鹿结核病野毒株与卡介苗差异基因基因文库的构建

应用四碱基限制性内切酶对鹿结核病流行株和卡介苗基因组分别酶切,以鹿结核流行株酶切产物为testerDNA,卡介苗酶切产物为driver DNA,testerDNA接头连接后与driver DNA进行抑制性消减杂交。将获得的消减PCR产物与pMD-18连接,JM109感受态细胞,进行蓝白斑筛选。结果表明,RsaI酶切产生的酶切产物在0.1～2.0 kb之间,将消减PCR产物克隆后,挑取208个转化子,构建了鹿结核病流行株与卡介苗的差异基因文库。结果表明,应用抑制性消减杂交技术,构建鹿结核病流行株与卡介苗基因组差减文库,可为鹿结核病自然感染和卡介苗免疫的鉴别诊断及鹿结核病的综合防治奠定基础。     

鸡减蛋综合症——新城疫二联苗的研制与应用

用减蛋综合症（ＥＤＳ‘７６）ＡＶ－１２７和新城疫（ＮＤ）Ｌａｓｏｔａ毒株，分别接鸭胚和鸡胚，收获尿囊液，福尔马林灭活，用白油佐剂乳化成二联灭活疫苗。本苗接种产量鸡后１４天产生ＮＤ和ＥＤＳ’７６抗体，１个月持续升高，而ＮＤＨＩ抗体产生时间略早。二联苗物单苗有相同的免疫效果，两者无干扰性，免疫剂量以０．５ｍｌ／只为宜。接种后９个月ＨＩ抗体仍维持在较高水平，并能经受强毒的入击，疫苗在４－８℃条件下贮存１     

鹿肠毒血症的综合诊断

我国饲养的鹿肠毒血症(Entertoxacmia)发病率居首位,现在鹿流行的传染病当中,70%～80%的鹿场每年都有部分鹿死于该病.据统计,肠毒血症的死亡率占总死亡率的60%以上,是对我国养鹿业威胁较大的传染病之一.由于该病发病率和死亡率均较高,因此,有关文献对其报道的也较多,但多数文章仅从临床诊断角度报道的,少数文献有部分实验室诊断依据.     

鸡新城疫—禽流感二联油乳剂灭活苗的研制及应用效果

用鸡新城疫病毒(NDV)LaSota株与禽流感病毒(AIV,H5N4亚型)为抗原研制了ND—AI二联油乳剂灭活苗,试验表明,此苗安全,可靠,免疫效果良好,区域试验证明,此二联苗能够有效地预防鸡新城疫及禽流感的发生和流行。     

鹿肠毒血症的防治

鹿肠毒毒血症是由产气荚膜梭菌引起的一种急性中毒性传染病,多发于春末晚秋,以营养良好、采食旺盛的多发,呈零星散发。以发病急、死亡率高为特征。     

免疫增强剂提高禽用二联苗免疫效力的研究

为评价免疫增强剂(VA5)对禽用联苗的免疫增强作用,将VA5分别与市售鸡新城疫-传染性法氏囊(新法)二联苗合用免疫SPF鸡和蛋鸡、与新城疫-H9亚型禽流感(新流)二联苗合用仅免疫SPF鸡,评价免疫后的抗体效价和SPF鸡攻毒后的保护效力。结果显示,SPF鸡或蛋鸡免疫含VA5的新法二联苗、新流二联苗后,新城疫血凝抑制(HI)抗体效价比常规苗组提前1周达到6 log2,禽流感HI抗体效价比常规苗组提前1周达到7 log2,法氏囊血清琼扩抗体和中和抗体比常规苗组均提前1周合格,且3种抗体持续高于常规疫苗组。免疫含VA5疫苗组的SPF鸡对新城疫强毒攻毒,以临床症状判断,可达全保护;以囊病变和临床症状判断,对法氏囊的攻毒提供全保护;H9变异株攻毒后不排毒。对上述3种病毒的保护力均高于常规苗。上述结果表明,VA5免疫增强剂能够提高鸡新法二联苗、新流二联苗对鸡的免疫效力,具有很好的应用前景。     

兔病毒性出血症和巴氏杆菌病灭活二联苗的研究与应用

用感染ＲＶＨＤ病兔的肝，脾，肾以及从鸡，兔混养暴发氏杆菌病兔体分离的细菌研制的甲醛灭活二联苗，免疫健康易感兔，于免疫后对ＲＶＨＤ强毒攻击第３天保护率达５０％，第５天达１００％，持续保护６个月以上，抗体动态测定与玫毒结果一致 ，对巴氏杆菌攻击第７、１５天的保护率分别达７５％、９１．７％，６个月保护率仍达７２．２％。     

应用牛型结核菌素检查鹿结核病的初探

利用牛型结核菌素(OT)、提纯结核菌素(PPD)进行变态反应的方法,对鹿做了3个不同组合的试验。得出了以OT点眼法检查鹿结核病为主的结论,为结核病鹿的检疫、净化病鹿场提供了可行的方法。     

鸡减蛋综合征,新城疫二联灭活苗的免疫性试验

在本试验中，比较了每头份疫苗含不同血凝单位病毒的免疫效果，结果每头份含ＥＤＳ病毒２０００血凝单位，ＮＤ病毒分别含２５０血凝单位和３６０血凝单位的疫苗，免疫后ＮＤ抗体峰值分别达１１．５ｌｏｇ２和１１．８ｌｏｇ２，ＥＤＳ抗体峰值达９．５ｌｏｇ２和９．８ｌｏｇ２用每头份含ＥＤＳ病毒２０００血凝单位和ＮＤ病毒２５０血凝单位的疫苗，免疫接种不同ＮＤ抗体水平的三群试验鸡，结果各试验鸡群的ＮＤ抗体峰值无明显差别     

鸡新城疫-多价大肠杆菌二联油乳灭活苗的研制与应用

用鸡新城疫 (ND)弱毒株接种鸡胚 ,收取的尿囊液与通过增菌培养获得的大肠杆菌菌液经福尔马林灭活后混合 ,加入佐剂 ,制成ND -多价大肠杆菌油乳灭活苗。实验证明 ,该苗稳定性良好 ,保存期较长 (1 4个月 ) ,安全性好 ,保护率高。通过田间试验证明 ,该疫苗可有效地预防鸡新城疫和大肠杆菌病的发生和流行     

鹿魏氏梭菌制苗菌株生物学特性的研究

对鹿魏氏梭菌ＤＮＡ０６和ＤＷ１３生物学特性进行了研究。结果证实,两株菌１０ｈ厌气肉肝汤培养的毒力最强,其毒素滴度分别为１：２＾８和１：２＾７,对小白鼠ＭＬＤ分别为０．００５ｍｌ和０．０１ｍｌ,对家兔ＭＬＤ为０．３ｍｌ;魏氏梭菌的Ａ、Ｂ、Ｃ型定型血清可抑制两株菌的卵磷脂酶活性,５５℃３０ｍｉｎ可使魏氏梭菌毒素失活,０．８％甲醛５ｄ可使毒素完全脱毒;两株菌对氧氟沙星、乳酸诺氟沙星敏感;血清分型证实两株     

应用变态反应方法诊断鹿结核病的研究

利用牛型新，旧结核菌素（ＰＰＤ，ＯＴ），禽型旧结核菌素（ＯＴ）为变应原，采用变态反应点眼法进行了鹿结核病的诊断研究。结果表明：变应原以牛型ＯＴ为最好，其敏感性高于禽型ＯＴ，检出率高于牛型ＰＤＤ；一次二回点眼的阳性率可达９２．３３％，且较一次一回的检出率高４４．６％；判定最佳时间为３，６，９ｈ。用牛型ＯＴ一次二回点眼法抽检了１１个鹿场２４５０余头成年鹿，其阳性率最高者为９９．８％，最低者为１．１％，     

羊常见病的防治

1羊快疫羊快疫是由厌气性腐败梭菌引起的羊的一种急性传染病,发病突然,病程短。其特征为真胃出血性、炎性损害,绵羊最易感染,在秋、冬和初春气候骤变,阴雨绵绵时多发。在本病常发地区,每年可定期注射羊快疫、猝疫、肠毒血症三联苗或羊快疫、猝疫、肠毒血症、羔羊痢疾、黑疫五联     

禽流感——鸡新城疫重组二联苗(rL-H5株)推广应用

通过试验表明,应用禽流感-鸡新城疫重组二联活疫苗（rL—H5株）预防禽流感、鸡新城疫,具有使用安全、方便、价格便宜等优点。     

EDS76—ND二联油乳剂苗的研究

本试验以减蛋综合症(EDS76)病毒株,新城疫(ND)Laosota 株为制苗毒株,分别经鸭胚和鸡胚增殖后,甲醛灭活.灭活毒液按适当比例混合加入油佐剂中,乳化制成“二联苗”.对所研制的二联苗的安全性、保存期、免疫效力等进行测试.结果表明:1.疫苗本身安全,对鸡无副作用;乳化度、稳定性和通针性良好;易于保存,常温避光6个月以上,4℃左右12个月,免疫效力无明显下降(P>0.05).2.疫苗免疫效果良好.ND于注苗后7天即产生免疫(HI抗体效价GMT log2为 7.5);EDS76免疫产生较慢,15天可产生较强免疫(HI价为7.3log2);两种HI抗体均于免疫后21天达到高峰值(ND为10.7long2.EDS76为10.2log2);免疫期可持续一年左右,即免疫活360天时,ND、EDS76两种HI抗体分别为7.1log2和6.2log2.区域试验免疫蛋鸡100多万只,临床调查可抽检证明该苗质量稳定,效果良好.     

兔病毒性出血症与A型魏氏梭菌二联苗的研究

将兔病毒性出血症疫苗与浓缩的A型魏氏梭菌菌苗按1：1混合制成联苗。试验证明，此苗安全有效。联苗2ml／只免疫，兔病毒性出血症第4天可产生免疫力，保护率为100％；A型魏氏梭菌21天产生免疫力，保护率为82．14％。     

鹿结核病流行株与卡介苗差异基因原核表达质粒的构建及表达

以吉林农业大学经济动物疾病实验室保存的鹿体内分离并鉴定的结核病流行株的基因组为模板,应用PCR方法从已构建的鹿结核病野毒株与卡介苗差异基因文库中扩增RD1区的Rv3872、Rv3873、Rv3874、Rv3875和Rv3878 5段目的基因,分别与p MD18-T Simple Vector连接,经PCR、酶切鉴定后的阳性重组克隆质粒与原核表达载体p GEX-4T-1连接并进行原核表达,采用谷胱甘肽琼脂糖亲和层析方法对目的蛋白进行纯化,通过SDS-PAGE和Western blot对表达产物的反应原性进行初步研究。基因测序结果显示差异基因与期望的序列一致,并在大肠杆菌中成功诱导表达,获得以可溶形式表达的目的蛋白,经SDS-PAGE分析目的蛋白的相对分子量与理论值相符,经Western blot鉴定纯化好的目的蛋白能与鹿结核病的阳性血清发生反应,具有良好的反应原性,为其在鹿结核病血清诊断学中的应用奠定了试验基础。