茶叶中东莨菪素和东莨菪苷的测定及相关基因表达

东莨菪素和东莨菪苷是香豆素类化合物,具有多种生物活性,是传统中药丁公藤类生药的主要活性成分.茶树多酚、生物碱等次生代谢物丰富,但有关东莨菪素和东莨菪苷代谢相关的研究还鲜有报道.本研究建立了利用高效液相色谱测定茶叶中东莨菪素和东莨菪苷的检测方法,东莨菪素的平均回收率为93.5%,相对标准偏差(RSD)为2.64%;东莨菪苷的平均回收率为91.7%, RSD为3.32%.利用该方法检测了不同发育时期新梢(鱼叶期到一芽三叶期)、不同处理(茶尺蠖为害和低温胁迫)叶片和不同品种/单株叶片中东莨菪素和东莨菪苷的质量分数变化.结果表明,茶树新梢中东莨菪苷的质量分数高于东莨菪素,并且其质量分数随新梢成熟度增加而升高,而东莨菪素的质量分数变化无统计学意义;东莨菪素和东莨菪苷的质量分数与茶树品种遗传差异相关,其中东莨菪素质量分数为18.34～50.88μg/g,东莨菪苷质量分数为25.84～80.76μg/g;东莨菪素和东莨菪苷的质量分数受低温和茶尺蠖胁迫的影响差异无统计学意义.对不同发育阶段茶树新梢中东莨菪苷生物合成相关的基因表达水平进行检测,结果表明,合成通路上游基因的表达模式与东莨菪苷的积累模式间不...     

东莨菪内酯对家蚕中肠组织GSTs活性的影响

[目的]探讨东莨菪内酯对家蚕中肠组织谷胱甘肽S-转移酶（GSTs）活性的影响,为桑园使用东莨菪内酯防治虫害的安全性及家蚕抗性品系选育提供理论依据.[方法]采用毒叶法对家蚕进行添毒,测定东莨菪内酯对家蚕中肠组织GSTs活性的影响,并通过离体抑制试验求出东莨菪内酯对GSTs的抑制中浓度（IC50）.[结果]摄食不同浓度东莨菪内酯（0.026～0.104 mol/L）处理桑叶的家蚕表现出相似的中毒症状（吐液和拒食）,但在添毒36h后中毒症状完全消失.相对于正常的家蚕,摄食东莨菪内酯处理桑叶后家蚕中肠组织的GSTs比活力呈前期降低、中期升高、后期降低的变化趋势.不同浓度（0.001～0.016 mol/L）的东莨菪内酯均显著抑制家蚕中肠组织离体GSTs活性,且抑制率随东莨菪内酯浓度的增加而增加.东莨菪内酯对家蚕中肠组织GSTs的IC50为0.00474 mol/L.[结论]东莨菪内酯可抑制家蚕中肠组织GSTs活性.     

东莨菪内酯对家蚕乙酰胆碱酯酶活性的影响

用不同浓度天然产物东莨菪内酯处理桑叶饲喂家蚕(Bombyx mori)后,通过测定家蚕头部乙酰胆碱酯酶(AChE)活性,研究东莨菪内酯对家蚕的影响。结果表明,12 h时家蚕出现摆头、吐液等轻微中毒症状,24 h时中毒症状减轻,48 h时中毒症状消失,家蚕恢复正常;5龄第三天家蚕饲喂浸过不同浓度东莨菪内酯的桑叶后,头部AChE比活力变化趋势与对照变化趋势相反,且除了药后24 h时的比活力高于对照外,其余时间段比活力均显著低于对照,表现为抑制作用;在一定浓度范围内,东莨菪内酯对家蚕头部离体AChE活性的抑制作用呈剂量效应关系,且抑制率随东莨菪内酯浓度的升高而升高。5.0×10-2、2.5×10-2mol/L东莨菪内酯对家蚕头部离体AChE活性的抑制率分别达到99.4%、90.6%,当东莨菪内酯浓度小于5.0×10-4 mol/L时,其对家蚕头部离体AChE活性的抑制趋势逐渐变缓,抑制中浓度IC50为4.03×10-3mol/L。     

HPLC法测定一匹绸中东莨菪苷和东莨菪内酯的含量

建立了一匹绸中东莨菪苷和东莨菪内酯的含量测定方法。色谱柱为ODS-C18,用甲醇-0.2%磷酸梯度洗脱,流速为0.8 m L/min,柱温30℃,检测波长为346 nm。东莨菪苷、东莨菪内酯0.019 2~0.096 0mg/m L(r=0.999 9)、0.004 48~0.022 40 mg/m L(r=0.999 5)呈现良好的线性关系,方法学验证结果符合要求。本方法简便准确,精密度和重复性好,可作为一匹绸药材的含量检测方法。     

山莓东莨菪内酯的提取工艺

为更好地开发利用山莓的食药用价值,以东莨菪内酯提取率为指标,采用正交试验法,考察乙醇浓度、乙醇用量、超声时间、超声功率对东莨菪内酯的提取率。结果表明:山莓中东莨菪内酯的最佳提取工艺为100mL的75%乙醇浸渍12h,在80 W功率下超声提取60min,该条件下的提取率为0.333%。     

桑树东莨菪素体外抗假丝酵母菌活性初步研究

试验运用生长速率法，初步测定了桑树活性物质东莨菪素体外抗假丝酵母菌活性。结果表明，东莨菪素对假丝酵母菌具有明显的抑制作用，其MIC=7．81，作用时间和作用浓度分别在48—72h、500—1000ug／ml间为宜。这为东莨菪素抗菌活性的进一步研究奠定了基础。     

姜黄素和东莨菪内酯对朱砂叶螨形态变化和水分损失的影响

为明确植物源杀螨活性物质姜黄素和东莨菪内酯对朱砂叶螨的作用方式,测定了阿维菌素、哒螨灵、螺螨酯、姜黄素、东莨菪内酯对朱砂叶螨的毒力,并研究了药剂处理后朱砂叶螨的形态变化和水分损失.结果表明:阿维菌素、哒螨灵、螺螨酯、姜黄素和东莨菪内酯对朱砂叶螨的48hLC50分别为0.009 5,0.955,661.20,3 055.85和1 886.40mg/L;用各药剂的48hLC50质量浓度处理朱砂叶螨后发现,在形态上,经姜黄素和东莨菪内酯处理后其体长皱缩率在72h分别达到23.17%,19.46%,在168h分别达到35.94%,35.79%,与其他药剂和对照的差异具有统计学意义;在水分损失上,螺螨酯、姜黄素和东莨菪内酯处理后朱砂叶螨的水分损失率在96h内与其他药剂和对照相比差异具有统计学意义.该研究证实姜黄素、东莨菪内酯能够明显地影响朱砂叶螨的形态与体内水分含量,且两种药剂对朱砂叶螨的某些症状与神经毒剂和生长调节剂相似,其作用机理有待于下一步研究证实.     

东莨菪素对朱砂叶螨的毒力及杀螨机理初探

采用玻片浸渍法测定东莨菪素对朱砂叶螨的触杀毒力,观察东莨菪素对朱砂叶螨的致毒症状,并测定其对朱砂叶螨神经系统靶标酶(乙酰胆碱酯酶、单胺氧化酶、Na+-K+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶)活性的影响。结果表明,东莨菪素对朱砂叶螨24 h的触杀LC50值为1.24 mg/mL;中毒试螨表现出神经毒剂的致毒症状,如兴奋、痉挛等。在活体和离体试验中,东莨菪素均显著抑制试螨乙酰胆碱酯酶、单胺氧化酶、Na+-K+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶的活性。研究还发现东莨菪素会引起试螨乙酰胆碱含量增加,可能是东莨菪素显著抑制试螨乙酰胆碱酯酶活性引起。据此推测东莨菪素对朱砂叶螨可能有神经毒性。     

添加莨菪和疫苗对一龄草鱼促长防病饲养效果的研究

将莨菪和草鱼出血病组织浆疫苗添加于一龄草鱼的日粮中，经４５－６０天的网箱和水泥池饲养结果，口服莨菪和疫苗（含５％ＣＭＣ），既可使草鱼的相对增重率比对照组提高５．７－８２．９％，又可对出血病的免疫保护率达４０－５４．６％。莨菪和疫苗是促进草鱼生长和提高抗病力的有效添加剂。     

青海省西宁种植山莨菪中矿物质元素分布特征

采集2年生和3年生人工种植山莨菪在不同生长期的植物全植株,采用原子吸收光谱仪分析测试其钾、钠、钙、镁等矿物质元素含量。结果表明:2年生与3年生种植山莨菪的根、茎、叶等组织器官中各矿物质元素含量各异,3年生种植山莨菪各组织器官中矿物质元素含量略高于2年生同一生长期相应组织器官中矿物质元素的含量,即随种植山莨菪生物量的增加其对矿物质元素的需求量表现为略有增加的趋势。     

植物保卫素东莨菪内酯对烟草的诱导抗性研究进展

东莨菪内酯属香豆素类化合物,是烟草中重要的植物保卫素,能抗烟草花叶病、灰霉病、野火版、青枯病、黑胫病等多种病害,其在烟草组织中通过苯丙氨酸解氨酶(PAL)调控合成,当受到不良环境影响或者外源物质(茉莉酸甲酯、2,4-D、核黄素、细胞分裂素等)诱导时,东莨菪内酯在烟草葡萄糖基转移酶(TOGTs)调控转化为东莨菪苷转移到液泡中发挥抗病作用。该文综述了东莨菪内酯对烟草中的生物合成及诱导抗性的相关研究,以期为提高烟草的抗病性及防治提供理论依据。     

莨菪碱在草鱼口服免疫中佐剂性的初步研究

将莨菪碱添加在酚灭活的柱状嗜纤维菌和菌体脂多糖疫苗中，分别口服免疫接种草鱼后，通过检测血液中吞噬细胞的吞噬活性、血清中凝集抗体效价和活菌攻毒等方法，探讨了莨菪碱在草鱼口服免疫中的佐剂性。结果表明，用添加莨菪碱的疫苗免疫接种草鱼后，受免鱼体血液中吞噬细胞的吞噬活性、血清中凝集抗体效价和活菌攻毒后的免疫保护率，都明显地高于未添加莨菪碱疫苗的免疫组。从而证明了莨菪碱在草鱼口服免疫中具有良好的佐剂性。     

HPLC测定万应跌打酒中东莨菪素的含量

［目的］建立万应跌打酒中东莨菪素的HPLC分析方法。[方法］采用Diamonsil C18（5 μm×250 mm×4.6 mm）色谱柱,以乙腈-0.1％磷酸水溶液为流动相梯度洗脱,流速为1.0 ml/min,检测波长为360nm,柱温为35 ℃。［结果］ 东莨菪素含量9.008-90.080（甲醇）μg/ml 范围内与其峰面积呈良好的线性关系,r＝0.999 9;平均回收率为98.83％（RSD＝1.18％）。10批万应跌打酒中东莨菪素的含量在0.03-0.12 mg/ml。［结论］该方法科学准确、操作简单、重复性好,可用于万应跌打酒的质量控制。     

我国中草药代谢基因研究获重大突破

我国生物技术专家唐克轩教授主持的课题组，运用转基因手段，在国际上首次将甲基转移酶和羟化酶同时转入药用植物莨菪中，筛选获得高质量的莨菪药用组织细胞（俗称毛状根）。研究结果表明，东莨菪含量与原来的细胞组织相比，药用成分提高了9倍。这是我国中草药植物代谢基因研究在该领域内获得的重大突破，在国际上首次大幅度提高了药用植物中东莨菪碱的含量。     

不同生长年限木本曼陀罗中莨菪碱和东莨菪碱含量比较研究

木本曼陀罗中莨菪碱和东莨菪碱有解痉、兴奋呼吸、抑制中枢等重要作用。利用高效液相色谱法测定1年生和3年生红花、黄花木本曼陀罗不同组织部位中莨菪碱和东莨菪碱含量。结果表明,1年生和3年生红花木本曼陀罗中莨菪碱含量最高部位均为根部,分别为0.066%和0.117%,东莨菪碱含量最高部位分别为当年生绿茎(0.071%)和根部(0.075%);1年生和3年生黄花木本曼陀罗中莨菪碱含量最高部位分别为嫩叶(0.156%)和根(0.039%),东莨菪碱含量最高部位也分别为嫩叶(0.287%)和根(0.215%)。     

青海省西宁种植山茛菪中矿物质元素分布特征

采集2年生和3年生人工种植山莨菪在不同生长期的植物全植株，采用原子吸收光谱仪分析测试其钾、钠、钙、镁等矿物质元素含量。结果表明：2年生与3年生种植山莨菪的根、茎、叶等组织器官中各矿物质元素含量各异，3年生种植山莨菪各组织器官中矿物质元素含量略高于2年生同一生长期相应组织器官中矿物质元素的含量，即随种植山莨菪生物量的增加其对矿物质元素的需求量表现为略有增加的趋势。     

中平树中东莨菪内酯的分离鉴定及含量测定

采用硅胶柱色谱分离纯化的方法从中平树[Macaranga denticulata(Bl.)Muell.Arg.]中分离得到一种香豆素类化合物,根据理化性质及光谱数据鉴定其为东莨菪内酯。并采用ZORBAX Eclipse XDB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以甲醇∶0.1%冰醋酸(39∶61)为流动相,流速1.0 m L/min,检测波长345 nm的色谱条件,用HPLC法测定中平树中东莨菪内酯的含量。结果表明,东莨菪内酯在1.45~7.24μg/m L范围内与其峰面积呈良好的线性关系,平均回收率为99.18%,RSD为1.18%(n=6)。该方法简便、准确、快速,可用于中平树药材的质量控制。     

颠茄流浸膏中莨菪碱和东莨菪碱的分离测定

根据有关文献制备阿托品电极和东莨菪碱电极,采用薄层法两次分离,用离子选择性电极分别测定颠茄流浸膏中莨菪碱和东莨菪碱的电位值,根据标准曲线查出两者的含量.方法较文献报导的简便,阿托品及东莨菪碱的回收率可分别达到94.5%、101.5%.     

颠茄流浸膏中莨菪碱和东莨菪碱的分离测定

根据有关文献制备阿托品电极和东莨菪碱电极,采用薄层法两次分离,用离子选择性电极分别测定颠茄流浸膏中莨菪碱和东莨菪碱的电位值,根据标准曲线查出两者的含量。方法较文献报导的简便,阿托品及东莨菪碱的回收率可以分别达到９４．５％,１０１．５％。     

PMT 和H6H 双基因共转化提高三分三托品烷类生物碱质量分数

三分三是我国特有的托品烷类生物碱药源植物.采用基于发根的外源基因表达技术,农杆菌介导遗传转化 三分三,获得转烟草PMT 和莨菪H6H 基因的发根、基因组PCR鉴定转基因发根、液体摇床培养后,HPLC检测 发根中莨菪碱和东莨菪碱质量分数.结果发现:在三分三转基因发根中,能够同时检测到1177bp的莨菪H6H 基 因片段和451bp的烟草PMT 基因片段,而非转基因发根没有检测到这2个基因,表明外源PMT 和H6H 这2个 基因整合进了三分三基因组.转基因发根系T11中东莨菪碱质量分数最高,比非转基因发根系高出近6倍,比自然 根高出近25倍;转基因发根系T25中莨菪碱质量分数最高,比非转基因发根系高出近8倍,比自然根高出近75 倍;转基因T25中东莨菪碱和莨菪碱总量最高,比非转基因发根系高出近7倍,比自然根高出近44倍.