九孔鲍肠道及其养殖水体中弧菌产酶能力的分析

从汕尾健生鲍鱼场养殖水体和九孔鲍肠道中共分离筛选到25株弧菌,其中14株来自成鲍肠道,11株来自养殖水体,并对它们产多种胞外酶的能力进行了比较分析。试验结果表明:78.6%的肠道弧菌能分泌蛋白酶,21.4%能分泌脂肪酶,64.3%能分泌卵磷脂酶或淀粉酶,92.9%能分泌明胶酶;水体中的弧菌63.6%能分泌蛋白酶,54.5%能分泌脂肪酶或明胶酶,72.7%能分泌卵磷脂酶,100%能分泌淀粉酶。同时筛选出5株胞外酶分泌能力超强的菌株,除分泌蛋白酶能力最强的弧菌(Bh14)来自鲍鱼肠道外,其余分泌其它4种胞外酶能力最强者(Sh05、Sh03、Sh11、Sh08)均来自养殖水体。研究还发现来自水体的弧菌分泌多种胞外酶能力强于来自肠道的弧菌。由此提示,应用有益微生物以改善鲍鱼肠道中的菌群结构,可能会提高鲍鱼饲料利用率。     

健康和患病稚黑鲍中微生物产胞外酶的分析比较

2005年初自福建漳浦鲍鱼场患病以及健康稚黑鲍中各分离到27和56株异养细菌,在此基础上研究了它们产胞外蛋白酶、淀粉酶、明胶酶、磷脂酶及溶血能力。结果表明,虽然来自健康鲍的菌株产胞外酶的数量明显大于来自病鲍的菌株,但来自病鲍的菌株具有强分泌胞外酶能力的比例明显大于来自于健康鲍的菌株。综合考虑每一种胞外酶的潜在致病作用,以及菌株分泌多种胞外酶的能力,最后确认10株菌为潜在的致病菌。     

福建大连1号杂交鲍肠道及养殖水体中细菌产酶能力的分析

从大连1号杂交鲍养殖水体及肠道中分离出18株弧菌和32株异养型细菌,对其进行革兰氏染色及产胞外酶能力的分析。结果表明,养殖水体中分离出的14株弧菌和22株异养细菌,共有22株(61.1%)具有分泌脂肪酶、卵磷脂酶、明胶酶、蛋白酶、淀粉酶或溶血毒素的能力;鲍肠道分离出的4株弧菌和10株异养细菌,共有9株(64.3%)具有此产酶能力。但总体上,从水体中分离出的菌株的产酶能力要强于从鲍肠道中分离出的菌株,且数量更多,尤其是水体中异养细菌。在所有的50株菌株中,有2株(4%)具有产3种酶(脂肪酶、卵磷脂酶和溶血素)的能力;有9(18%)株具有产2种酶的能力。产酶菌株大部分为革兰氏阴性。本次试验对鲍肠道及养殖水体中菌株产酶能力进行了分析,为大连1号杂交鲍在南方的健康养殖提供科学依据。     

杂色鲍健康苗种与患病苗种异养细菌致病毒力因子的比较研究

2002年以来,南方杂色鲍苗出现大规模死亡的问题,严重影响到南方鲍产业的发展。为寻找病因,于2004年自广东深圳下沙鲍鱼场培苗过程中变白掉板的杂色鲍苗以及官湖养殖场健康鲍苗各分离到19株和15株异养细菌,在此基础上研究了它们蛋白酶、淀粉酶、明胶酶、磷脂酶的产酶能力及溶血现象,并对它们的产酶能力及溶血能力进行了比较分析。结果表明,虽然来自下沙病鲍苗的菌株比来自官湖的健康鲍苗的溶血能力差;但它们大多数具有较强的分泌蛋白酶、明胶酶、淀粉酶、磷脂酶的能力。考虑到胞外酶是细菌的毒力因子之一,据此推测,下沙鲍鱼场鲍苗发生脱板死亡的原因可能与这些菌株能分泌胞外酶有关。     

九孔鲍精子发生的超微结构

利用透射电镜观察九孔鲍（Haliotis diversicolor aquatilis）精子的发生过程。结果表明,九孔鲍精子的发生历经精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞、精细胞和成熟精子5个阶段。其中精细胞的分化可分为5期,主要特点为：Ⅰ期,一些高电子致密颗粒参与顶体的形成;Ⅱ期,核形态由椭圆形到近圆形,再逐渐拉长为长圆柱状;Ⅲ期,核染色质以颗粒状形式凝集,最后向高电子密度均质状态转变;IV期,线粒体逐步融合、体积增大和嵴发达;Ⅴ期,中心体移动及鞭毛形成,胞质逐渐减少。成熟精子为原生型,由头部、中段和尾部组成。通过观察精子发生过程中细胞形态结构的变化,分析了其演变规律,同时与软体动物的其他种类作了比较研究。     

杂色鲍与九孔鲍种质资源研究进展

杂色鲍和九孔鲍是我国南方鲍养殖业的主要对象,九孔鲍与杂色鲍的分类关系,学术界一直存在着不同看法。文章综述了我国杂色鲍和九孔鲍在形态学、染色体核型、生化遗传学及分子遗传学方面种质研究的主要进展,得出二者间差异属于种群差异,台湾的九孔鲍和大陆的杂色鲍的种质差异达不到亚种水平的结论。提出了自己的观点,并提出了合理引种及保护原种的建议。     

盐度对九孔鲍胚胎发育的影响

本文采用单因素试验方法研究了盐度对九孔鲍胚胎发育的影响.结果表明九孔鲍胚胎发育的最低和最高临界盐度分别是20和38,适宜盐度范围为26～36,最适盐度范围为30～32.实验说明,在适宜盐度范围内,盐度对九孔鲍胚胎发育的影响是十分显著的.     

海南省九孔鲍苗病害的病因分析及对策

随着我国水产养殖业的蓬勃发展,养殖环境日益恶化,病害防治问题已成为广大养殖者的心头之患。为此自本期起,我刊新设立“防治实例”这一栏目,集中刊登一些关于在病害防治过程中得到的经验和教训的文章,便于大家参考与借鉴。同时也欢迎广大读者结合自己的病害防治实例谈谈体会与心得,积极投稿,共同探索有效方法把养殖损失降到最低。     

九孔鲍血清凝集素凝集作用的研究

试验表明九孔鲍血清中存在凝集素,可以凝集多种脊椎动物和人各型的血细胞,尤其对兔血细胞有很高的凝集效价(28)。该凝集素具有一定的热稳定性,40~50℃处理20 m in,其凝集活性稳定,70℃以上处理20 m in,凝集效价完全被破坏;pH 6~12凝集活性均保持最高值;Ca2 、Mg2 和ED-TA不影响其凝集活力;盐度对凝集活性影响不大,盐度为6~48,凝集活性一致;乳糖、D-甘露糖、D-果糖、D-半乳糖、D-葡萄糖、蔗糖、木糖、麦芽糖、L-鼠李糖和山梨糖等10种糖对其不产生凝集抑制作用。     

九孔鲍养殖水体及消化道细菌学的研究

2002年对汕尾健生鲍鱼养殖场养殖水体和鲍消化道中异养细菌及弧菌的数量和类群组成进行了研究。研究结果表明:养殖水体中异养细菌数量的四季变化从2 4×104～1 3×105cfu ml,平均为7 6×104cfu ml;消化道中异养细菌数量四季变化则从1 6×107～5 4×107cfu g(湿重),平均为3 3×107cfu g。水体中弧菌数量四季变化从1 2×104～5 1×104cfu ml,平均为2 5×104cfu ml;而消化道中弧菌数量四季变化则从2 8×105～3 8×105cfu g,平均为3 2×105cfu g。水体中细菌类群由Sphingomonas,Vibrio,Pasteurella,Moraxella,Pseudomonas,Aeromonas,Flavobacterium,Klebsiella,Weeksella和Alcall组成,消化道中细菌类群由Sphingomonas,Vibrio,Aeromonas,Flavobacterium,Shewanella,Sphingobacterium,Pseudomonas组成,水体和消化道弧菌种类主要为Vibriofluvialis,Vibrioparahaemolyticus,Vibriovulnificus,Vibriocholerae,Vibriominicus,Vibrioalginolyticus。并对不同养殖场水源弧菌数量也进行了比较。     

九孔鲍消化道及养殖水体中弧菌胞外毒力因子的分析

从汕尾健生鲍鱼养殖场成鲍养殖水体和消化道中分离筛选到22株弧菌,其中14株来自成鲍消化道,8株来自养殖水体。本文对这两种不同来源的菌株进行了致病因子(胞外酶及溶血毒素)的分析比较,同时采用API条带法对其进行了种类鉴定。结果发现,消化道中除1株溶藻弧菌和3株最小弧菌外,其余均为河流弧菌;而水体中除副溶血弧菌和创伤弧菌各1株外,其他也均为河流弧菌。实验还发现,在5株胞外酶分泌能力最强的弧菌中,只有Sh031株是副溶血弧菌,另外4株(Bh14、Sh02、Sh08、Sh05)均为的河流弧菌。结果显示,无论是养殖水体还是消化道,河流弧菌都应视为一种海水养殖贝类(鲍)的主要条件致病菌,是能力较强的胞外致病因子生产者。     

Isolation and characterization of pathogenic Vibrio alginolyticus from diseased postlarval abalone, Haliotis diversicolor supertexta (Lischke)

Outbreaks of serious mortality among cultured abalone postlarvae have occurred across Southern China since July 2002. Five motile bacterial strains were isolated from diseased abalone postlarvae on tryptic soy agar supplemented with 1% NaCl (TSA1) and/or thiosulphate citrate bile salt (TCBS) sucrose agar plates during an outbreak in August 2003 in Shanwei, Guangdong province. All isolates were characterized and identified as Vibrio alginolyticus on the basis of biochemical characteristics and comparisons with those of the reference strain V. alginolyticus ATCC 17749. Strain 19 (a representative of five similar isolates) was virulent to abalone postlarvae with an LD₅₀ value of1.00 × 10⁴ colony‐forming units mL^?1. All abalone postlarvae exhibited the same signs as in natural outbreaks. The same bacterium could be re‐isolated from abalone postlarvae after bacterial challenge using TSA1 and TCBS plates. The results reveal that V. alginolyticus is an infectious agent of abalone postlarvae.     

鲍消化道及其养殖水体异养菌的耐药性研究

采用纸片扩散法对分离自福建省皱纹盘鲍(Haliotis discus hannai)消化道及其养殖水体中的284株异养细菌(其中消化道菌131株,水体菌153株)进行药物敏感测试,以期了解其耐药性概况。结果显示,皱纹盘鲍消化道与养殖水体异养菌对多种抗菌药物的耐药率差异不明显,大部分菌株对青霉素、卡那霉素、庆大霉素、利福平产生耐药性,耐药率最高达83.95%,而对诺氟沙星、恩诺沙星、氯霉素耐药率较低,受试的水体异养菌对诺氟沙星耐药率为0;不同来源菌株的多重耐药(multiple antibiotic resistance,MAR)现象普遍,消化道及其养殖水体异养菌的多重耐药率均值分别为59.15%和51.31%。该研究同时发现相同分离源的菌株对青霉素、卡那霉素、庆大霉素和利福平的耐药率呈现一定的季节波动规律,消化道异养菌于9月耐药率最低,而水体异养菌耐药率在6月最低。结果表明,皱纹盘鲍消化道及水体异养菌的多重耐药率较高,耐药状况较严重。     

Settling and raising postlarval abalone Haliotis diversicolor supertexta (Lischke) on microparticulate diets embedded in a layer of alginate

Two 21 day experiments were conducted to determine whether microparticulate diets could be used to substitute for diatoms for raising (Experiment 1) as well as settling and on‐growing (Experiment 2) Haliotis diversicolor supertexta postlarvae. The experiments were conducted in 10 L flow‐through tanks and each diet had three replicate tanks. In experiment 1, three experimental microparticulate diets supplied by a commercial feed company, labelled SF‐15, SF‐15 (T) and JFY‐13–1, were used, and in experiment 2, SF‐15 and SF‐15 (T). Artificial diets were compared to diatoms in terms of supporting growth and survival. The survival rate for experiment 1 was lowest for JFY‐13–1 (0%) and highest for diatoms (12.9±0.8%). The final size of postlarvae fed SF‐15 and SF‐15 (T) was significantly greater than that of postlarvae fed diatoms, 973±193 μm and 996±220 μm compared to 786±141 μm. In experiment 2, a total number of 501 larvae settled onto plates covered with SF‐15, 254 on SF‐15 (T) and 1085 on diatoms. The highest survival rate was 33.1±6.9% for SF‐15 and the lowest was 17.3±5.0% for diatoms. However, the final length of postlarvae fed diatoms was significantly greater than SF‐15 and SF‐15 (T); 1018±379 μm compared to 728±89 μm and 717±90 μm. The artificial micro diets used in this study were comparable to diatoms in terms of grow and survival of postlarval H. diversicolor supertexta.     

河口水体中的菌群分析及其脱氮能力的研究

从天津渤海湾三个河口六个站位采集水样,用Zobell2216E培养基分离共得到92株异养细菌,其中G+52株,G-40株。对其形态和生理生化性状进行分析,初步研究结果表明,他们主要分属葡萄球菌、微球菌、不动杆菌、莫拉氏菌、芽孢杆菌、弧菌、产碱杆菌、肠杆菌、假单胞菌。选择假单胞菌属、葡萄球菌属、产碱杆菌属、芽孢杆菌属,研究其在含氮量较高的所采河口水样中(无机氮含量>0.3 mg/L)的脱氮能力,于0、3、6、9、12、15 h不同时间测定水样中的亚硝酸盐氮、硝酸盐氮、氨氮含量。实验结果表明经过9 h的培养测定,水样中的无机氮含量明显降低,但9 h以后除假单胞菌的水样无机氮含量继续降低之外,其他三个菌种水样无机氮含量开始上升。确定四个菌种的最佳脱氮时间为9 h,且芽孢杆菌的脱氮能力最强。     

Molasses as C source for heterotrophic bacteria production on solid fish waste

The drumfilter effluent from a recirculation aquaculture system (RAS) can be used as substrate for heterotrophic bacteria production. These bacteria can be reused as aquatic feed. In RAS drumfilter effluents are organic carbon deficient for bacteria production. This is due to nitrogen accumulation in the system water. In the present experiment, a bacteria growth reactor (3.5l) was connected to the drumfilter (filter mesh size 60 μm) outlet of a recirculation system. To counteract carbon deficiency, different supplementation levels of molasses (organic carbon) were tested (carbon fluxes of 0.0, 3.2, 5.8, 7.8, 9.7 gC molasses/l/d; C:N ratios: 3.4, 6.4, 9.4, 13.0 and 16.5). The hydraulic retention time in the bacteria reactor was 6 h. For the maximum flux, the VSS and crude protein productions were about 168 gVSS and 95 g crude protein per kg feed. The maximum conversion of nitrate and ortho-phosphate was 24 g NO₃₋N and 4 gP/kg feed. This equals a conversion of 90% of the inorganic nitrogenous waste and 98% of the ortho-phosphate-P. Furthermore the maximum substrate removal rate and the K_s for molasses were determined (1.62 gC/l/h and 0.097 gC/l respectively). The maximum specific removal rate was 0.31 gC/gVSS/h and the related half saturation constant was 0.008 gC/l. The observed growth rate reached a maximum for C fluxes higher than 8 g/l/d. The present integration of heterotrophic bacteria production in RAS represents, therefore, an innovative option to reduce waste discharge by conversion. If the bacteria are reused as feed, system's ecological sustainability increases.     

流沙湾海区异养菌和弧菌动态变化规律研究

对流沙湾海区异养菌、弧菌动态变化规律及其优势菌群进行了初步探讨。采用平板稀释法对异养菌和弧菌数量进行了周年检测;对优势菌株进行分离纯化,并对代表性月份样品优势菌中的弧菌进行菌种鉴定。结果显示,流沙湾海区的异养菌和弧菌密度分别为8.8×103~9.60×105cfu/mL和1.0×103~2.45×104cfu/mL,其中异养菌数量高峰出现在6月,弧菌数量高峰出现在12月,异养菌、弧菌数量与水温变化的相关性不明显;流沙湾海区优势菌群中存在着溶藻弧菌等多种致病性弧菌。     

苏州市患病水生动物体内细菌的分离鉴定及药敏试验

为了解苏州市不同地区患病水生动物组织中感染细菌的种类及其耐药性,于2014年6～10月从不同地区采集的患病鱼、虾、蟹和中华鳖组织中共分离到14株细菌,通过16S rRNA基因分析对细菌进行了鉴定,并调查了他们对链霉素、恩诺沙星、强力霉素、庆大霉素硫酸盐和甲砜霉素等5种抗生素的抗性及最低抑菌浓度。结果显示:从不同地区水生动物分离到的同种细菌对同种抗生素的抗性有明显差异,其中,分离到的嗜水气单胞菌及摩根氏菌有多重耐药性;对14株细菌进行质粒抽提和琼脂糖凝胶电泳分析,发现8株细菌中存在分子量不同的质粒,且不同地区来源的同种细菌所含有的质粒的分子量不同,耐药性较强的嗜水气单胞菌和摩根氏菌均含有质粒;嗜水气单胞菌质粒的序列测定结果显示,该质粒与其抗药性无关;转化实验结果显示,从摩根氏菌分离的1.8 kb质粒与氨苄青霉素抗药性有关。     

来源于腌干鱼的乳酸菌中抗氧化酶及胞外多糖研究

为研究从腌干鱼中获取的乳酸菌在细胞内外起抗氧化作用的主要活性物质,通过测定菌株胞内的超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和过氧化氢酶(CAT)活性以及提取胞外多糖(EPS)并测定其抗氧化性,利用超高效液相色谱法(UPLC)分析其结构。结果显示,9株菌的SOD、GSH-Px和CAT的最高活性分别为44.67、15.26和1.23 U/mg prot,对应菌株为L21、L4和L21;9株菌的EPS产量为(5.71±0.18)~(50.33±1.89)mg/L,L21的EPS最高纯度为56.16%±1.08%。L21中EPS的DPPH自由基清除能力和还原能力较高,综合抗氧化能力相对较强,结构分析发现其含有甘露糖(Man)、鼠李糖(Rha)、葡萄糖(Glu)和半乳糖(Gal)等4种单糖。研究表明,分离自腌干鱼的乳酸菌中,抗氧化能力越强的菌株细胞内表现出越高的抗氧化酶活性,同时细胞外EPS的产量和纯度也较高,并且EPS也具有较强的抗氧化能力。从中筛选出一株综合抗氧化能力最强的L21,可以进一步作为生物源性抗氧化剂。