两种中药制剂微生物限度检查方法验证

建立滋阴清热降糖丸、金水咳喘康胶囊的微生物限度检查方法,并对其进行验证。取滋阴清热降糖丸、金水咳喘康胶囊各10 g,用TSB制成1∶10的供试液,混匀,采用平皿法进行检查,需氧菌采用1∶50、1∶100、1∶1 000 3个稀释度,霉菌、酵母菌采用1∶10、1∶100 2个稀释度,加入金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉,测定回收率。控制菌按照《中华人民共和国药典》2020年版四部中规定检查大肠埃希菌、沙门菌、耐胆盐革兰阴性菌。按上述方法进行验证,测定菌种回收率均为0.5～2.0,方法适用性试验结果满足要求。说明平皿法经验证有效,可用于这两种中药制剂的微生物限度检查,能有效控制药品质量,结果准确可靠。     

家蝇幼虫血淋巴粗提物的抑菌活性分析

试验对家蝇幼虫血淋巴的抑菌活性进行了测定。结果显示,家蝇幼虫血淋巴对革兰阴性菌大肠杆菌、沙门菌和革兰阳性菌金黄色葡萄球菌均有抑杀作用,对于革兰阴性菌的抑杀作用大于革兰阳性菌,0.8mg/mL的血淋巴粗提物可达到约50%的抑杀率。     

市售散装鲜乳中微生物污染指标的检验

对互助地区45份市售散装鲜乳进行了菌落总数、大肠菌群、芽孢总数、金黄色葡萄球菌等微生物污染指标的检测，结果表明：菌落总数超标34份，占检样的75.6%；大肠菌群超标27份，占检样的60.0%；芽孢总数超标26份，占检样的57.8%；检出金黄色葡萄球菌7株，占检样的15.6%，鲜乳卫生状况较差。     

生物饲料添加剂中微生物污染情况调查分析

研究旨在了解生物饲料添加剂中微生物污染情况。随机抽取生产及使用环节的微生态制剂、酶制剂及标示有微生物成分或酶制剂成分的混合型饲料添加剂产品270批,依据现行标准规定的方法进行了沙门氏菌、志贺氏菌、金黄色葡萄球菌、大肠菌群、霉菌总数、蜡样芽孢杆菌等微生物指标的检测。结果表明,生物饲料添加剂中沙门氏菌的检出率为1.85%;大肠菌群的检出率为23.33%,超标率为21.11%,检出水平为<10～10~5CFU/g;霉菌的检出率为42.22%,超标率为8.89%,检出水平为<10～10~6CFU/g;蜡样芽孢杆菌检出率为39.56%,超标率为4.44%,检出水平为<10～10~7CFU/g。结果显示,生物饲料添加剂中存在一定程度的微生物污染情况,有必要对该类产品进行质量监控。     

金银花等8种中草药的体外抑菌试验

采用平板打洞法、试管倍比稀释法分别测定了金银花、夏枯草、龙珠果、苡仁、半边莲、黄鹌菜、白花蛇舌草、马齿苋8种中草药对大肠杆菌K88、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、葡萄球菌、沙门菌5种细菌的药物敏感性、最小抑菌浓度（MIC）和最小杀菌浓度（MBC）。结果显示，上述5种细菌对金银花呈中度敏感，其MIC和MBC均为1／80～1／10g／mL；龙珠果仅对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、沙门菌有一定抑制作用，其MIC和MBC均为1／10、1／80、1／10g／mL；苡仁仅对金黄色葡萄球菌和沙门菌有一定抑制作用，其MIC和MBC均分别为1／20和1／40g／mL。夏枯草仅对葡萄球菌有一定抑菌作用，半边莲仅对金色葡萄球菌有一定抑菌作用，而黄鹌菜、白花蛇舌草、马齿苋对上述5种细菌未见抑菌作用。     

氯氮平片微生物限度检查方法验证

利用常规法和培养基稀释法对氯氮平片微生物限度检查方法进行验证。结果表明,采用培养基稀释法时各试验菌回收率均大于70%;控制菌检测时,试验组检出控制菌大肠埃希菌,阴性菌对照组未检出阴性对照菌金黄色葡萄球菌。该试验表明氯氮平片具有微弱的抑菌作用,可采用培养基稀释法进行微生物限度检查。     

一株颉颃黄曲霉菌枯草芽孢杆菌的生物学特性研究

对筛选出的一株枯草芽孢杆菌进行生物学特性研究。将枯草芽孢杆菌全菌液、上清液及超声波菌体分别进行抑制黄曲霉菌生长试验和降解黄曲霉毒素解毒效率,并进行抑制大肠杆菌、沙门菌和金黄色葡萄球菌抑菌试验,以及耐酸、耐胆盐、胃肠耐受能力和温度敏感试验。结果表明该株枯草芽孢杆菌超声波菌体对黄曲霉生长具有明显抑制作用,对黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素G1和黄曲霉毒素M1的降解活性分别为75%、70%和62%,而全菌液和上清液效果较差。对大肠杆菌和沙门菌抑菌效果较好,对金黄色葡萄球菌较差,能够耐酸、耐胆盐、胃肠耐受能力和耐高温。试验对该株枯草芽孢杆菌应用临床提供理论依据。     

具有益生特性的小尾寒羊肠道正常菌群的分离、鉴定及筛选

为了获得适合生产的羊源益生菌株,本试验从健康成年小尾寒羊肠道内分离出5株菌落形态各异、生长良好的菌株。通过革兰染色、生理生化鉴定及16SrDNA分析,5株菌分别为M1(干酪乳杆菌)、M2(植物乳杆菌)、E1(粪肠球菌)、E2(屎肠球菌)、L1(枯草芽孢杆菌)。细菌生长曲线、耐酸、耐胆盐、抑菌试验等益生特性分析结果表明,M1、M2和L1具有生长速度快,耐酸、耐胆盐,明显抑制大肠杆菌、鸡白痢沙门菌和金黄色葡萄球菌等肠道常见致病菌的益生特性,可以作为研制羊用微生态制剂的候选菌株。     

饲料用肉粉微生物污染调查分析

2013年10月—2014年9月,通过细菌菌落分离以及生化和血清鉴定,检测了四川、河北、山东、河南、天津等地的肉粉样品中主要的有害微生物。结果显示:50%的样品检出金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus);25%的样品检出沙门菌(Salmonella),以鼠伤寒沙门菌(Salmonella typhimurium)为主;10.71%的样品检出志贺菌(Shigella),主要是福氏志贺菌2b(Shigella flexneri 2b)和福氏志贺菌2a(Shigella flexneri2a)。随着肉粉在常温下(20~30℃)储存时间的增加,3个月后菌落总数均大于2×106个/g;随着肉粉中菌落总数的增加,酸价也升高(r=0.97,P0.01)。研究提示,我国饲料用肉粉受微生物污染较严重,易导致腐败变质,也增大了受致病菌危害的风险。     

含有金银花的两种中药制剂微生物限度检查方法的建立

建立含有金银花的2种中药制剂的微生物限度检查方法。按照《中国药典》2020年版(四部)通则非无菌产品微生物限度检查微生物计数法与控制检查法、标准的规定,分别采用常规平皿法、培养基稀释法及薄膜过滤法对含金银花的鼻炎糖浆和退热口服液2种中药制剂的微生物限度与控制菌进行检查及方法学验证研究。结果显示,鼻炎糖浆、退热口服液均有抑菌作用。采用常规平皿法和培养基稀释法测定需氧菌总数,回收率低,不符合回收率要求;采用薄膜过滤法加菌回收率显著高于常规平皿法与培养基稀释法,符合回收率要求。采用常规法进行霉菌和酵母菌总数及大肠埃希菌检查,均符合回收率要求。结果提示,所建立的方法符合《中国药典》2020年版四部通则的相关规定,可用于这2种中药制剂的微生物限度检查。     

一株强抗逆性猪源乳酸菌的筛选及生物学特性研究

本试验从健康仔猪粪便样品中分离纯化得到5株乳酸菌,并应用16S rRNA基因进化分析对其进行种属鉴定。通过对此5株菌进行耐热、耐酸、耐胆盐、耐贮藏性能和抗生素抗性选育,与伤寒沙门氏菌、大肠杆菌以及金黄色葡萄球菌进行混合培养,探究其对大肠杆菌、鸡白痢沙门等病原菌的抑菌效果,最终筛选出一株具有强抗逆性和优良益生特性的屎肠球菌,并进一步对其生长性能和生理生化特性进行了系统研究,为菌株的开发与应用提供理论参考。 [关键词] 仔猪粪便|屎肠球菌|筛选|抗逆性|益生特性     

薄膜过滤法在中药常山散微生物限度检查中的应用研究

为了探讨和建立抗球虫中药常山散的微生物限度检查方法,以大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌及黑曲霉为挑战菌株,采用中国兽药典(2010版)收载的薄膜过滤法考察验证常山散的抑菌活性,并采用验证过的试验条件和方法进行细菌计数、回收率测定及控制菌的检查,对常山散微生物限度检查方法学进行建立和验证试验。结果验证试验证实,采用薄膜过滤法可消除供试品常山散的抑菌活性,可用于建立检查方法;常山散对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌及黑曲霉的加菌回收率均大于70%。控制菌按薄膜过滤法验证检查,试验组、阳性对照组均检出相应的试验菌,阴性对照组和空白对照组均未检出相应的试验菌。表明采用薄膜过滤法处理中药常山散,试验过程复合中国兽药典微生物限度检查法相关规定,可用于常山散细菌、真菌和酵母的计数检验,控制菌检查及微生物限度检查,且操作简单、快速、数据准确可靠。     

不同发酵菌种处理对中草药酵素品质及抑菌效果的影响

为揭示不同发酵菌种处理对中草药酵素品质及抑菌效果的影响，本试验采用自然发酵、乳酸菌发酵、酵母菌发酵、乳酸菌和酵母菌混菌发酵4种方法制备金银花、蒲公英、野菊花酵素，通过感官评价和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基、2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS~+)清除率考查所得酵素产品品质，并检测其对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌和沙门菌的抑制效果。结果显示：3种添加发酵菌种制备的酵素产品感官品质和DPPH自由基、ABTS~+清除率及抑菌效果均高于自然发酵制备的酵素；其中采用乳酸菌发酵制备的中草药酵素产品品质最好，其呈棕红色、鲜亮，有淡淡的酸甜味，口感润滑且后味香醇，与自然发酵产品比，对DPPH自由基、ABTS~+清除率分别提高了36.74%、34.02%,差异显著(P<0.05),对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌和沙门菌的抑菌圈直径分别增加了65.84%、92.80%和148.94%,差异显著(P<0.05)。结果表明：添加0.1 g乳酸菌于37℃发酵15 d制备的金银花、蒲公英、野菊花中草药酵素产品品质最好，且大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌和沙门菌对...     

一株土壤源地衣芽孢杆菌的鉴定及生物学特性研究

试验旨在筛选优质土壤源益生菌菌种资源，为畜牧生产中微生态制剂研发提供候选菌株。试验以北京市郊区农田土壤为材料，经紫外诱变、革兰氏染色和接触酶试验分离并筛选出1株对金黄色葡萄球菌具有明显抑制能力的菌株。通过16S rRNA基因进化分析和种属鉴定，判定该菌为一株地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）。进一步通过耐热、耐酸、耐胆盐和抗生素敏感性检测，发现该地衣芽孢杆菌在85℃处理10 min后存活率高达93.33%,pH为3.0及2.5时对其活性均影响较小，并且在0.3%、1.0%和2.0%的胆盐浓度下培养3 h仍可继续生长，表现出优良的抗逆性。通过与病原菌混合培养以及对多种致病菌的抑菌试验检测，发现该菌株对多种革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌都具有抑制作用。     

3种鼠源致病菌多重PCR检测方法的建立

本研究以沙门菌组氨酸转运操纵子hut基因、肺炎克雷伯菌外膜蛋白Pho E基因以及金黄色葡萄球菌耐热核酸酶nuc基因作为靶基因,建立了同时检测这3种致病菌的多重PCR方法,并对混有3种致病菌的盲肠内容物分别采用传统细菌分离培养法和PCR方法进行检测,同时对混有3种致病菌的粪便样品进行PCR检测。该方法能扩增出目的片段分别为495 bp、333 bp、279 bp。在优化条件下,多重PCR同时检测沙门菌、肺炎克雷伯菌及金黄色葡萄球菌的敏感度分别为1.23 pg、1.9 pg、1.185 ng DNA。分离培养法对沙门菌、肺炎克雷伯菌及金黄色葡萄球菌的最低检出限分别为1×10~2CFU、1×10~0CFU和1×10~2CFU。混合有3种致病菌的盲肠内容物和粪便,经增菌培养后,PCR法的最低检出量均为1×10~0CFU。本研究建立的多重PCR检测方法具有特异性及灵敏度高、操作简单、周期短的优点,适用于实验小鼠多种致病菌的快速检测和监控。     

不同种类中药废弃物和中药复方的体外抑菌试验

为了寻找更为安全高效的动物替抗药物，本试验以3种中药复方和7种中药废弃物为材料，采用K-B纸片法检测抑菌圈直径、二倍稀释法检测最低抑菌浓度(MIC)、平板涂布法检测最低杀菌浓度(MBC),综合评价所选药物对大肠埃希菌、肠炎沙门菌和金黄色葡萄球菌的抑菌效果。试验结果显示：9种药物(除清开灵药渣外)都对金黄色葡萄球菌具有显著的抑菌和杀菌作用，其MIC和MBC值在3.91～125 mg/mL范围内，为金黄色葡萄球菌中度到高度敏感药物；中药复方1和中药复方3对大肠埃希菌的MIC值分别为125 mg/mL和62.5 mg/mL,表现为中度抑大肠埃希菌；忍冬藤和中药复方1对肠炎沙门菌的MIC值都是125 mg/mL,为肠炎沙门菌中度敏感药物。试验结果表明，3种中药复方和6种中药废弃物(除清开灵药渣外)可开发成防治金黄色葡萄球菌感染性疾病的药物，中药复方1和中药复方3可预防和治疗禽畜大肠埃希菌感染，而中药复方1和忍冬藤可防治畜禽因感染肠炎沙门菌引起的病症。     

5种中药口服液微生物限度检查方法的探索与思考

探索和建立5种中药口服液微生物限度检查方法。依据《中华人民共和国药典》2020年版四部通则1105、1106及1107中的方法,对5种中药口服液中微生物计数及控制菌的检查方法进行验证。结果显示,麻杏甘草口服液、五根汤口服液、补血催乳口服液的需氧菌总数检查宜采用平皿法,而荆防解感口服液、银芦感冒口服液对试验菌枯草芽孢杆菌有抑制作用,故需氧菌总数检查宜采用薄膜过滤法;5种口服液均宜采用常规平皿法进行霉菌与酵母菌总数检查,大肠埃希菌检查宜采用常规法。微生物计数法检查中试验组所加的5种试验菌回收比值(R)均为0.5≤R≤2.0;大肠埃希菌检查中试验组均能检出所加试验菌相应的反应特征。本研究所建立的微生物限度检查方法准确可靠,但荆防解感口服液、银芦感冒口服液因对试验菌株中的枯草芽孢杆菌有抑制作用,需使用成本较高且操作烦琐的薄膜过滤法,如果只用铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、黑曲霉菌和白色念珠菌4种有致病性的试验菌株进行方法验证,则荆防解感口服液和银芦感冒口服液的检查方法均可使用简单易操作的平皿法。故有必要探索符合中药制剂特点的微生物限度检查指导原则。     

一株解淀粉芽孢杆菌的益生特性及抑菌性研究

本试验旨在研究自筛解淀粉芽孢杆菌DHN04的生长曲线、人工胃肠液、pH及猪胆盐耐受性，并研究其抑菌特性及抗生素敏感性。试验采用生长速率法测定该菌生长曲线，活菌计数法测定人工胃肠液耐受性、耐酸性和耐胆盐等特性，牛津杯法测定抑菌活性，药敏试片测定抗生素敏感性。结果表明，解淀粉芽孢杆菌DHN04在经过4~6 h的缓慢生长期后，进入对数生长期，12~24 h为该菌的稳定生长期；在人工胃液和人工肠液中保持3 h后存活率分别为55.55%和53.33%；pH 2.0时该菌存活率为14.14%，随着酸性的减弱，存活率逐渐上升，在pH 7.0时存活率可以达到93.85%；随着胆盐浓度增加，解淀粉芽孢杆菌的存活率逐渐下降，相同的胆盐浓度，24 h的存活率低于3 h。解淀粉芽孢杆菌对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌及四联球菌均具有一定的抑制作用；对抗生素阿莫西林耐药。综上，解淀粉芽孢杆菌能够快速活化，对人工胃肠液、胆盐及pH的耐受性良好，对大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌等具有一定的抑制作用，对阿莫西林耐药。因此，解淀粉芽孢杆菌DHN04可作为一种潜在的益生菌菌株应用于畜禽养殖生产。     

中药常山口服液微生物限度检查方法的验证

本研究旨在验证抗球虫中药常山口服液的微生物限度检查法,为其质量控制、研发新兽药奠定基础。试验通过直接接种法考察常山口服液的抑菌活性,并采用验证过的试验条件和方法（常规法）进行细菌计数、回收率测定及控制菌的检查,建立常山口服液微生物限度检查方法,并进行验证试验。结果证实常山口服液无抑菌作用或抑菌作用极其微弱,可采用常规法建立检查方法。常山口服液对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌及黑曲霉的加菌回收率均大于70%,且供试品和所用稀释剂对此结果无干扰。按常规方法对大肠埃希菌、乙型副伤寒沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌进行控制菌验证检查发现,试验组、阳性对照组均检出相应的试验菌,阴性对照组和供试液组均未检出相应的试验菌。综上所述,常规法可用于常山口服液细菌、霉菌和酵母菌的计数检验,控制菌检查及微生物限度检查,试验过程符合微生物限度检查法规定,且方法简便,可操作性强,结果准确可靠。     

不同消毒模式对网上平养肉鸡舍空舍期微生物种类和数量的影响

为了解不同消毒模式对网上平养肉鸡场空舍期舍内微生物种类和数量的影响,采用两种消毒模式(Ⅰ和Ⅱ)对山东某大型网上肉鸡场空舍期禽舍进行消毒,用选择培养基对消毒前后空气和物体表面的菌落总数、大肠菌群数、大肠杆菌、沙门菌、金黄色葡萄球菌和霉菌进行了检测。结果表明:两种消毒模式对空气中微生物消毒效果各有优缺点,消毒模式Ⅱ对菌落总数和金黄色葡萄球菌的消毒效果好,消毒模式Ⅰ对霉菌消毒效果好,且对物体表面微生物消毒效果比消毒模式Ⅱ好,消毒模式Ⅰ消毒后微生物数量除菌落总数外,其余均未检出。因此推荐的消毒模式为:第一次,冲洗完鸡舍用0.5%复合酚(苯酚、醋酸、十二烷基苯磺酸)和1∶100安灭杀(15%戊二醛+10%COCO专利季胺盐)全面喷洒;第二次,采用固体甲醛200 kg/舍熏蒸消毒24 h。