黄瓜根系蛋白质组分析的双向电泳技术条件优化

双向电泳(2-DE)是蛋白质组学研究的重要支撑技术之一。为建立适于黄瓜根系蛋白质组分析的双向电泳技术,对黄瓜根系蛋白质样品提取方法、裂解缓冲液配方及SDS-PAGE分离胶浓度等参数进行研究。结果表明:采用TCA/丙酮法提取黄瓜根系中的蛋白质,裂解缓冲液为8mol·L-1尿素、2mol·L-1硫脲、2%IPG Buffer、4%CHAPS、1%TBP、65mmol·L-1DTT、2mmol·L-1EDTA、0.001%溴酚蓝和1%鸡尾酒,SDS-PAGE分离胶浓度为11%时,可获得分离效果较好的双向电泳图谱。该技术条件为适合黄瓜根系蛋白分离的较优双向电泳体系。     

蛋白质电泳中考马斯亮蓝R 250染色方法的优化与改进

为了优化与改进蛋白质电泳中传统考马斯亮蓝（Coomassie brilliant blue,CBB）R 250染色法凝胶背景深、脱色时间长、试剂消耗多等弊端,通过优化试验,建立了一种简单经济的 CBB R 250染色方法。与传统方法相比,该方法在染色液配制中降低了甲醇、冰醋酸的比例,增加了硫酸铵成分,从而有效改善了染色效果,改进后的方法,染色几乎无背景,不需专用脱色液,只需用清水洗涤即可观察效果,大大缩短了试验时间,节约了成本,值得推广应用。     

几种SDS—PAGE蛋白质染色方法的比较

本文在对已报道的三种不同的SDS—PAGE蛋白质染色方法加以改进的基础上,对各测定方法的灵敏度、重复性及有关影响染色的因素进行了比较和讨论。结果表明,改良的Pharmacia公司银染色法所得到的结果最好,适合作为实验室常规检测手段。     

不同染色剂对SDS-PAGE染色体系的影响

[目的]研究不同染色剂对SDS-PAGE染色体系的影响.[方法]通过SDS-PAGE染色体系中不同考马斯亮蓝染料、染色方法和染色时间的比较,探讨适合油棕和椰子的最佳染色体系.[结果]改进后的方法染色效果好,较好脱色,凝胶背景清晰,容易分析蛋白含量较低的条带.染色时间短（2 h）,条带较少,一些低丰度的蛋白条带未能清晰地显示出来,适当延长染色时间（6h或过夜）效果较好.3种不同染料均能较好地对蛋白质条带染色,R350和R250相比G250效果稍好些,条带着色深,蛋白质含量低的细小条带也能较好的染色.[结论]SDS-PAGE是开展蛋白质组学研究的关键技术,建立简易、稳定的染色方法具有重要意义.     

叶用莴苣叶片总蛋白质双向电泳影响因素的研究

以叶用莴苣叶片为试材,研究17cm固相pH梯度胶条(pH 4～7)体系下双向电泳不同的提取方法、上样体积、定量方法等影响因素,力求确定其理想的双向电泳条件。结果表明,酚-甲醇/醋酸铵沉淀法对蛋白质提取更彻底,效果更好。对于蛋白质定量的试验,相比于常规的Bradford方法,利用无干扰蛋白质定量试剂盒具有更好的准确性。考虑叶片总蛋白质中大量Rubisco的存在,应相对增加上样量,采用考马斯亮蓝染色时取800μg到1 100μg蛋白质进行双向电泳比较合理。     

福建柏叶片蛋白质双向电泳技术优化

蛋白质双向电泳是蛋白质组学研究方法之一,但蛋白质双向电泳技术体系却因物种不同而有所差异,因而蛋白质双向电泳体系的建立是进行蛋白质分离、鉴定的首要步骤。本文对福建柏叶片蛋白质提取方法、IPG胶条、等电聚焦参数设定、丙烯酰胺分离胶浓度等因子进行单因素分析,对福建柏双向电泳技术进行优化。结果表明,采用三氯乙酸-丙酮提取福建柏叶片的蛋白点多且图像清晰,p H4~7的IPG胶条最适合福建柏叶片蛋白的分离,等电聚焦参数设定为20 000 Vh,浓度为10%的分离胶进行福建柏双向电泳最好。本研究初步建立了福建柏叶片蛋白质双向电泳体系,为深入研究福建柏蛋白质组学提供依据。     

黄瓜叶片细胞壁蛋白双向电泳体系的建立

【目的】建立一套适合黄瓜叶片细胞壁蛋白质组学研究的双向电泳体系,为黄瓜细胞壁蛋白质组学的后续研究奠定基础。【方法】以黄瓜品种"长春密刺"幼苗叶片为材料,比较2种不同提取介质(CaCl2和LiCl溶液)对细胞壁蛋白的提取效果,对比IPG胶条梯度、裂解液、上样量及等电聚焦程序对黄瓜叶片细胞壁蛋白双向电泳结果的影响。【结果】以0.2mol/L CaCl2和3mol/L LiCl溶液依次提取黄瓜叶片细胞壁蛋白,选用17cm pH 3~10NL IPG胶条和裂解液Ⅱ(7mol/L尿素、2mol/L硫脲、40g/L CHAPS、10g/L DTT和1mmol/L PMSF),上样量800μg,按聚焦程序Ⅰ(20℃水化14h,100V30min,250V30min,500V30min,1 000V1h,线性升压5h至10 000V,10 000V聚焦6.5h)聚焦后进行双向电泳分离和考马斯亮蓝G-250染色,可获得重复性好、分辨率高的双向电泳图谱。【结论】建立并优化了适合于黄瓜叶片细胞壁蛋白质组学分析的双向电泳体系。     

适于黄瓜叶片蛋白质组分析的双向电泳方法最佳条件的研究

为建立适于黄瓜叶片蛋白质组分析的双向电泳方法,对黄瓜叶片蛋白提取方法、裂解缓冲液、等电聚焦(IEF)参数进行研究.结果表明:丙酮法或三氯乙酸/丙酮法提取黄瓜蛋白质较好,2-DE图谱中蛋白点较多;裂解缓冲液为9.5mol·L-1尿素,2mol·L-1硫脲,1%二硫苏糖醇(DTT)2mmol·L-1三丁摹磷(TBP),4% 3-[3-(胆酰氨丙基)二甲铵基]丙磺酸内盐(CHAPS),0.2%两性电解质,0.002%溴酚蓝,0.25%吐温20,10%异丙醇,5%甘油,10mmo·L-1苯甲基磺酰氟(PMSF)时,电泳网谱效果最好;IEF等电聚焦条件为25000Vh时.2-DE图谱蛋白点多且清晰.     

三种小麦蛋白质测定方法比较

为比较不同小麦蛋白质测定方法,总结各方法的特点和适用条件,本试验用凯氏定氮法、近红外光谱分析法和考马斯亮蓝染色法分别对9个小麦品种籽粒进行蛋白质含量的测定。结果显示．3种方法都能测定出各材料的蛋白质含量,在95％置信区间,凯氏定氮法和近红外光谱分析法测定值与常年平均值之间存在线性关系,3者测定结果之间没有显著差异。     

影响木薯叶片蛋白质双向电泳图谱的因素分析

以木薯华南205为试材,采用苯酚抽提法提取叶片蛋白质,并通过双向电泳技术研究影响木薯叶片蛋白电泳分析图谱的主要因素。结果表明：pH 4～7的IPG胶条可提高特定范围蛋白质点的分辨率;上样量200μg可得到较好的双向电泳图谱。本研究不仅为进一步研究木薯叶片蛋白电泳分析提供技术手段,同时也为分析木薯块根、茎和繁殖器官的蛋白...     

苹果叶片蛋白质双向电泳样品制备方法的比较

 为探索适用于苹果叶片蛋白质组学研究的样品制备方法,比较了三氯乙酸/丙酮沉淀法（TCA）、酚-甲醇/醋酸铵沉淀法和Tris-HCl提取法等3种总蛋白质的提取方法。制备的样品经双向电泳分离采用银染显色。结果3种方法分别得到450、374和1032个蛋白质点。认为Tris-HCl提取法为最适方法,所得图谱背景清晰,蛋白质信息量最大。     

蜂蜜蛋白提取以及双向电泳技术分析蜂蜜蛋白条件优化

[目的]研究蜂蜜中蛋白质提取的有效方法,优化蜂蜜蛋白电泳条件。[方法]该试验使用丙酮、钨酸钠、硫酸铵、尿素-硫脲4种方法提取蜂蜜中的蛋白并进行比较,然后进行双向电泳分析,对影响双向蛋白电泳的IPG胶条的选择、蛋白质上样量、等电聚焦时间等主要因素进行优化。[结果]试验表明,采用硫脲法提取蜂蜜蛋白获得的蛋白含量最高,硫脲法和丙酮沉淀法获得的蛋白纯度最好,而硫脲法因干扰物质较少、易于裂解适于双向电泳技术,采用硫脲法提取的蜂蜜蛋白选择IPG胶条p H 5~8,蛋白上样量为150μg,等电聚焦时间达到32 000 V·h的情况下能充分地聚焦,获得的双向电泳图谱最佳,优化后的洋槐蜜双向电泳图谱上可检测到326个蛋白点,重复性和分辨率均较好。[结论]蜂蜜类含糖样品中使用硫脲法提取蛋白能减少糖类物质干扰。     

银杏小孢子蛋白提取及双向电泳技术优化

对银杏小孢子蛋白提取方法、上样量等进行试验。结果表明：在蛋白提取方面,TCA/丙酮法最佳,该方法提取的总蛋白得率最高,所获蛋白在2-DE图谱获得的点数最多、最清晰;饱和酚法次之;Tris-HCl法最差。上样量方面,蛋白上样量为1 500μg时得到的2-DE图片,蛋白点清晰,重叠现象少,图谱质量最佳;蛋白上样量为2 100μg时2-DE图谱的多蛋白点相互重叠,横竖条纹严重;上样蛋白为900μg时,2-DE图谱上蛋白点较少,丰度较弱。     

葛枣猕猴桃叶片蛋白质双向电泳体系的研究

[目的]建立葛枣猕猴桃叶片蛋白质双向电泳体系。[方法]通过对不同的蛋白质提取方法、裂解液配方及IPG胶条的探索,建立适应于葛枣猕猴桃叶片双向电泳技术体系。[结果]TCA/丙酮法+配制裂解液较适用于葛枣猕猴桃叶片蛋白质组分析。最终可获得蛋白质点丰富、分辨率高的双向电泳图谱,可以检测出450个清晰的蛋白质点。[结论]该研究为在蛋白质组水平揭示叶片颜色变化的调控机制奠定基础。     

菜籽蛋白质组双向电泳技术体系的优化研究

[目的]建立适用于菜籽蛋白质组研究的双向电泳技术。[方法]以湘油17号为材料,对双向电泳技术中的样品制备方法、凝胶浓度、上样量等条件进行了优化。[结果]使用TCA一丙酮法提取菜籽总蛋白最佳,所获蛋白在2-DE图谱上获得的点数最多。当采用pH3～10IPG胶条和12％的凝胶、上样量为250μg时,可得到背景清晰、重复性好、蛋白点分辨率较高的双向电泳图谱。[结论]为开展油菜种子蛋白质组学研究奠定了基础。     

木本植物叶片蛋白质双向电泳技术体系的建立

以2种木本植物的成熟叶片为材料,对传统的双向电泳进行改进和优化,得到1种适合于木本植物叶片蛋白质电泳分析的方法,此方法大大降低了木本植物叶片中次生代谢物质对双向电泳结果的干扰,明显改善了分析效果。     

烟草根系蛋白质双向电泳样品制备方法的比较

为探索适于烟草根系蛋白质组学研究的样品制备方法,以栽培品种K326生长期根系为材料,比较了常规裂解液法、TCA/丙酮沉淀法、Trizol抽提法和酚法等4种总蛋白质的提取方法。对制备的样品进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及双向电泳(2-DE)检测。结果表明:酚法最佳,所获蛋白在单向SDS-PAGE中形成条带数目多而清晰;经双向电泳分离用银染显色,可检测约548个蛋白点,图谱分辨率较好,蛋白点清晰,主要集中在等电点pH5～8、相对分子量25.0～70.0kD,可有效解析烟草根系的蛋白质组。