油菜RAPD反应体系的优化研究

针对RAPD反应体系中Taq聚合酶，dNTP和引物这3个影响较大的因素，设计了一组3因素3水平试验，根据试验结果，筛选了油菜random amplified polymorphic DNA(RAPD)反应体系中3因素的最佳浓度配比，即Taq 1.6U,dNTP 0.2mmol/L，引物0．3umol/L。     

苦楝RAPD反应体系的优化

以苦楝叶片提取的基因组DNA为材料,通过单因素多水平梯度试验,筛选DNA模板,Mg^2＋,Taq DNA聚合酶,dNTPs和随机引物的浓度及用量,建立苦楝RAPD技术分析体系.结果表明：当基因组DNA浓度为60 ng/μL,镁离子浓度为3.0 mmol/L,dNTP浓度为0.25 mmol/L,引物浓度为0.30μmol/L,Taq DNA聚合酶用量为1 U/20μL,反应体系总体积20μL时,出现可辨认的清晰谱带.其扩增程序为：94℃预变性2 m in;然后38个循环（94℃变性30 s,37℃退火1 min,72℃延伸80 s）;最后72℃延伸8 min,4℃保存.     

樟树RAPD反应体系的优化

以樟树叶片提取的基因组DNA为材料,对影响其RAPD-PCR各种反应条件的因子进行研究。结果表明:PCR反应时,总反应液20μL中基因组DNA浓度为8 ng/μL,镁离子浓度为2.0 mmol/L,dNTP浓度为0.2 mmol/L,引物浓度为0.2μmol/L,Taq DNA聚合酶用量为1 U/(20μL)时,出现可辨认的鲜明谱带,为RAPD分析应用于樟树遗传多样性研究和良种选择打下良好的基础。     

番茄RAPD反应体系的优化

以醋栗番茄为材料,对影响番茄RAPD分析的主要因素进行系统的优化研究。试验结果表明,20μL反应体系中,最佳的组成是:10×buffer缓冲液2μL,1.5mmol.L-1MgCl2,0.15mmol.L-1dNTPs,15ng.μL-1引物,1U的TaqDNA聚合酶以及15ng的模板DNA。     

草莓RAPD反应体系的优化

以草莓幼叶为试材,进行RAPD反应扩增体系的优化.对模板、dNTP、引物、MgCl2和Taq DNA聚合酶等条件进行优化.结果表明,在20 μL的反应体系中,以DNA模板用量25 ng,引物用量为0.15 μmol·L-1,dNTP用量为120μmol·L-1,Mg2+用量为2.5 mmol·L-1,Tap DNA聚合...     

枸杞属RAPD反应体系优化

以枸杞属植物为材料,进行RAPD反应体系的优化.结果表明,在25 μl总反应体系中,以DNA模板量为30 ng,引物0.6 μmol/L,dNTP 150 μmol/L,Mg2+ 2.5 mmol/L,TaqDNA聚合酶0.75 U,10×反应缓冲液2.5 μl为最优反应条件.PCR的反应程序为:94 ℃预变性2 min,94 ℃变性20 s,36 ℃退火30 s,72 ℃延伸1 min,5个循环;94 ℃变性20 s,40 ℃退火30 s,72 ℃延伸1 min,40个循环;72 ℃延伸10 min.应用优化后的反应体系获得的RAPD指纹图谱带型清晰,重复性好.     

高山红景天RAPD反应体系的优化研究

[目的]筛选适合高山红景天的RAPD-PCR反应体系。[方法]以药用植物高山红景天雌株的叶片为材料,采用改良的CTAB法提取基因组DNA,并对影响RAPD扩增反应的各因素进行优化。[结果]结果表明,适合高山红景天的RAPD反应体系为:25μl总体积中含DNA模板20 ng,Mg2+1.5 mmol/L,引物10 pmol,dNTP 100μmol/L,Taq DNA聚合酶1.0 U。[结论]CTAB法在高山红景天可获得质量较好的基因组DNA。     

桃属植物RAPD反应体系的优化

以‘Yuuzora’、珲春桃、有明及其F1杂种群体为试材,对桃属植物的RAPD反应体系进行优化,结果表明:25μL总反应体积中含模板DNA10~200ng,引物20pmol,dNTP150μmol/L,MgCl21.5mmol/L,国产TaqDNA聚合酶1unit,10×反应缓冲液2.5μL,其余用重蒸馏水补充.热循环条件为:预变性94℃,5min,变性94℃,1min,退火36℃,1min,延伸72℃,2min,共50个循环;72℃最终延伸5min.应用优化后的反应体系获得的RAPD指纹图谱带型清晰、重复性好.     

大字杜鹃RAPD反应体系的优化

以大字杜鹃为材料,以改进的CTAB法提取大字杜鹃叶片总DNA,分别就模板DNA浓度,引物浓度,DNTP浓度,TaqDNA聚合酶量及镁离子浓度对大字杜鹃RAPD反应结果的影响进行研究．通过对各因子的组合比较,建立了大字杜鹃RAPD反应的优化体系,即总反应体积为25pL,其中包括10×Taq酶配套缓冲液2．5pL,模板DNA浓度50mg／L,引物浓度0．5μmol／L,dNTP浓度0．15mmol／L,TaqDNA聚合酶1U,Mg^2＋浓度2．0mmol／L,其余用重蒸馏水补足．扩增程序为94℃预变性5min,94℃变性1min,38℃退火40S,72℃延伸2min,共41个循环,72℃延伸7min．     

鸭茅RAPD分子标记反应体系优化

以鸭茅基因组DNA为模板,对RAPD反应体系中的一些重要参数进行摸索和优化实验,建立了一套鸭茅RAPD分子标记的最优化反应体系。即20μl体系中,最终浓度:Mg2+2.0mm/L,dNTP200μmol/L,Taq酶1.0U,引物浓度0.5pmol/μl,模板DNA量为60ng。     

晒烟RAPD反应体系的优化

以晒烟苗期幼叶为试材,通过设置不同的模版DNA、引物、dNTP、Mg2+及Taq DNA聚合酶的浓度梯度,优化RAPD的反应条件,建立1个适合晒烟的比较稳定的RAPD反应体系。结果表明,适合晒烟RAPD的反应体系是在25μL反应体系中,含模板40ng;引物UBC-388 1.5μL;Mg2+1.6mM;dNTP 0.2mM;Taq酶1U。     

七彩鲑RAPD反应体系的构建及优化

以七彩鲑尾鳍为试验材料,对影响七彩鲑随机扩增多态性DNA(RAPD)扩增体系的重要参数进行了优化,建立了七彩鲑RAPD的最适反应体系.七彩鲑RAPD的最佳反应体系为:反应体系25μL,模板DNA的质量浓度4 ng/μL,Mg2+浓度2.0 mmol/L,dNTP浓度0.5mmol/L,引物浓度0.5μmol/L,Taq...     

大蒜RAPD反应体系的建立及优化

该试验以弥渡紫皮大蒜叶片基因组DNA为试材,采用不同浓度MgCl2、引物、dNTP、TapDNA聚合酶对大蒜的RAPD体系进行单因素反应条件优化.结果表明,25μL总反应体积中,最佳浓度配比为模板DNA 40ng,MgCl2 2.0 mmol/L,引物12 pmol,dNTP 50μmol/L,Taq DNA聚合酶1 unit,10×反应缓冲液2.5μL.扩增程序为94℃变性3 min,94℃变性30 s,37℃退火30 s,72℃延伸1 min,共35个循环,72℃最终延伸10 min.     

甘薯叶RAPD反应条件的优化

以甘薯叶为试材，系统分析了MgCl2浓度，dNTP浓度，随机引物用量，模板DNA用量，TaqDNA聚合酶浓度对RAPD反应的影响，建立了一套稳定的RAPD反应体系，该体系反应体积为25μl；含2.5μlPCRBuffer,MgCl2浓度为3nmol/μl/dNTP浓度为0.4nmol/μl，随机引物用量为40ng，模板DNA用量为40ng,TaqDNA聚合酶浓度为0.25U。     

苦豆子RAPD反应体系的优化

以苦豆子基因组DNA为模板,采用单因素递进筛选和全面正交设计相结合的方法,获得苦豆子RAPD扩增反应的优化体系.结果表明:在20μL反应体系中,DNA模板20 ng,引物浓度为30μmol/L,Mg2+浓度为50μmol/L,Taq DNA聚合酶2.5 U/μL,dNTP浓度为5 mmol/L,10×PCR Buffer 2.0μL.优化后的体系扩增产物稳定,条带清晰.利用随机引物09M27412对5份苦豆子DNA进行扩增,证实该体系重复性好,结果稳定,可作为苦豆子遗传多样性分析的1个稳定体系.     

东北刺人参RAPD反应体系的优化

以东北刺人参试管苗叶片为材料,建立东北刺人参RAPD反应优化体系.结果表明:20.0μL反应体系含250.0μmol/L dNTP,2.0μmol/L MgCl2,1×Buffer,0.3μmol/L引物,10.0 ng DNA模板,1.5 U Taq DNA聚合酶,9.8μL ddH2O;扩增反应程序为:94℃预变性5min,94℃变性45 s,36℃退火1 min,72℃延伸1.5 min,40个循环,最后72℃延伸7 min时获得的RAPD指纹图谱带型清晰、重复性好.     

人参黑斑病菌RAPD反应体系的优化

采用改良的CTAB法提取人参黑斑病菌的基因组DNA,建立人参黑斑病菌RAPD反应的体系.最佳体系容积为25μL,其中包括10×Taq配套缓冲液2.5μL,模板DNA 20 ng/μL,引物15 pmol/L,dNTP 150μmol/L,Taq DNA聚合酶1 U,Mg2+1.5 mmol/L,其余部分用DW补充.PCR扩增程序为:94℃预变性5 min,94℃变性1 min,40℃退火1 min,72℃延伸2 min,40次循环,72℃延伸7 min.     

珍稀濒危植物连香树RAPD反应体系的优化

按照L25（5^6）的正交试验设计方法,对珍稀濒危植物连香树RAPD反应20止体系中Mg^2＋浓度、dNTPs浓度、10×Buffer缓冲液用量、Taq酶用量、模板浓度和引物浓度的不同梯度组合进行了筛选。在此基础上对退火温度、退火时间和循环次数等条件进行了优化。最后得到优化的20μl连香树RAPD反应体系为：25mmol／L Mg^2＋2μl,dNTPs0．4μl,1U的TaqDNA酶1μl,10×Buffer缓冲液2．5μl,0．5OD引物0．8μl,约25ng模板0．6μl。优化的退火温度为37℃,退火时间为15s,循环次数为40次。