红芽芋茎尖低温疗法脱毒的RT-PCR检测

为了了解红芽芋茎尖低温疗法再生苗的脱毒情况,本研究对其进行芋花叶病毒(DsMV)、黄瓜花叶病毒(CMV)和芋羽状斑驳病毒(TFMoV)的RT-PCR检测。大田苗均检出芋花叶病毒(DsMV)和黄瓜花叶病毒(CMV);对于芋花叶病毒(DsMV),玻璃化法低温疗法脱毒率为50%,包埋玻璃化法低温疗法脱毒率为100%,包埋脱水法低温疗法脱毒率为50%,小滴玻璃化法低温疗法脱毒率为75%,茎尖常规培养脱毒率为75%,说明包埋玻璃化法低温疗法有利于脱除芋花叶病毒;对于黄瓜花叶病毒(CMV),玻璃化法低温疗法脱毒率和包埋玻璃化法低温疗法脱毒率均为100%,包埋脱水法低温疗法脱毒率为75%,小滴玻璃化法低温疗法脱毒率为75%,茎尖常规培养脱毒率为50%,说明4种低温疗法脱毒均有利于脱除黄瓜花叶病毒,但玻璃化法低温疗法和包埋玻璃化法低温疗法两种脱毒方式效果更佳。4种低温疗法再生苗、茎尖常规培养再生苗和大田苗中均未检出芋羽状斑驳病毒(TFMoV)。究其原因,可能采用的引物为甘薯羽状斑驳病毒引物,而甘薯和芋头是不同物种,可能病毒序列不一样,且NCBI基因库里没有FMo V的任何信息,完全没有参考序列设计引物,还有待于进一步研究。本实验可为红芽芋脱毒苗的规模化生产提供一定技术基础和理论依据。     

脱病毒对芋产量及构成因素的影响

芋又名芋头、芋艿 ,是世界各地广为栽培的蔬菜兼粮食作物。在长期利用球茎进行无性繁殖过程中 ,栽培芋已普遍受到病毒侵染 ,目前报道的芋病毒中分布最广、危害最大的是芋花叶病毒 ,感染这种病毒的植株生活力降低 ,球茎大小、数量和品质下降 ,其产量损失近 60 %。本试验以北方旱     

江西铅山红芽芋低温疗法脱毒苗遗传稳定性的SSR检测

为了检测江西铅山红芽芋低温疗法脱毒苗是否存在遗传变异,本研究采用SSR分子标记技术与毛细管电泳技术相结合的方法来检测江西铅山红芽芋低温疗法脱毒苗的遗传稳定性。结果表明,根据PAGE检测从38对引物中选出10对引物(P10,P11,P18,P23,P24,XP3,XP5,XP7,XP8,XP10);10对引物的30个样本(包括低温疗法脱毒苗和大田苗)分型基本相同,且其多样性指数较低,观测纯合度和期望纯合度也均高于观测杂合度和期望杂合度;30个样本的遗传距离大部分均为0,少量为0.032 3、0.033 9或0.198 6,遗传相似系数大部分均为1,少量为0.968 2,表明遗传分化程度极低;按照UPGMA法进行聚类分析,30个样本聚为一类。以上研究表明,江西铅山红芽芋低温疗法脱毒苗无遗传变异,低温疗法脱毒可保证其遗传稳定性。本研究可为江西铅山红芽芋低温疗法脱毒提供遗传稳定性方面的依据。     

红芽芋-稻-菜高效种植技术

以前,上饶市大部分耕地是以稻一稻种植模式为主,种植结构单一,经济效益低下,全年每hm^2净收入不到1.5万元。随着获国家绿标的铅山“紫夷”、“鹅湖山”牌早熟、优质红芽芋越来越受上海等城市市民的青睐和红芽芋-稻-菜等高效种植模式的推广,种植效益大幅度提高,现全年每hm^2净收入可达7.5万元以上,以铅山县紫溪乡、湖坊乡为代表,农民种芋的积极性空前高涨。在县农业主管部门的牵头和大力支持下,芋农自发成立了铅山县红芽芋农村合作社。     

红芽芋无公害高产栽培技术

红芽芋属天南星科草本植物。按种芽的颜色可分为红芽芋、白荷芋和紫荷芋3个品种。红芽芋是上饶著名土特产,品质风味居芋类之首,其独特之处是芽红、肉质白色、易煮烂,煮熟后肉质细致松滑、味甘可口,而且淀粉含量高、含粗蛋白质和各种维生素。是上饶市外销的主要优质蔬菜之一,产品销售到上海、杭州、广州等地,有较高的声誉。2004年铅山、广丰、玉山和上饶等县种植面积达6666·7hm²,产量3·0万~4·5万kg/hm²,经济收入4·5万~7·5万元/hm²,效益可观,种植优质无公害红芽芋已成为农村发展特色经济,农业增收的主要产业。红芽芋根系发达,发棵较强,喜欢湿润,较耐湿、怕干旱,病虫危害较少,一般打药少,食用……     

红芽芋低温疗法脱毒苗遗传变异的AFLP检测

为探明红芽芋低温疗法脱毒苗的遗传变异,本研究利用AFLP荧光标记和毛细管电泳分离技术对其进行分析。研究表明,利用10对引物组合对江西铅山红芽芋4种低温疗法脱毒苗和大田苗30个样本进行扩增,扩增后的多态性位点数在49~70范围之内。多态性百分率最低是E36M72,为89.23%,多态性百分率最高是E59M66,为100%;观测等位基因数Na在1.892 3~2.000 0的范围之内,有效等位基因数Ne在1.616 6~1.908 2的范围之内;Nie's基因多样度H的范围为0.357 4~0.473 8,Shannon信息指数I的范围为0.526 8~0.666 2;依据其荧光AFLP扩增结果进行编码组合,构建了江西铅山红芽芋AFLP组合编码指纹图谱。4种低温疗法脱毒苗和大田苗30个样本均出现了AFLP变异位点,每个样本变异位点平均出现的数量为8.73~23.30;4种低温疗法脱毒苗和大田苗30个样本的遗传相似系数为0.471 8~0.796 2,样本间的相似度不是很高,低温疗法脱毒存在一定程度上的变异。在遗传相似系数0.605 1处,4种低温疗法脱毒苗和大田苗30个样本被分为4大类。第Ⅰ类包括样本1和样本30,第Ⅱ类包括样本27和样本29,第Ⅲ类包括样本26和样本28,剩下的样本均归于第Ⅳ类。表明低温疗法脱毒造成了江西铅山红芽芋一定程度的遗传变异。本试验结果为江西铅山红芽芋茎尖低温疗法脱毒提供一定的理论依据。     

红芽芋提纯复壮及地膜覆盖栽培技术

为了进一步提高和改善红芽芋的产量和品质,加速推进优化红芽芋规模生产,提高永泰县优质红芽芋生产能力与产业竞争力,促进农民增收。从当地红芽芋品种退化因素、品种复壮技术、高产栽培技术等方面总结出一套地膜覆盖高产栽培技术。     

脱毒红芽芋不同世代生长特性及产量分析

为确定脱毒红芽芋生产用种芋留种适宜世代,提高其繁殖系数,降低繁殖成本,以脱毒红芽芋原原种、原种、第一代、第二代、第三代、第四代、第五代和第六代等8个世代的脱毒种芋为试验材料,比较分析了脱毒红芽芋不同世代的生长特性和产量差异。结果表明:红芽芋不同世代中,原原种和原种的生长发育较差,表现为株高较低,叶片较小,发棵数多;随着世代数的增加,子芋产量出现先上升后下降趋势,其中第五代、第六代的子芋和单株产量下降较为显著。因此,综合分析,在生产上适宜选择脱毒红芽芋第三至四代作为种芋留种。     

山东葫芦科蔬菜上病毒病种类检测及黄瓜花叶病毒分离物的亚组鉴定

为了检测和鉴定山东地区葫芦科蔬菜上病毒病种类,从山东诸地11个蔬菜种植区采集了867个葫芦科蔬菜疑似感病样品。利用黄瓜花叶病毒、黄瓜绿斑驳花叶病毒、西瓜花叶病毒、烟草花叶病毒、小西葫芦黄花叶病毒、南瓜花叶病毒、甜瓜黄斑病毒、瓜类褪绿黄化病毒、李属坏死环斑病毒及甜瓜坏死斑点病毒等特异性引物对疑似感病样品分别进行RT-PCR检测,各病毒检出率分别为34.8%,10.4%,20.0%,41.7%,27.0%,7.8%,2.6%,1.7%,0,0.9%。表明除PNRSV外,其他9种病毒在山东各地均有发生,且CMV和TMV发病率较高,2种或2种以上病毒复合侵染也很普遍。同时为明确山东地区CMV分离物的株系分化状况,选取11个地区有代表性的CMV阳性样品,测定其外壳蛋白(Coat protein,CP)和RNA3核苷酸序列并进行序列比对和进化分析,结果显示侵染山东地区葫芦科蔬菜的CMV分离物均属于IB亚组,与韩国分离物As(AF013291)相似性最高,未发现其他株系。     

红芽芋低温疗法脱毒苗遗传稳定性同工酶检测

本研究对江西铅山红芽芋低温疗法脱毒苗的遗传稳定性进行同工酶检测。结果表明,SOD同工酶酶谱共有4条酶带,Rf分别为0.196、0.534、0.589和0.625,Af均为100%;POD同工酶酶谱共有7条酶带,Rf分别为0.018、0.053、0.228、0.263、0.316、0.351和0.632,Af均为100%;CAT同工酶酶谱只有1条酶带,Rf为0.145,Af为100%;SOD、POD和CAT同工酶的多态性百分率(P)均为0,有效等位基因数(Ne)均为1.000;SOD、POD和CAT同工酶酶谱带的遗传相似系数均为1.000,聚类分析显示低温疗法脱毒苗与大田苗均在同一组,表明低温疗法脱毒苗的遗传稳定性高,无遗传变异。本试验结果可为江西铅山红芽芋低温疗法脱毒苗的遗传稳定性提供一些同工酶方面的依据。     

应用RNA沉默技术获取抗黄瓜花叶病毒(CMV)和烟草花叶病毒(TMV)转基因烟草

RNA沉默是迄今最为有效的抗病毒策略,利用该策略不但能获得免疫转基因植株,且所得植株不易与其他病毒基因重组或异源包壳、生物安全性较高。将本实验室已构建的携带有烟草花叶病毒(TMV)部分移动蛋白基因(ΔMP)和黄瓜花叶病毒(CMV)部分复制酶基因(ΔRep)反向重复结构的植物表达载体pBIN438-MP-Rep(i/r),用农杆菌浸润法转化普通烟草品种K326,共得196株转化植株,经卡那霉素筛选和PCR检测发现128株为阳性转基因株;PCR-Southern和RT-PCR分析表明外源基因已整合到烟草基因组并在转录水平上得到表达;ELISA结果显示20.3%的转基因植株对CMV和TMV复合侵染表现免疫性。本结果为利用RNA沉默技术进行植物抗多种病毒育种提供重要数据,为防治其他多种病毒复合侵染提供借鉴。     

日本芋品种茎尖离体快繁技术研究

以从日本引进的名优芋品种石川早生、虾籽芋、叶用芋为材料,进行了茎尖离体快繁技术研究.结果表明:茎尖大于 05mm,成活率超过 80%.激素种类及浓度对芋芽分化、试管苗复壮和生根起着关键作用,在 MS NAA 02mg/L基本培养基中,附加 TDZ 01mg/L或 BA 10mg/L,叶用芋芽分化效果好, TDZ 05mg/L或 BA 20mg/L时有利于虾籽芋快繁,而 TDZ 05mg/L或 BA 40mg/L浓度下石川早生不定芽月增殖系数最高.添加 KT,可明显减缓试管苗的分化速度,但适合于芋试管苗生根和复壮.在 KT 10、20、40mg/L不同浓度下, 3种芋40d的生根率均可达100%.经大田移栽,成活率 100%, 3种试管植株均生长旺盛,保持了原有的优良品质和特性.     

基因芯片技术检测黄瓜花叶病毒、烟草花叶病毒和马铃薯Y病毒

黄瓜花叶病毒、烟草花叶病毒和马铃薯Y病毒是世界性分布的重要植物病毒,对农业生产危害较大.农作物感病多为复合侵染,症状表现较为复杂,急需建立快速、准确、能够一次检测多种病毒的检测方法.本研究根据3种病毒的外壳蛋白基因序列,设计引物和探针,制备基因芯片;用Cy3标记下游引物,RT-PCR扩增产物与芯片杂交,荧光扫描仪检测并...     

RT-PCR快速检测3种烟草病毒技术

为了快速提取植物叶片的总RNA,并对烟草病毒进行检测,对提取及检测方法进行了研究。结果表明：以黄瓜叶片、白肋烟叶片为试材,用TRIzol试剂盒在1 h内提取到纯度高、完整性好的总RNA。设计烟草花叶病毒、黄瓜花叶病毒和马铃薯X病毒的特异性引物,RT-PCR检测,从感病叶片中分别扩增出313,326,392 bp的目的片断,而健康叶片中无此扩增带。构建这3种病毒重组质粒,对核苷酸序列与GeneBank中报道的进行比较,同源性分别为99.36%,97.55%,98.21%。用这种方法快速、可靠,为烟草病毒的检测提供科学依据。     

进境百合种球南芥菜花叶病毒的检测及分子鉴定

本研究根据南芥菜花叶病毒(Arabis mosaic virus,ArMV)CP基因序列,设计并合成了特异性巢式PCR检测引物,通过第1轮RT-PCR和第2轮PCR扩增得到预期的930bp和260bp的条带,扩增序列与GenBank中登录的外壳蛋白基因存在86%～97%的同源性.结果表明百合上分离到的病毒为ArMV,进一步研究也证明巢式PCR灵敏度与普通RT-PCR相比高出了103倍.     

RT-PCR快速检测3种烟草病毒技术

为了快速提取植物叶片的总RNA,并对烟草病毒进行检测,对提取及检测方法进行了研究.结果表明:以黄瓜叶片、白肋烟叶片为试材,用TRIzol试剂盒在1 h内提取到纯度高、完整性好的总RNA.设计烟草花叶病毒、黄瓜花叶病毒和马铃薯X病毒的特异性引物,RT-PCR检测,从感病叶片中分别扩增出313,326,392 bp的目的片断,而健康叶片中无此扩增带.构建这3种病毒重组质粒,对核苷酸序列与GeneBank中报道的进行比较,同源性分别为99.36%,97.55%,98.21%.用这种方法快速、可靠,为烟草病毒的检测提供科学依据.     

宁糯芋1号茎尖离体培养条件优化

为丰富福建省优质芋种源，加快优良品种推广应用，以‘宁糯芋1号’块茎顶芽和侧芽为外植体，运用茎尖分生组织培养获得了不定芽。在正交试验基础上，根据响应面分析法中心组合试验，以不定芽增殖系数为响应值，对TDZ、温度2因素进行优化，结果发现：与6-BA相比，TDZ更适于芋茎尖诱导丛芽，在MS培养基中附加0.1~0.2 mg/L的TDZ能显著促进芋茎尖的萌动，成苗率达76.7%~80.0%，经芋花叶病毒(DMV)检测试剂盒的ELISA检测表明脱毒率为90%；响应面优化结果表明，‘宁糯芋1号’不定芽继代增殖的最佳培养条件为 MS+TDZ0.31 mg/L，培养温度30.32℃，增殖系数预测值为9.08，验证得到的实际值为8.86。利用响应面方法可有效优化‘宁糯芋1号’不定芽继代增殖培养条件。     

芋球茎贮藏物质积累与食味品质形成的关系

为探明芋球茎贮藏物质积累与食味品质的关系，本研究以靖江‘香沙芋’和泰兴‘香荷芋’为实验材料，运用树脂半薄切片、顶空气相色谱-质谱联用等方法比较了两芋品种球茎中淀粉和挥发性成分等物质的积累情况，并进行食味品质鉴定。结果表明，‘香荷芋’含水量较高，而总淀粉含量和直链淀粉含量较低。‘香荷芋’的淀粉平均粒径明显小于‘香沙芋’，前者淀粉粒度分布峰值为1～2μm，后者为2～3μm。‘香荷芋’中主要检测到10种挥发性成分，其中芳樟醇比例高达48.82%，‘香沙芋’中检测到28种，但大部分属于无色无味的物质。食味品质分析发现‘香荷芋’气味得分较高，但粘度、硬度、外观、口感得分都较低。综上所述‘，香荷芋’挥发性香味物质含量多，使得其气味评分高；‘香沙芋’含水量低、淀粉和直链淀粉含量高、淀粉粒径大使得其硬度、口感和和综合得分高。该结果说明芋球茎含水量、总淀粉含量、直链淀粉含量、挥发性成分含量等指标都影响食味品质的形成。     

银川、徐州和赤峰地区番茄病毒病种类的鉴定

对2021年发生在银川、徐州、赤峰的番茄叶片出现黄绿相间的斑驳、叶片皱缩卷曲、植株矮化等疑似番茄病毒病的症状进行了鉴定。利用12种番茄病毒病的特异性引物进行RT-PCR检测，发现所检测的不同地区样品中，侵染番茄最多的病毒为黄瓜花叶病毒（CMV），检出率为60.00%，其次是番茄斑萎病毒（TSWV），检出率为46.67%。通过核苷酸序列比对发现，检测出的这2种病毒与CMV(AJ131619.1)和TSWV(MK318839.1)同源性最高，相似度分别为97%和99%。同时，基于CMV和TSWV基因序列构建系统发育树表明，宁夏银川地区番茄病毒样本为CMV和TSWV复合侵染。     

大棚红星芋盆花栽培

红星芋是茵芋的商品名，为芸香科茵芋属植物，常绿花灌木。原产于我国，主要分布于长江中下游地区及华南一带，目前在浙南、闽南及赣东南等地区有野生种类生长。荷兰、比利时、法国等国家多年前从中国引进种源，经驯化改良，已培育出多个优良品种，并推广到欧洲及其他适宜种植地区。