时间分辨荧光免疫分析技术的研究进展

时间分辨荧光免疫分析技术是一种新型的超微量免疫标记分析方法,集酶标记免疫分析和放射免疫分析等优点于一身,具有无放射性、无背景光干扰、灵敏、稳定、线性范围宽、操作简便、分析速度快等优点,已广泛应用于临床医学检测、食品安全快速检测等领域。本文就时间分辨荧光免疫分析的原理及在兽医学中的应用作一综述。     

环丙沙星时间分辨荧光免疫分析方法

以环丙沙星-卵清蛋白结合物（CIP-OVA）为包被抗原,与游离环丙沙星（CIP）共同竞争有限的抗CIP抗体,用稀土离子Eu3＋标记的羊抗兔抗体进行示踪,建立了高灵敏的环丙沙星间接竞争时间分辨荧光免疫分析方法（TR-FIA）。该方法的测量范围为0.01～30μg/L,灵敏度为0.002μg/L,平均批间效应点值ED80、ED50、ED20分别为0.03、0.80和20.7μg/L。动物源性食品标准添加平均回收率为86.81%。结果表明CIP-TRFIA具有准确、灵敏、稳定、可测范围宽等特点,在CIP兽药残留检测有很好的应用前景。     

布鲁氏菌抗体时间分辨荧光检测方法的建立

用布鲁氏菌的Bp26蛋白包被免疫层析试纸条的检测线,以稀土荧光纳米颗粒标记的金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)作为信号报告基团,建立了检测布鲁氏菌抗体的时间分辨荧光检测方法。用制备的稀土荧光试纸条检测715份牛血清,与虎红平板凝集试验结果的符合率为92%,且与牛巴贝斯虫阳性血清、牛结核菌阳性血清、牛副结核杆菌阳性血清、口蹄疫阳性血清均无交叉反应,检测灵敏性好于胶体金试纸条。     

牛血清中口蹄疫病毒非结构蛋白抗体时间分辨荧光免疫分析检测方法的建立

为研究快速定量检测牛血清中口蹄疫病毒非结构蛋白抗体的方法,试验通过优化抗原表达条件等步骤,在大肠杆菌原核表达系统中表达可溶性的3A-3B融合蛋白,并基于纯化的可溶性融合蛋白建立口蹄疫病毒非结构蛋白抗体时间分辨荧光免疫分析检测试剂盒。结果表明:建立的方法能够检测牛血清中的口蹄疫病毒非结构蛋白抗体,敏感性高,特异性强,对其他相关的牛类病原无交叉反应,其组内与组间变异系数分别低于10%和15%,具有良好的重复性。对300份临床牛血清样品进行检测,同Procheck公司的口蹄疫非结构蛋白抗体试剂盒进行比较,阳性样品符合率96%,阴性样品符合率93.3%,总的符合率95.7%。重复性试验组内与组间变异系数均小于10%。文章首次建立了口蹄疫病毒非结构蛋白抗体时间分辨荧光免疫分析检测方法,同传统的ELISA方法相比,该检测方法特异性相当、敏感性更高,操作更简单、快速,具有较高的应用推广价值。     

猪流行性腹泻病毒时间分辨荧光免疫层析检测方法的建立

为建立一种快速、定量检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)时间分辨荧光免疫层析检测方法(TRFIA),本研究采用杂交瘤技术制备了抗PEDV N蛋白特异性单克隆抗体(MAb)5E6和1B7,将MAb 5E6与荧光微球偶联包被结合垫,将MAb 1B7和兔抗鼠IgG抗体分别包被硝酸纤维素膜作为检测线和质控线制备PEDV荧光微球免疫...     

牛血清淀粉样蛋白A时间分辨荧光免疫层析检测试剂盒研制

本研究旨在研制一种牛血清淀粉样蛋白A（SAA）时间分辨荧光免疫层析定量检测试剂盒,用于牛奶中SAA含量的临床快速检测。采用双抗体夹心法结合荧光免疫层析技术,在结合垫上固定荧光微球标记的抗SAA单克隆抗体及荧光微球标记的鸡IgY的混合物,在硝酸纤维素膜的检测区包被另一株抗SAA单克隆抗体,在硝酸纤维素膜的质控区包被山羊抗鸡IgY。经抗体原料筛选及荧光微球标记抗体的工艺优化后,绘制标准曲线并对试剂盒的空白限、精密度、稳定性及样本测试性能进行初步评估。结果显示,Medix SAA-2单克隆抗体包被与YBX SAA-3单克隆抗体标记为最适抗体配对原料。荧光微球标记抗体的工艺中,荧光微球与抗体的质量投料比为40∶1、偶联剂与荧光微球羧基摩尔比为2∶1的条件为最优组合。试剂盒标准曲线的四参数拟合曲线方程为y=（1.03947-0.00182）/[1＋（x/12.08222）×（-0.84692）]＋0.00182,线性相关系数R²=0.9997。研制的牛SAA检测试剂盒空白限为0.052 mg/L。精密度测试结果显示,批内变异系数 < 15%,批间变异系数 < 20%。室温稳定性试验表明,试剂盒在室温密封存放6个月的荧光T/C值相对跌幅约15%。自制试剂盒与上海蓝基试剂盒的样本对比测试相关系数R²为0.97。综上所述,本试验研制的试剂盒具有操作简便、灵敏度高、成本低廉等优点,能满足临床测定需求,可作为一种新型牛SAA检测的快捷、准确的检测手段。     

小反刍兽疫病毒双抗原夹心时间分辨荧光免疫测定方法的建立

通过优化大肠埃希菌密码子、优化表达条件等方法,在大肠埃希菌表达系统中成功获得了可溶性的N蛋白与NH融合蛋白。进一步基于纯化的可溶性N蛋白与NH融合蛋白建立了小反刍兽疫病毒双抗原夹心时间分辨荧光免疫测定方法。该方法敏感性高,特异性强,能够特异性的检测羊血清中的小反刍兽疫病毒抗体,与其他相关疫病病原无交叉反应;重复性试验组内与组间变异系数均小于10%。对292份临床血清样品进行检测,与法国IDVET竞争ELISA试剂盒比较,阳性样品符合率为92.47%,阴性样品符合率为97.26%,总的符合率为94.86%。该方法与传统的ELISA方法相比,具有敏感性、特异性相当,操作简单、快速,具有较高的推广应用价值。     

免疫胶体金快速诊断技术在兽医诊断中的应用

免疫胶体金快速诊断技术源于对血清与尿液的绒毛膜促性腺激素的免疫渗滤试验检测,之后有学者提出采用胶体金作为标记物替代酶应用于渗滤试验,并制备完成广泛应用的对抗人类免疫缺陷病毒抗体检测的试剂盒.由于免疫胶体金快速诊断技术方便快捷,已在妊娠试验、检测传染病病原抗体等方面进行应用,而应用于兽医诊断的研究刚刚起步.     

侧流免疫层析技术在兽医诊断中的应用

侧流免疫层析使用有色标记物、荧光标记物或其他标记物等作为标记物,用于偶联抗原(抗体),用以检测抗体(抗原)的一种免疫化学反应。传统的侧流免疫层析依赖于肉眼观察,灵敏度较低,只能提供定性或半定量结果。新一代侧流免疫层析技术采用不同类型标记物和应用外部设备,对待检物进行量化,来呈现待检物的含量,从而实现开发具有定量、多组分检测能力的免疫层析测试。论文总结了侧流免疫层析标记物、检测原理以及在兽医诊断中的应用,以期为今后侧流免疫层析技术在兽医临床诊断中的应用和改进提供理论参考。     

一种新型的免疫检测技术—时间分辨荧光免疫分析

时间分辨荧光免疫分析(简称TRFIA)是新近发展起来的一种新型的非放射配基结合分析法。它与放射免疫分析、化学发光免疫分析及荧光免疫分析相比都有其独特的优点。该测定法的原理和通常的荧光免疫分析法不同,所用示踪物不是荧光素,而是采用     

细胞因子与抗感染免疫

在机体炎症和免疫应答过程中,由免疫细胞产生的一类具有免疫调节和效应功能的小分子多肽或糖蛋白,称细胞因子（ｃｙｔｏｋｉｎｅ）。在天然免疫中,细胞因子多由单核细胞产生,因此称为单核因子（Ｍｏｎｏｋｉｎｅ）,它们除介导单核吞噬细胞的效应功能外,也在活化淋巴细胞和调节特异性免疫方面有重要的作用［１］。在特异性免疫中,细胞因子多由活化的淋巴细胞产生,因此称为淋巴因子（Ｌｙｍｐｈｏｋｉｎｅ）。它们参与淋巴细胞的活化、生长与分化,参与天然免疫的调节和放大。淋巴因子不仅是特异性免疫的效应分子且是免疫系统与炎症系…     

应用间接荧光免疫技术检测牦牛致病性大肠杆菌

建立了用于检测牦牛致病性大肠杆菌的间接荧光免疫技术，对人工感染动物和自然感染病例进行了致病性大肠杆菌的检测，并作了阻断试验和类症试验。结果表明，试验建立的间接荧光免疫技术具有较高的特异性和敏感性，适用于牦牛致病性大肠杆菌的常规检测。     

兽医诊断中免疫胶体金快速诊断技术的应用

免疫胶体金快速诊断技术无需繁复操作和精密设备,具有简单、快捷、准确的优点,在生物医学领域广泛应用。本文就其在兽医诊断中的应用做简要分析。     

免疫组织化学技术在兽医诊断中的应用

免疫组织化学技术是通过利用抗原抗体特异结合的原理,把相关的物质标记在抗体上,来表示复合物的存在和状态。伴随着我国科学技术的全面发展,免疫组织化学技术已经广泛应用到兽医的诊断过程中。免疫组织化学技术应用的范围非常广泛,主要包括对病原体的检测、定位、动态分布,以及新病原体的发现和对固定组织的研究,是现代兽医诊断中的主要技术手段之一。该文通过查询大量的中外文献,就免疫组织化学技术在兽医诊断中的应用进行分析。     

免疫组织化学技术在兽医诊断中的应用

免疫组织化学技术是利用抗原抗体特异性结合的原理,将物质标记在抗体上,通过标记来显示抗原抗体复合物的存在。随着免疫组织化学技术的发展和成熟,已被广泛应用于兽医诊断中,除用于对病原体准确的检测外,主要用于病原在机体组织中的定位和动态分布特点研究、新病原的发现、活体动物中病原的检测、以及对固定组织进行回顾性研究等,是广泛使用的现代病理学研究手段之一。     

荧光偏振免疫分析检测磺胺二甲嘧啶——荧光标记物的合成与鉴定

磺胺二甲基嘧啶（Sulfamethazine，SMZ）属于磺胺类药物，广泛用于猪、禽和牛养殖业疾病的预防和治疗。食用过磺胺类药物治疗的动物其组织中残留的药物也可能对消费者构成潜在的威胁。中国、欧盟和美国的相关组织均将磺胺类药物总量和单个磺胺类药物在食用动物组织的最高残留限量定为100μg／kg。     

河豚毒素荧光偏振免疫分析方法的建立

河豚毒素主要存在于河豚鱼中,是一种致命的神经毒素。将量子点标记于河豚毒素,并将其作为示踪物,获得高且稳定的荧光信号,建立荧光偏振免疫分析技术检测河豚毒素。所建立的方法检测河豚毒素检测范围为1.36~101.27μg/L,IC50值为11.76μg/L,检测限为0.67μg/L。在该方法的检测范围内标准平均回收率为(99.91±2.60)%,变异系数为2.60%。与竞争性ELISA相比较,本方法河豚毒素测定值与竞争性ELISA测定值呈线性相关,且具有简单、快速等特点,可应用于临床诊断和食品安全检测。     

犬细小病毒时间分辨免疫荧光分析方法的建立及初步应用

为建立犬细小病毒(CPV)的时间分辨免疫荧光分析(TRFIA)方法并制备试剂盒,本实验采用抗CPV单克隆抗体(MAb)7D5作为包被抗体,Eu3+标记的MAb 2F7作为检测抗体,对各反应条件优化后制备双抗体夹心TRFIA试剂盒.并评价了其灵敏度、准确度、特异性、重复性和稳定性.利用该试剂盒与RT-PCR方法同时检测了...