附和解吸工艺条件;比较HPD-300型大孔吸附树脂纯化前后总酚、总黄酮含量,采用高效液相色谱法结合应用酚类标准品分析米糠提取物经大孔吸附树脂纯化前后其各单体酚类物质种类与含量,并通过氧自由基吸收能力(oxygen radical absorption capacity,ORAC)和细胞抗氧化分析法(cellular antioxidant activity,CAA)比较其纯化前后的抗氧化活性。【结果】9种类型大孔吸附树脂对脱脂米糠提取物酚类物质均有一定的吸附能力,其中HPD-300型大孔吸附树脂对脱脂米糠总酚静态吸附和解吸效果明显优于其他类型树脂,其饱和吸附量为9.04 mg GAE·g~(-1),解吸率为82.62%,同时米糠总酚静态吸附在6 h时达到饱和值。HPD-300型大孔吸附树脂最佳吸附和解吸工艺条件为:米糠酚类提取液上样浓度为1.0 mg GAE·m L-1,上样流速为3.0 BV·h~(-1),上样体积为3.5 BV,洗脱剂为70%乙醇溶液,洗脱流速为3.0 BV·h~(-1)。经HPD-300型大孔吸附树脂纯化后,米糠酚类提取物的总酚和总黄酮含量分别从纯化前的88.07μg GAE·mg~(-1)和30.04μg CE·mg~(-1)提高到320.72μg GAE·mg~(-1)和133.67μg CE·mg~(-1),分别提高了2.6和3.4倍。经高效液相色谱分析,米糠酚类提取物经HPD-300型大孔吸附树脂纯化后,其中的没食子酸、原儿茶酸、香草酸、对羟基苯甲酸、咖啡酸、丁香酸、表儿茶素、香草醛、对香豆酸和阿魏酸等10种酚类单体组成未见明显变化和损失,且上述酚类单体在提取物中的含量较纯化前分别提高0.4—2.4倍。纯化后提取物的ORAC和CAA值分别为3 248.21μmol TE·g~(-1)和95.24μmol QE·g~(-1),较纯化前的1 327.51μmol TE·g~(-1)和29.19μmol QE·g~(-1),分别提高了1.4和2.2倍。【结论】HPD-300型大孔吸附树脂适合米糠酚类物质的分离纯化,经其纯化后的米糠提取物中总酚、总黄酮含量及抗氧化活性提高1—3倍,且不会造成单体酚的明显损失。     

碱性蛋白酶提取米糠蛋白的研究

为建立高效的米糠蛋白提取工艺,对碱性蛋白酶提取米糠蛋白的工艺条件进行了研究。以蛋白提取率为考察指标,在单因素试验的基础上,通过正交试验进一步优化米糠蛋白提取工艺条件。结果表明,料液比对米糠蛋白提取率的影响最大,其次为pH值,温度、时间和加酶量影响较小。优化后的工艺条件为:温度60℃,时间3.0h,料液比1∶20,加酶量2.5%,pH值9.5。在此条件下,蛋白提取率可达75.42%,同时测得米糠蛋白的等电点为4.5。影响米糠蛋白提取率的主次因素顺序为:料液比>pH值>温度>时间>加酶量。     

枯草芽孢杆菌发酵米糠制备活性肽及其抗氧化性评价

[目的]研究枯草芽孢杆菌发酵米糠中蛋白多肽的水解度和抗氧化活性,为米糠的高值化综合利用提供技术参考。[方法]以枯草芽孢杆菌为菌种,研究米糠发酵制备活性肽的条件,并对活性肽的抗氧化活性进行评价。[结果]当枯草芽孢杆菌接种量5%、发酵时间48 h、发酵温度36℃、p H 8时,米糠发酵液中水解度较高,达到了21.74%。枯草芽孢杆菌发酵制备的米糠活性肽具有较强的清除DPPH自由基、羟自由基和超氧阴离子自由基的能力。此外,米糠活性肽分子量主要分布在100~5 000 Da,富含天冬氨酸和谷氨酸,并包含了6种人体必需氨基酸。[结论]枯草芽孢杆菌发酵具有提高米糠功能特性的潜力,可为米糠的高值化利用提供参考。     

大孔树脂吸附分离米糠中ACE抑制肽工艺

采用大孔吸附树脂对米糠ACE抑制肽进行分离,比较6种大孔吸附树脂对米糠蛋白中肽的静态吸附和解吸效果,从中筛选出适合该米糠蛋白中肽分离纯化的树脂。结果表明,筛选出HPD-400型树脂最适合米糠蛋白中肽的混合物的纯化。通过对影响树脂吸附解吸的各种因素进行系统地研究,确定工艺参数。HPD-400树脂对米糠多肽的静态吸附4h左右基本达到吸附平衡,选择吸附温度45℃较为适宜;吸附时间达到2h后HPD-400型树脂对米糠蛋白肽的吸附量已达到饱和;在pH4．0时吸附效果好,吸附率达85．4％。解吸液为pH8．0的70％乙醇溶液,洗脱时间确定为30min。通过动态吸附分离实验得出,该树脂可以达到分离纯化米糠ACE抑制肽的目的。     

富硒米糠蛋白的优化制备及其蛋白营养复配研究

【目的】优化碱法提取富硒米糠蛋白的条件,根据蛋白质互补作用原理,研究并评价富硒米糠蛋白（RBP）的营养复配。【方法】碱法提取富硒米糠蛋白,按正交试验L9(34)优化富硒米糠蛋白的提取条件。将富硒米糠蛋白与大豆分离蛋白（SP）按比例60%、70%、80%、90%和100%进行复配,用凯氏定氮法、氢化物原子荧光光谱法和便携式色差仪分别测定富硒米糠蛋白和复配蛋白中的蛋白质含量、硒含量和色差值。利用高速氨基酸分析仪测定各蛋白产品的氨基酸含量,并根据必需氨基酸参考模式（WHO/ FAO）和氨基酸比值系数法,对各蛋白产品进行营养价值评价,得出营养价值最高的复配蛋白。【结果】通过正交试验考察富硒米糠蛋白的提取率、硒含量和富硒米糠蛋白的色差值,获得富硒米糠蛋白最佳提取条件为：料液比1﹕20、NaOH 浓度0.08 mol•L-1、温度30℃和时间3 h,富硒米糠蛋白纯度为（80.2±1.1）%,硒含量为（0.269±0.132）mg•kg-1,蛋白色差值为69.7±1.2,将此最优条件下提取出的富硒米糠与普通米糠蛋白产品的蛋白质和硒含量分别进行比较,结果表明,富硒米糠与普通米糠的蛋白质含量、富硒米糠蛋白与普通米糠蛋白的蛋白质含量都无显著性差异（P<0.01）,而富硒米糠的硒含量为（0.401±0.021）mg•kg-1,显著高于普通米糠硒含量（0.023±0.010）mg•kg-1（P<0.01）,同时富硒米糠蛋白的硒含量为（0.269±0.132）mg•kg-1,也显著高于普通米糠蛋白硒含量（0.052±0.011）mg•kg-1（P<0.01）。将富硒米糠蛋白与大豆分离蛋白（SP）按照不同比例进行营养复配,比较不同复配蛋白产品的蛋白纯度和硒含量,得出富硒米糠蛋白和各复配蛋白的硒含量均显著高于大豆分离蛋白硒含量（0.013±0.005）mg•kg-1,不同配比的复配蛋白硒含量随富硒米糠蛋白含量增加从（0.141±0.014）mg•kg-1增加至（0.269±0.032）mg•kg-1。根据必需氨基酸参考模式,采用氨基酸比值系数法评价各蛋白产品营养价值,根据比值系数分（SRC）富硒米糠蛋白和各复配蛋白的营养价值按高低顺序排列如下：60% RBP > 70% RBP > 50% RBP > 80% RBP > 90% RBP > RBP,结果表明,各复配蛋白SRC值均高于RPB的SRC值64.1,由此证明各复配蛋白营养价值均高于RBP,其中含60%富硒米糠蛋白的复配蛋白具有最高的营养价值,且其硒含量为（0.167±0.024）mg•kg-1,蛋白纯度为（84.1±0.8）%。【结论】将大豆蛋白与富硒米糠蛋白进行复配可提高蛋白的营养价值,获得一种含丰富微量元素硒的高品质蛋白。     

碎米和米糠制备营养米糊的工艺与配方研究

为了研制新型营养米糊,利用碎米和米糠为原料对制备营养米糊的生产工艺条件和配方进行了研究。结果表明:制备营养米糊最佳工艺条件为碎米中添加8倍水,在90℃水浴中煮制5min。米糊经干燥后过100目筛。通过正交试验确定了营养米糊的最佳配方为:1.39%外层米糠、6.95%内层米糠、69.54%碎米、15.58%白砂糖、6.23%奶粉、0.31%蔗糖酯。产品具有良好的速溶性。