中蜂精液漂洗提取的精子生物学研究

本文研究了用中蜂精液漂洗提取技术采集的中蜂精液的精子生物学。结果表明,漂洗液对精子活力有极大的影响。当Na 和K 的浓度比为1.638时,平均精子活力高达79.3%;葡萄糖、果糖和半乳糖能极显著提高精子活力(P<0.01),山梨糖和海藻糖无显著效果(P>0.05)。在中性三基缓冲液中,精子活力最高;pH<4.0,精子死亡;pH≥8.0,精子活力下降。精子在高渗(OP≥470mosm/L)三基缓冲液中的活力强于在低渗(OP≤330mosm/L)三基缓冲液中。pH值和渗透压对精子活力有显著的互作效应。离心时间和离心速度对精子活力没有显著影响;25～30℃的水浴怛温漂洗精液,其精子活力最高。     

稀释液渗透压与pH值对黑凤鸡精液低温保存活力的影响

为推广鸡精液稀释技术,对黑凤鸡精液稀释液pH值与渗透压进行优化。YHFB液的渗透压调整为340、294、261mOsm/kg,按1:2对原精稀释;pH值调整为7.38、7.29、7.11,按1:1对原精稀释;先添加精液与先添加稀释液,2种稀释顺序按1:2对原精稀释。稀释后的精液,置于6℃左右,定期检查精子活力。结果表明:用不同渗透压的稀释液稀释精液后立即测定的活力差异显著(P0.05),以261mOsm/kg组的活力最高,但24h及以后不同渗透压组的活力差异不显著;稀释后冷藏,3种不同pH值稀释液之间、稀释液与精液不同添加次序之间精子活力差异均不显著。因此,用YHFB稀释液对黑凤鸡精液进行稀释与冷藏,低渗透压(261mOsm/kg)较好,而pH值在7.1~7.4、精液与稀释液添加次序之间没有显著差异,能获得较好效果。     

用各种渗透压稀释液进行低温液态保存后的鸡精子形态

为了进一步弄清鸡精子形态上发生冷冻伤害的主要原因,笔者用多种物质调节溶液的渗透压来稀释精液,用光学显微镜和扫描电镜(SEM)观察了在5℃下保存24小时的鸡精子形态。其结果是:在等渗稀释液稀释保存的液态精子中看不到冷冻精子的顶体脱离和头部末端膨大。在葡萄糖和甘油溶液的低渗、等渗、高渗组以及盐水低渗、等渗组观察到畸形精子都是头     

动物脱水的原因与病理、生理变化

1高渗性脱水高渗性脱水的特征是失水多于失钠,血清钠浓度＆gt;150毫摩尔/升,血浆渗透压＆gt;310毫摩尔/升。失水多于失钠导致细胞外液渗透压增高,是引起高渗性脱水的原因。细胞外液渗透压增高刺激动物口渴中枢,引起渴感和饮水。细胞外液渗透压增高刺激下丘脑视上核渗透压感受器,抗利尿激素（ADH）释放增多,使肾小管重吸收水增多,引起尿量减少,尿比重升高。细胞外液渗透压增高可使渗透压相对较低的细胞内液的水分向细胞外转移。     

不同浓度NaCl溶液及pH值对禾花鱼精子活力的影响

为了观察不同条件下精子的快速运动时间和存活情况,试验采用显微镜法研究了不同pH值及不同NaCl溶液浓度对禾花鱼精子活力的影响。结果表明:pH值为4～11时,禾花鱼精子可以快速运动,pH值为7时精子活力最强;当超过一定时间,精子聚集在一起,一段时间后部分精子结构被破坏;最适宜禾花鱼精子运动的NaCl溶液浓度为68 mmol/L。     

不同渗透压的稀释液对猪精液17℃保存效果的影响

为了研究猪精子在17℃保存时不同渗透压对精子质量、畸形率的影响,试验添加不同剂量的葡萄糖控制稀释液的渗透压,用迈朗全自动精子质量检测仪检测猪精子质量指标及畸形率。结果表明:在多数项目上,无论是保存时间还是质量参数(精子活率、精子活力、路径速度等),渗透压268,368 m Osmol/kg的2,3组都明显优于渗透压183,400 m Osmol/kg的1,4组。说明猪精子在等渗和适当高渗情况下有利于保存。     

稀释液溶质、渗透压、pH值和缓冲指数与低温保存鸡精液效果的关系

将葡萄糖、氯化钠、氯化钾、柠檬酸钠四种物质分别配制成三个渗透压水平(278mOsm、328mOsm、378mOsm)的12种单方精液稀释液，在低温(1～4℃)下进行鸡精液稀释保存试验，在四种物质中各选出一种好的稀释液，再将所选四种单方稀释液按不同比例制成复方精液稀释液，再次进行保存试验。所有稀释液均测定渗透压、pH值、缓冲指数、精子存活时间、精子生存指数等指标。结果表明：①柠檬酸钠、葡萄糖对鸡精液的保存具有重要作用，而氯化钾在鸡精液稀释液中并不是必需的。②复方稀释液保存效果普遍优于单方稀释液。③低温下鸡精液稀释液渗透压应为等渗或接近等渗，且最适渗透压还与构成稀释液的物质种类和相互配比有关系。④稀释液pH值应接近中性，最好与精液pH值保持一致。⑤在缓冲指数为3．894—7．257的范围内，缓冲指数与精子存活时间和生存指数呈现显著的负相关。     

甘油浓度冷冻速度脱脂奶稀释液浓度对绵羊精子冷冻效果的影响

试验用15%脱脂奶稀释液(450毫渗摩—毫克分子浓度/公斤水),0～16%甘油浓度和1～100℃/分的降温速度共同对公羊精子冷冻-解冻存活率(活率和活力)的影响。结果表明4～6%甘油浓度和10～100℃/分的降温速度时精子存活率最高.用8%甘油浓度和5～30℃/分降温速度也获得了近似的结果。虽然在每一种甘油浓度中公羊精子能耐受好几种降温速度,但是提高甘油浓度会使最佳降温速度下降.甘油浓度超过8%就对精子有毒性了,使精子存活率显著下降。15%与19%脱脂奶稀释液(600毫渗摩),以4～6%甘油浓度和10～100℃/分降温速度冷冻均获得了很高的冷冻存活率。     

高渗稀释液对公猪精子保存效果试验

在28—30℃室温下,用不同抗菌药品调节稀释液渗透压至471.58±25.07毫克分子浓度,高于等渗液119.43毫克分子浓度。结果使精子体外保存(10℃冰箱)达156.86±6.77小时,维持精子有效活力(0.4级)时间达116.57±6.79小时,分别比等渗液延长66.86和44.57小时(P<0.01)。应用高渗稀释液保存(20℃旱井)72小时,在外界35—38℃高温下作输精试验,结果保存60小时内输精受胎率、产仔数等均无明显影响。保存12小时输精受胎率为87.33％,比以往等渗高12个百分点。     

Percoll密度梯度离心分离牛精子初探

用2.9％柠檬酸钠将奶牛原精密度调到5×10~8/ml,取其3ml经26％Percoll洗涤(1700转,25分钟),置于pH7.0、渗透压300mmol/kg的9级Percoll梯度溶液上分离(1000转,15分钟)从第9层取得精子作去Percoll处理(2500转,20分钟),再用含甘油和卵黄的牛冷冻稀释液平衡滴冻,解冻后活力可达0.4左右。分离后精子的受胎率为52.2％(47/90),母犊率为44.2％(19/43),对照组母犊率为36.8％(21/57)。说明分离后精子可正常受胎,并有提高母犊率的趋势。     

不同氯化钠浓度及pH值对半刺厚唇鱼精子活力的影响

分别观察不同NaCl浓度和pH值对半刺厚唇鱼精子活力的影响。结果表明:NaCl浓度为0.70%～0.75%时,精子运动时间和寿命相对较长,但浓度超过0.75%时精子活力开始受到抑制,运动能力和寿命下降;半刺厚唇鱼精子对溶液酸碱性的适应能力很弱,仅在pH6.5～7.5的溶液中有运动能力,在pH7.0溶液中运动能力及寿命最强,超出这个范围精子没有运动能力。     

不同浓度的缓冲液对灌注营养绵羊瘤胃液渗透压与pH值的影响

瘤胃液渗透压和pH值是决定反刍动物灌注营养能否成功的重要因素。灌注缓冲液的浓度及缓冲液与挥发性脂肪酸（VFA）的比例控制着瘤胃液的渗透压与pH值。本试验用4只灌注营养的绵羊，分6个缓冲液水平研究了缓冲液对瘤胃液渗透压与pH值的影响。结果表明，当缓冲液储备液与挥发酸储备液重量之比为4．39～6．58，且缓冲液灌注水平为84．7～127．2g／kgW0．75时，灌注绵羊的瘤胃液渗透压与pH值可处于安全范围内。     

稳定pH值对猪精液液态保存效果的影响

为了研究pH值变化对猪精液液态保存效果的影响,找到适合猪精液液态保存pH值,从而改进液态保存液的配方,提高人工授精效率,试验比较了不同pH值条件下猪精液液态保存效果,通过检测精子活力、存活时间、顶体完整性和质膜完整性等参数,研究pH值变化对猪精液液态保存效果的影响,并尝试改进保存缓冲液。结果表明:采用Androhep保存时,最佳初始保存pH值为6.40。在保存的第3天稳定pH值组能够显著提高精子活力(P0.05),用2-吗啉乙磺酸(MES)代替Androhep保存液中的4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES),在保存的第3天能显著提高精子活力、存活时间(P0.05),同时维持更高的质膜完整性,但是顶体完整性差异不显著(P0.05)。说明采用能够稳定pH值的保存液更有利于精液常温保存。     

稀释剂配方对猪常温精液保存效果及受胎率试验

为了研究稀释剂配方对猪常温精液的影响,试验以英国Energy稀释剂为对照,设计7个稀释剂配方,测定pH值和渗透压;用上述8种稀释剂保存精液,检测保存时间、精子活力、精子畸形率和精子顶体完整率,比较其保存效果;选择3个保存效果较好的配方进行受胎率试验。结果表明:7个配方和英国Energy稀释剂的pH值和渗透压为6.50~7.25和271~297 mOsm;配方Ⅰ、配方Ⅵ、配方Ⅶ对精液保存时间超过5 d显著高于英国Energy稀释剂。配方Ⅰ和配方Ⅵ保存效果较好。     

藏獒精液冷冻过程中pH值及甘油对其活力的影响

为探讨pH值和甘油对藏獒精液冷冻保存前后精子活力的影响,筛选6条种公藏獒在其繁殖季节(9~12月份)以不同pH值梯度(5.5,6.0,6.5,7.0,7.5)稀释液和不同甘油平衡时间(10,20,30,40,50,60,70,80,90 min)对藏獒精液进行冷冻,检查精子活力变化。结果表明,在藏獒精液冷冻过程中,pH值为6.5的稀释液中精子在冷冻前后有较高的活力;甘油平衡时间对藏獒精液活力有较大影响,冻前精子活力随甘油作用时间而下降,在甘油平衡时间为20 min所得藏獒冻后精子活力效果较好。     

DL—蛋氨酸含量的测定方法

<正> 1.测定原理蛋氨酸含量的测定可用间接碘量法进行,其化学反应的关系式简化如下:DL—蛋氨酸+碘 pH6.5PHO DL—蛋氨酸—碘(加合物)2.化学试剂的配制2.1 磷酸盐缓冲液/碘化钾溶液准确称取149.54克磷酸二氢钾和205.66克磷酸氢二钾,溶于盛有蒸馏水的容量瓶中,稀释至2升后加入27.00克碘化钾,溶液的 pH 值用酸度计检查,调节为6.5。2.2 淀粉指示剂取1.25克可溶性淀粉于小研钵中,加水少许研成糊状,然后徐徐倾入50毫升沸蒸馏水中。煮沸2分钟,冷却后加入1克碘化钾,搅拌溶解。倾出清液贮于小口瓶中备用。     

肌醇类SIB对云南半细毛羊精液冷冻保护效果影响的研究

为了进一步降低冷冻过程中冰晶形成对云南半细毛羊精子的机械损伤,实验首次检验了肌醇类冰晶抑制剂(SIB)对绵羊精子的冷冻保护效果。采用的SIB是1,4-环己二醇(1,4-CHD)。电刺激采集精液后,经4℃平衡、液氮气相预冻后直接投入液氮保存。结果表明:1,4-CHD不能提高云南半细毛羊冷冻精子的活力,而且随着1,4-CHD浓度的增加,精子活力呈逐步下降趋势。此外,1,4-CHD也不能改善解冻后云南半细毛羊精子的顶体状态和质膜完整性。解冻后,当用等渗缓冲液稀释精子时,1,4-CHD冷冻组精子的质膜破损率明显高于不含1,4-CHD的对照组(P<0.05)。然而,SIB的存在可能有利于冷冻精子磷脂酰丝氨酸(PS)正常分布的维持。解冻后,1,4-CHD冷冻组精子的PS标记率明显低于对照组(P<0.01)。当分别采用渗透压为404 mOsm,528 mOsm,648mOsm或853mOsm的缓冲液去稀释解冻后的精子时,就移动速度和质膜完整性指标而言,4个处理组之间差异不显著(P>0.05)。总之,肌醇类SIB并不能改善云南半细毛羊冷冻精子的活力、移动速度、顶体以及质膜完整性等指标。然而1,4-CHD可能抑制冷冻解冻过程引起的细胞早期凋亡。     

不同浓度羧甲基壳聚糖对猪精液17℃保存效果的影响

为了探讨不同浓度的羧甲基壳聚糖(carboxymethyl chitin, CMCS)对猪精液常温保存效果的影响，试验采集了4头健康的2～3岁长白猪精液，利用未添加CMCS的Modena稀释液和添加不同浓度(30,50,70,100μg/mL)CMCS的Modena稀释液进行稀释，然后将稀释的猪精液在17℃环境中保存5 d,于保存第0(添加当天),1,3,5天测定精液精子活力、线粒体活性率、质膜完整率、精液pH值和渗透压指标，筛选CMCS的最佳添加浓度。结果表明：在常温保存过程中添加CMCS对猪精液具有保护作用，在精液保存第5天时，添加70μg/mL CMCS精液的精子活力、线粒体活性、质膜完整率最高，显著高于未添加和其他浓度(P<0.05);添加70μg/mL CMCS精液的渗透压最高，显著高于100μg/mL浓度(P<0.05),与未添加和30,50μg/mL浓度差异不显著(P>0.05);添加30,50,70μg/mL CMCS精液的pH值差异不显著(P>0.05),但均显著高于未添加和100μg/mL浓度(P<0.05)。说明CMCS在猪精液常温保...     

不同剂量的稀释液对猪精子活力的影响

家畜精液保存技术在繁殖控制和现代畜牧业生产中日益显出其重要性。而猪新鲜精液常温保存的研究开始于1980年，它要求能保存3d以上，以利于人工授精技术的推广和长距离运输。研究中遇到的主要问题是不同剂量的稀释液在温度为18℃～22℃时对猪精液中精子保存时间长短，精子和精液中的微生物的新陈代谢强度几乎没有下降。因此，既要延长保存时间，又要维持受精力比较困难。1980年，意大利的Gottardi研究出了名为Zorlesco的稀释保存液，由于未添加牛血清白蛋白（BSA）。因此，不能常温保存猪新鲜精液，Zorlesco液的成分不平衡，渗透压低于240毫渗摩尔无助于维持精子活力。     

辅酶Q10对猪精液17℃保存效果的影响

为提高猪精液常温保存效果,本试验探讨17℃保存过程中,在Modena稀释液在不同浓度辅酶Q10(Co-Q10)(0、10、15、25、35μg/mL)对猪精液质量的影响。在17℃条件下每隔24 h检测不同组的精子活力、pH,每隔48 h检测精液的渗透压、精子线粒体活性和质膜完整率。结果表明：保存第5天,25μg/mL Co-Q10组精子活力、线粒体活性、质膜完整率均高于其他组（P<0.05）,pH下降速度也最慢,并且对渗透压变化影响不大。综合考虑Co-Q10在猪精液17℃保存中的适宜添加浓度为25μg/mL。