应用氯化锂法小量提取质粒DNA

用改良的氯化锂方法小量提取质粒DNA。结果表明,该方法所提取的质粒DNA的质量与常规碱裂解法获得的质粒DNA基本一致,可以满足分子生物学基础实验的要求;同时该方法简化了试验步骤,质粒DNA提取时间缩短了24 min。     

一种改良的苏云金芽孢杆菌质粒DNA提取方法

以Sambrook的碱裂解法为基础,通过控制菌体培养时间,适当调整提取过程中3种溶液的比例及作用时间,摸索出一种适合于提取苏云金芽孢杆菌质粒DNA的方法.该法与常规碱裂解法相比具有重复性好、质粒DNA质量高等优点.     

甘薯薯块DNA提取方法研究

甘薯薯块富含淀粉、酚类等物质,不利于DNA提取。为了研究甘薯薯块DNA提取的最佳方法,采用经典CTAB法、改良CTAB法一、改良CTAB法二和SDS提取法,对甘薯薯块总DNA提取效果进行比较,以试剂盒法提取结果作对照。结果表明:采用经典CTAB提取法和SDS提取法获得的薯块DNA含有较多杂质,且降解严重,样品质量低;CTAB改良法一能降低DNA样品中多糖等物质的含量,但DNA存在一定程度降解,且耗时较长;CTAB改良法二提取效果最佳,杂质含量低且DNA降解少,与试剂盒提取效果最接近,是一种较为理想的甘薯薯块DNA提取方法。     

遗传学实验教学中动物基因组DNA提取方法研究

为了探索遗传学实验教学中动物基因组DNA提取的最优方法,本文介绍了一种改良版的碱裂解动物基因组DNA的提取方法,并与传统的酚仿抽提法及试剂盒提取法进行了比较。结果表明,优化碱裂解法具有简单、快速、无毒、成本低等优点,是一种既可以用于科学研究,也可应用于遗传学实验教学的较好方法。     

质粒DNA提取方法的探讨

本实验利用构建好的含有抗病虫基因的大肠杆菌的质粒,采用了碱裂解法、煮沸法、SDS法进行提取。在比较这些方法的同时,进一步对它们进行优化,从而使其得到完善。结果表明:在小质粒中,三种方法中碱裂解法所得到的DNA制品其浓度和纯度都明显高于其它两种方法。     

一种利用碱裂解法快速筛选重组子的方法

根据碱裂解法提取质粒DNA的原理,利用碱裂解法快速筛选到重组子,该方法快迅、准确,可应用于基因克隆中的重组菌落快迅检测。     

濒危兰科植物DNA的提取方法

濒危兰科植物组织富含多糖和多酚类物质,提取高质量的DNA较困难。为优化濒危兰科植物基因组DNA提取方法,采用改良CTAB法、改良SDS法和试剂盒法对多种濒危兰科植物基因组DNA进行提取,对获得的DNA质量、浓度和纯度进行比较。结果表明,用改良CTAB法和试剂盒法可有效去除多糖类和多酚类物质的干扰,DNA提取效果较理想,改良SDS法较差;CTAB法获得的DNA浓度高于试剂盒法,且后续PCR扩增效果也优于试剂盒法。     

淹涝处理下樱桃总RNA提取方法的建立与优化

以淹涝处理后的樱桃叶片和根系为材料,采用CTAB法、TaKaRa RNA提取试剂盒法和改良试剂盒法提取其总RNA,通过琼脂糖凝胶电泳和核酸蛋白检测仪比较所提取总RNA样品的质量。结果表明:改良TaKaRa RNA提取试剂盒法提取的总RNA完整性高,质量好,无降解;进一步采用改良TaKaRa RNA提取试剂盒法提取樱桃淹涝胁迫0—4 d叶片和根系的总RNA为模板进行RT-PCR验证,发现PCR扩增得到的条带较清晰,与目的片段大小一致。因此,改良TaKaRa RNA提取试剂盒法提取的樱桃叶片与根系总RNA完全可以满足进一步分子生物学研究的需要,是淹涝处理后樱桃总RNA提取的理想方法。     

质粒DNA碱裂解提取法的改进

对质粒的碱裂解小量提取法进行了改进 ,改进的方法克服了以往质粒提取方法的RNA等杂质污染和操作烦琐费时等问题 ,该方法操作简单、经济实用 ,提取的质粒DNA得率稳定、质量好 ,符合大多数分子生物学常规实验的要求。     

一种简便有效的核酸纯化方法

核酸纯化是分子生物学实验中最常用的技术之一,现有的常规核酸纯化方法比较费时费力。结合经典的醇沉淀法与质粒提取试剂盒二者的优点,探索出改良柱纯化法,即在核酸溶液中加入适量的醇和醋酸钠,用硅胶柱快速回收核酸。试验证明新方法与现有方法的纯化效率相近,节约试验成本,且操作简单快速。纯化后的DNA能够满足酶切分析、细菌转化等试验的需要。     

用于PCR扩增的细菌DNA提取方法比较

以14个属的革兰阴性菌和阳性菌为研究对象,采用16S rRNA基因PCR扩增对4种细菌DNA提取法进行了比较.结果表明,对细菌DNA的提取效果排序,依次为冻融法、煮沸法、碱解法、ROSE法.冻融法效果最好,具有成本低、省时省力、无污染等优点,但仍存在少数革兰阳性菌DNA提取失败的现象.因此,在菌株较多的情况下可先采用冻融法提取细菌DNA,对少数提取失败的菌株,弃冻融法得到的上清液,再以SDS法、CTAB法或DNA试剂盒的提取进行补充.采用该操作流程既能节省成本和时间,又减少了提取过程中有机废弃物的产生.     

抑制素质粒的提取与纯化研究

[目的]为抑制素质粒的大量提取与纯化寻找一种成本低的方法。[方法]采用碱裂解法与DEAE-纤维柱层析法提取与纯化抑制素质粒DNA,用分光光度法测定其浓度和纯度。[结果]抑制素质粒DNA的等电点为2．0～2．5,低于大部分蛋白质。pH值为8．0时,抑制素质粒DNA带负电荷,且电荷数量与RNA和蛋白质不同。用紫外分光光度计测定的柱层析后洗脱峰1、2、3在260和280nm波长处的吸光度值分别为3．01和2．9、0．95和0．51、0．84和0．76,其OD260nm/OD280nm分别为1．04、1．86和1．10。3mol／L NaCl的洗脱峰1大部分是蛋白质,0．6mol／L NaCl的洗脱峰2是浓度为93．0ng／ml的抑制素质粒DNA,3mol／L NaCl的洗脱峰3是杂质。[结论]利用碱裂解法能从大肠杆菌细胞中分离出抑制素质粒DNA,DEAE-纤维柱层析法纯化的抑制素质粒DNA达到了要求的纯度。     

日本囊对虾性腺蛋白质双向电泳的样品制备方法的改进

采用一种能同时提取RNA、DNA和Protein的试剂（RDP试剂）进行日本囊对虾性腺总蛋白质的制备，并通过双向电泳（2-DE）技术与传统的裂解液法比较提取效果．RDP法所得2-DE图谱清晰，条纹少，蛋白质点数多，而裂解液法存在横向和纵向拖尾，其碱性端蛋白质点大量缺失，说明RDP法能有效去除蛋白质样品中盐离子、脂类等干扰成分．结果不仅为后续的日本囊对虾性腺蛋白质组学研究提供了技术保障，也为其他甲壳类动物性腺总蛋白质的提取提供了借鉴．     

连接方法对重组效率影响的比较研究

[目的]为探索一种适于连接PCR产物和不同粘端的新方法。[方法]分别采用冻融法、割胶法、试剂盒法和牙签法连接PCR产物与质粒DNA以及酶切产物与质粒DNA,比较不同连接方法对重组效率的影响。[结果]采用冻融法和割胶法连接PCR产物与pMD18-T,其连接效率分别为94.00%和93.00%,略高于试剂盒法和牙签法。采用冻融法和割胶法连接酶切产物的重组效率分别为86.67%和88.00%,略高于试剂盒法和牙签法。牙签法简化了连接前DNA相关操作,具有较高的连接效率,完全能够满足普通连接反应,特别是粘端连接反应要求。[结论]割胶法具有很高的重组效率和转化效率,可以满足普通连接反应、文库构建对连接效率和转化效率的要求,具有一定的应用前景。     

碱裂解法提取P.ananatis变异体质粒DNA改良研究

[目的]对常规碱裂解法进行改进。[方法]分别改变溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ及无水乙醇的反应时间,少量提取质粒DNA。根据产率和纯度,得出各溶液的最佳反应时间,以紫外分光光度法、琼脂糖凝胶电泳结果验证提取效果。[结果]将常规碱裂法中溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ及无水乙醇的反应时间由原来的5、5、5、15 min分别缩短至0、1、1、5 min,纯度达1.8~1.9,产率达180.0~248.0μg/ml。[结论]改良法提取质粒DNA,总提取时间缩短了23 min。     

一种从马鹿粪便中提取DNA的改进方法(英文)

[目的]介绍一个从马鹿粪便中提取DNA的改进方法。[方法]本实验采用的是,在传统的CTAB裂解法的基础下,根据马鹿粪便的特征摸索出来的改进方法。[结果]采用该方法从天山马鹿粪便中提取了高质量的粪便DNA并扩增了天山马鹿线粒体细胞色素b基因片段,通过测序检测,同时提取马鹿肌肉和皮毛样品的DNA作为对照,进一步证实了提取的可靠性。[结论]该方法提取过程中不需要用蛋白酶K;所提取的DNA不需要用DNA纯化试剂盒纯化,可直接用PCR扩增,因此,费用量很低。     

番茄基因组DNA不同微量提取方法的比较及适用性分析

为了探究不同基因组DNA提取方法在生物学试验中适用性问题,采用5种方法提取番茄基因组DNA,并通过琼脂糖凝胶电泳、微量紫外分光光度计、聚合酶链式反应(PCR)比较提取的DNA浓度、质量及适用性。结果显示,碱裂解煮沸法成本低、操作简便,但所提取的DNA浓度最低,质量最差,只适合一般PCR检测试验;SDS冰浴法和改良的CTAB法操作步骤多、程序复杂,提取的DNA浓度和质量好,通用性最强,但所用试剂具有毒性;高盐低pH法和PVP-40法操作简单,提取的DNA浓度和质量较好,具有一定的通用性,且所用试剂无毒,建议一般性的生物学试验可优先考虑这两种方法。     

新疆泥火山土壤宏基因组DNA的提取方法研究（摘要）

[目的]寻找一种有效的泥火山土壤宏基因组DNA的提取方法。[方法]分别采用CTAB法、SDS加酶法、实验室改进法、试剂盒法提取泥火山土壤宏基因组,比较4种方法的提取效果。[结果]试剂盒法的提取效率最高、纯度最好;实验室改进法次之;SDS加酶法提取量最多。实验室改进法获得的DNA,稀释10倍可直接用于PCR扩增。[结论]从经济和DNA质量的角度考虑,实验室改进法可作为新疆泥火山土壤宏基因组DNA提取最有效的方法。     

一种从马鹿粪便中提取DNA的改进方法

[目的]介绍一种从马鹿粪便中提取DNA的改进方法。[方法]在传统的CTAB裂解法的基础下,根据马鹿粪便的特征进行改进所得的DNA提取方法。[结果]采用该方法从天山马鹿粪便中提取了高质量的粪便DNA并扩增出了天山马鹿线粒体细胞色素b基因片段,通过测序检测,同时以提取的马鹿肌肉和皮毛样品DNA作为对照,进一步证实了提取的可靠性。[结论]该方法提取过程中无需使用蛋白酶K;所提取的DNA无需使用DNA纯化试剂盒纯化,可直接用于PCR扩增,因此,试验费用很低。