蜂胶渣提取物对青枯劳尔氏菌的抑制活性鉴定

青枯劳尔氏菌(Ralstonia solanacearum)是引发桑青枯病的病原细菌。为了寻求防治桑青枯病的天然药剂,以工业提取黄酮化合物剩余的蜂胶渣为原料,经甲醇、乙醇、乙酸乙酯、氯仿及石油醚等溶剂分级浸提获得除蜡蜂胶渣提取物。通过比浊法测试不同极性溶剂提取物对青枯劳尔氏菌5个生理小种菌株均有一定的抑制作用(抑菌率8.36%~99.73%),其中乙醇提取物的抑菌活性显著高于其他溶剂的提取物(P0.05)。0.1 mg/m L除蜡蜂胶渣乙醇提取物对青枯劳尔氏菌RS-5菌株的抑制率达91.61%±4.75%,最低抑菌浓度为0.25 mg/m L,最小杀菌浓度为4 mg/m L,用扫描电子显微镜观察到部分病原细菌发生变形和细胞壁破损,用平板法监测到菌体的泳动性能受到不同程度抑制。基于负离子全扫描模式的LC-MS谱图鉴定除蜡蜂胶渣中主要含有咖啡酸及其酯类化合物(包括咖啡酸丙酯、咖啡酸丁酯、咖啡酸苯乙酯及咖啡酸戊酯),采用选择性反应监测模式外标法检测出其中所含咖啡酸和咖啡酸苯乙酯的质量比为1∶3.3。研究结果表明,除蜡蜂胶渣的乙醇提取物对青枯劳尔氏菌具有良好的抑制活性,发挥抑菌活性的主要成分可能是咖啡酸及其酯类衍生物,该提取物有进一步开发为天然来源的桑青枯病防控药剂的潜力。     

桑丁香假单胞菌糖基水解酶基因的克隆及表达分析

桑疫病的病原是一种丁香假单胞菌(Pseudomonas syringae),其感染造成桑树幼枝断裂,但分解桑枝的机制尚未发现。以GenBank中同种的另一丁香假单胞菌的序列为参照,通过PCR法克隆了桑疫病病原细菌的糖基水解酶基因。该基因的读码框为1 173 bp,编码390个氨基酸,与已公布的丁香假单胞菌属细菌(pv.syringae B728 a)的纤维素酶基因的核苷酸同源性为94%,氨基酸的同源性为97%。对该肽段的序列进行分析,确定了保守位点和各个功能域的序列。将该基因克隆到原核表达载体pET28 a中,在大肠杆菌中进行了表达。Western blotting检测的结果表明,该基因在大肠杆菌中获得高效表达,酶活力为2.3×103U/L,说明该基因产物具有分解纤维素的酶活性。     

桑树上新发生的细菌性枝枯病病原的研究

据病害症状、病原菌分离、纯化及致病性、生理生化特性、冰核活性（ＩＮＡ），血清学的试验结果，证明桑树枝枯病的病原细菌是一种丁香假单胞菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｓｙｒｉｎｇａｅ），具有冰核活性。它与桑细菌性疫病的病原细菌具有部分同源的血清学关系，但在发病症状及侵染部位，侵染时期等方面明显不同，所以认为桑细菌性枝枯病病原细菌可能是丁香假单胞菌组群中一个新的致病变种（Ｐａｔｈｏｖａｒ）。     

枯草芽孢杆菌和沼泽红假单胞菌对鲫鱼免疫机能的影响及其代谢产物的抑菌活性研究

为了检测枯草芽孢杆菌和沼泽红假单胞菌对鲫鱼免疫机能的影响及其代谢产物对小肠耶尔森氏菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑菌活性,试验将鲫鱼分成3组,分别为沼泽红假单胞菌组、等比例沼泽红假单胞菌和枯草芽孢杆菌的复合菌组和未加菌处理的对照组,在养殖水体中分别加入不同的微生物,在第30天静脉采血,测定血浆中碱性磷酸酶(ALP)、总超氧化物歧化酶(SOD)、溶菌酶(LZM)的活性以及丙二醛(MDA)的浓度;利用超声波破碎细胞,旋蒸浓缩得到枯草芽孢杆菌和沼泽红假单胞菌胞内外代谢产物,采用牛津杯法以小肠耶尔森氏菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌为指示菌株,测定代谢产物的抑菌圈直径。结果表明:沼泽红假单胞菌组与复合菌组的鲫鱼血浆中ALP的活性显著高于对照组(P0.05),LZM活性高于对照组,MDA的浓度低于对照组,SOD的活性与对照组的差异不显著(P0.05);两种菌的胞外代谢产物对金黄色葡萄球菌的抑菌活性较强,沼泽红假单胞菌胞内代谢产物对金黄色葡萄球菌的抑菌活性较强,枯草芽孢杆菌胞内代谢产物对小肠耶尔森氏菌抑菌活性较强。说明沼泽红假单胞菌和复合菌对鲫鱼的免疫机能有一定的增强作用,两种益生菌胞内外代谢产物对小肠耶尔森氏菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌均有抑制作用。     

沙枣水提物体外抗菌作用研究

目的:探讨新疆沙枣水提取物在体外抗菌作用。方法:采用纸片琼脂扩散法(KB法)和试管连续(对倍)稀释法对新疆沙枣水提取物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、伤寒杆菌、乙型副伤寒杆菌、铜绿假单胞菌等菌株的抑菌圈直径,抗菌活性,最低抑菌浓度(MIC)及最低杀菌浓度(MBC)进行实验研究。结果:新疆沙枣水提取物在体外对对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、伤寒杆菌、乙型副伤寒杆菌、铜绿假单胞菌等其他菌种都没有抑菌效果,只对褔氏痢疾杆菌有轻微的抑菌作用。结论:新疆沙枣水提取物对褔氏痢疾杆菌有一定的抑制作用。     

6种酚类化合物及胡桃醌的体外抑菌活性

核桃青皮提取物具有较好的抑菌作用,本试验以核桃青皮及叶片中含量较高的7种植物次生代谢物为研究对象,评价其抑菌活性,为解析核桃青皮提取物的抑菌活性及开发新的饲用抗生素替代品提供参考。以大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌为受试菌,将7种植物次生代谢物——绿原酸、鞣花酸、丁香酸、芦丁、单宁酸、对羟基苯甲酸和胡桃醌分别稀释至1.000 0、0.500 0、0.250 0、0.125 0和0.062 5 mg/m L,采用滤纸片扩散法,以培养24 h后抑菌圈直径大小反映植物次生代谢物的抑菌活性。结果显示:除大肠杆菌对羟基苯甲酸和单宁酸不敏感外,其他植物次生代谢物对3种受试菌均有不同程度的抑制作用。对大肠杆菌抑制作用的顺序为鞣花酸胡桃醌芦丁=丁香酸绿原酸对羟基苯甲酸=单宁酸;对枯草芽孢杆菌抑制作用的顺序为鞣花酸绿原酸=对羟基苯甲酸丁香酸单宁酸芦丁胡桃醌;对金黄色葡萄球菌抑制作用的顺序为胡桃醌丁香酸芦丁单宁酸鞣花酸对羟基苯甲酸绿原酸。由此得出,绿原酸、鞣花酸、丁香酸、芦丁、单宁酸、对羟基苯甲酸和胡桃醌对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌具有不同程度的抑制作用,其中鞣花酸对大肠杆菌和枯草芽孢杆菌有较强的抑制作用,胡桃醌对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌具有较强的抑制作用。     

乳过氧化物酶对常见食品污染菌的抑制作用

分别采用分光光度法、菌体量法及孔扩散法研究了乳过氧化物酶（简写LP）对细菌和霉菌的抑菌活性及LP浓度、pH值和温度对抑菌活性的影响。结果表明：LP对于各供试菌均有很好的抑菌效果。其中，LP对铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌和产黄青霉的抑制作用最显著，5μg／mL就能完全抑制他们的生长；在中性偏酸性环境中的抑菌活性比碱性环境的抑菌活性强；一定温度内处理不影响LP的抑菌活性；在中性条件下抑制供试革兰氏阴性菌和霉菌的能力强于Nisin。     

连翘提取物对铜绿假单胞菌群体感应系统的影响

为了研究连翘提取物对铜绿假单胞菌群体感应系统的影响,试验采用紫色杆菌CV026初步观察连翘提取物的群体感应抑制作用,并将不同浓度的连翘提取物与铜绿假单胞菌共同培养,通过测定铜绿假单胞菌生长曲线、生物被膜、鼠李糖脂、绿脓素及蹭行运动的变化,进一步研究连翘提取物对铜绿假单胞菌群体感应系统的抑制作用。结果表明:连翘提取物在亚抑菌浓度下能够降低紫色杆菌紫色菌素的分泌;连翘提取物浓度低于250 g/L时,可抑制生物被膜形成、鼠李糖脂及绿脓素的分泌并减弱铜绿假单胞菌蹭行运动能力,并呈浓度依赖性。说明连翘提取物对铜绿假单胞菌的群体感应系统起抑制作用。     

蜂胶及其组分的抗螨作用

<正>蜂胶含有十分丰富的黄酮类、酚酸类及萜烯类等化合物,具有广泛的生物学和药理学活性,如抗病源微生物、抗氧化、抗炎、抗肿瘤、护肝、降血脂、降血糖、免疫调节等。人们普遍认为蜜蜂采集蜂胶主要用于保护蜂巢,如填补孔洞、修补裂缝、润滑巢房内壁等。然而,蜂胶似乎还作为一种抗菌剂来防止蜜蜂幼虫、贮蜜和蜂巢受到微生物的侵染;在养蜂生产实践中,曾被用来防治一些蜜蜂疾病。Bilikova等(2013)研究证明蜂胶中咖啡酸苯乙酯、异戊烯基咖啡酸酯类及咖啡酸苯甲酯     

中西药联用对水貂源铜绿假单胞菌体外抑菌作用

探讨中西药联用对水貂源铜绿假单胞菌的体外抑菌效果,并筛选具有较强抑菌作用的中西药组合,为临床用药提供建议和参考。采用水提法提取中草药有效成分,试管二倍稀释法测定6种药物对水貂源铜绿假单胞菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC),微量肉汤棋盘稀释法测定9个药物组合联用指数(FIC)。结果表明,6种药物对水貂源铜绿假单胞菌分离株均有不同程度的抑菌活性,单用时以环丙沙星抑菌效果最佳;在9个中西药联用组合中,氟苯尼考和黄芩、连翘、诃子组合,阿米卡星和连翘组合以及环丙沙星和连翘组合在抑菌效果上表现为显著协同作用;环丙沙星和诃子组合在抑菌效果上表现为协同作用;阿米卡星和黄芩在抑菌效果上表现为相加作用;环丙沙星和黄芩组合在抑菌效果上表现为无关作用;阿米卡星和诃子组合在抑菌效果上则表现为拮抗作用。说明中西药联用具有一定的抑菌作用,为今后药物防治水貂铜绿假单胞菌感染奠定基础。     

桑树芽条枯萎病病原研究 I.病原分离及致病性测定

笔者对陕西省安康地区桑园春季发生的一种梢条和嫩芽枯萎病害的病原作了初步研究,从感病材料各典型病部分离得到桑Ⅰ号菌和桑Ⅱ号菌,经LOPAT部分项目测定及常规致病性测定,究明桑Ⅰ号菌(丁香假单胞杆菌)为该病害主要致病细菌,桑Ⅱ号菌(草生欧氏杆菌)可以引起感染,其症状不如Ⅰ号菌典型,但两菌混合接种有加重病情的现象,故与本病害有密切的关系.     

36种中药提取物对罗非鱼大肠杆菌和华纳葡萄球菌的抑菌效果研究

研究36种中药对罗非鱼大肠杆菌和华纳葡萄球菌的体外抑菌效果。采用水提法提取芦根、地榆、苦参、黄芩、大青叶、黄柏、丁香、蛇床子、连翘、金银花、栀子、山楂、黄连等36种中药有效成分,采用肉汤二倍稀释法测定中药提取物对大肠杆菌和华纳葡萄球菌的最低抑菌浓度(MIC),选择抑菌效果较好的单药进行联合抑菌试验。结果表明,山楂对罗非鱼大肠杆菌抑菌效果最佳,MIC值为31.250 mg/mL;栀子、地榆、丁香对罗非鱼华纳葡萄球菌抑菌效果较好,MIC值为62.500 mg/mL。联合用药结果显示,在对大肠杆菌的体外抑菌试验中,大青叶与地榆、大青叶与黄连、大青叶与山楂、地榆与丁香、地榆与山楂、丁香与黄连、丁香与山楂、黄连与山楂等药物联合均为拮抗作用(FIC指数>2.000),其余发生沉淀反应;在对华纳葡萄球菌的体外抑菌试验中,只有山楂和黄连联用时有相加作用,其FIC值为1.000,其余均为无关作用或发生沉淀反应。由此可见,两种中药进行联合用药有可能产生无关甚至拮抗等作用,反而导致抑菌活性降低。     

荧光假单胞菌防治植物病害研究现状与展望

随着植物病害的日趋严重,生物防治已经成为国内外学者研究的重点,其中,荧光假单胞菌尤为重要。本研究综述了荧光假单胞菌的培养特征(形态特征、生理生化特性、培养条件和与其他菌的异同);从不同类群的植物分离到防治病害的荧光假单胞菌;荧光假单胞菌的生防效果(单独使用和与其他菌或物质交互使用的防治效果);荧光假单胞菌及活性物质防治植物病害的作用方式和作用机理;荧光假单胞菌在医学、农业和环保领域中的危害。对其风险和在生物防治领域的发展前景做了评价和展望。     

沼泽红假单胞菌与鸡肠源沙门氏菌颉颃作用的研究

为了探索和研究沼泽红假单胞菌及代谢物对鸡肠源沙门氏菌生长繁殖的抑制或颉颃作用,试验采用不同培养方式分别观察沼泽红假单胞菌全菌液、菌体及代谢混合物与鸡肠源沙门氏菌和甲型副伤寒沙门氏菌标准菌株的颉颃或抑菌现象,检测其最小抑菌浓度,并测定其繁殖生长曲线以定量评价其抗菌活性。结果表明:沼泽红假单胞菌全菌液、菌体及代谢混合物对鸡肠源沙门氏菌分离株和甲型副伤寒沙门氏菌都具有抑制或颉颃作用。相比较而言,萃取得到的沼泽红假单胞菌菌体及代谢混合物的抑菌作用更明显。说明沼泽红假单胞菌是一个不错的治疗和控制鸡肠源沙门氏菌感染的益生菌。     

药用植物柽柳内生真菌分离及其抑菌活性初步研究

为探明药用植物柽柳内生真菌资源的多样性及其抑菌活性特征,通过组织块法对内生真菌进行了分离,并选择小麦全蚀病菌、枸杞黑果病菌、番茄灰霉病菌、黄瓜枯萎病菌、黄瓜立枯病菌5种植物病原真菌和枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌4种细菌作为指示菌,采用对峙法和改进的菌块法测定其抑菌活性。结果显示,从柽柳不同组织器官中分离出18株内生真菌,茎部最多,根部次之,叶部最少;经形态学初步分类鉴定归于2个目,3个科,7个属;有11株菌对2种或多种植物病原真菌有不同程度的抑制作用,占菌株总数的61.1%,有8株内生真菌只对金黄色葡萄球菌具有明显抑制作用,占分离菌株总数的44.4%;活性内生真菌菌株TCEFL001分别对枸杞黑果病菌、小麦全蚀病菌以及金黄色葡萄球菌具有明显抑制作用,属于组丝核菌属。药用植物柽柳具有较为丰富的内生真菌资源,其开发和利用值得进一步探究。     

致水貂出血性肺炎铜绿假单胞菌胞外产物生物活性及免疫保护力分析

胞外产物在细菌致病过程中发挥重要作用,为探索胞外产物在铜绿假单胞菌致病过程中的作用,首先从铜绿假单胞菌培养液提取其出其胞外产物,利用小鼠模型分析其致病性,并通过细胞证实了该产物对巨噬细胞功能的抑制作用,进一步测定其胞外产物的酶活性并利用LC-MSMS方法对铜绿假单胞菌胞外产物蛋白成分和功能进行分析。结果表明,铜绿假单胞菌胞外产物对小鼠有致病性,能够显著抑制巨噬细胞吞噬细菌活性,其具有淀粉酶、脂肪酶、蛋白酶、卵磷脂酶活性和溶血活性可能在这一过程中发挥关键作用。LC-MSMS分析鉴定所提纯的胞外产物中有153种蛋白成分,涉及多种酶类、细胞结构蛋白和功能性蛋白。用低剂量胞外产物免疫动物对于铜绿假单胞菌感染具有较明显的保护率,可达90%。本试验为揭示铜绿假单胞菌致病机理,研制新型疫苗奠定基础。     

多靶点的抗菌先导化合物的虚拟筛选及活性研究

铜绿假单胞菌和大肠杆菌是医院和兽医临床上常见的病原菌,容易造成人类和动物感染,给疾病治疗和经济发展带来极大的挑战。为了开发出靶向铜绿假单胞菌和大肠杆菌黏肽合成酶(PBPs)的新型先导化合物,笔者以铜绿假单胞菌PBP3和大肠杆菌PBP1b、PBP4、PBP5作为靶点,针对ZINC数据库,使用分子对接软件DOCK6.5进行了虚拟筛选。之后,根据得分情况和结构分析,找出了具有全新结构的先导化合物,进行了有机合成,并检验了抑菌效果。经过以Grid score为评价标准的初次筛选后,所有得分数值低于-125.6kJ·mol~(-1)的化合物进入二次筛选,并进行Amber score打分,最终获得约200个得分数值低于-83.7kJ·mol~(-1)的化合物。对这些化合物的结构进行分析后,以ZINC00053282为先导化合物进行了合成和结构验证。抑菌试验结果表明,筛选出的先导化合物对革兰阳性和阴性菌均具备抑菌活性,且抑菌效果优于对照组的磺胺嘧啶。筛选出的先导化合物具有全新的化学结构,可以作为候选抗菌药物,经进一步结构改造,有望用于解决日益严重的细菌耐药性问题。     

基于实时荧光定量PCR技术检测桑丁香假单胞菌

由桑丁香假单胞菌(Pseudomonas syringae pv.mori,以下简称Psm)引起的桑疫病是一种毁灭性的桑树细菌性病害,建立对病原菌的早期检测技术,有利于及时制定病害的防控技术措施。依据致病性相关基因hrp Z的片段设计的一对引物能够在Psm中特异性地扩增出195 bp大小的条带,而用于对其他致病变种的丁香假单胞菌和其他种属病原菌的扩增则没有此条带。利用Psm14-7菌株基因组DNA为模板进行实时荧光定量PCR(q PCR)扩增,模板DNA质量浓度在6×10~(-5)~6 ng/μL范围内与扩增所得Ct值呈现良好的线性关系,线性方程为y=-3.224 69x+14.034 45(R~2=0.997 09),检测的最低限为(60±0.001 2)fg/μL;以Psm14-7菌液为模板进行q PCR,菌液浓度在1×10~2~1×10~8CFU/m L范围内与Ct值呈现良好的线性关系,线性方程为y=-4.562 15x+46.911 67(R~2=0.988 72),最低检测限为(10~2±0.008 3)CFU/m L。于桑树植株人工接种Psm后不同时间,对出现各种症状植株中的菌群数量进行q PCR检测,结果显示:接种后的第4~8天可能为病原菌诱导桑树的过敏性反应和系统获得性抗性关键时期,影响到了Psm的增殖速度;能引起健康桑树暴发桑疫病的致病菌最低浓度为(1.5×10~8±0.076 8)CFU/g。建立的q PCR检测方法,对由Psm引起的桑疫病的田间早期诊断和及时防控具有一定指导意义。     

甘草内生真菌分离及其抑菌活性初探

为了解药用植物甘草(Glycyrrhiza uralensis)内生真菌资源多样性及其抑菌活性特征,通过组织块法对内生真菌进行分离,并选择小麦全蚀病菌（Gaeumannomyces graminis var.tritici）、枸杞黑果病菌（Colletotrichum gloeosporioides）、番茄灰霉病菌（Botrytis cinerea）、黄瓜枯萎病菌（Fusarium oxysporium f.sp.cucumeris）、黄瓜立枯病菌（Rhizoctonia solani）5种植物病原真菌和枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、大肠杆菌（Escherichia coli）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）4种细菌作为供试指示菌,采用对峙法和改进的菌块法测定抑菌活性。试验结果显示,从甘草根、茎、叶中分离出20株内生真菌,其中根部最多,占分离菌株总数的65.0%,其次为茎部,叶部最少;经形态学初步分类鉴定归于2目2科5属,梭孢霉属为优势菌属,占分离菌株总数的70.0%;在分离的内生真菌中有15株菌对1种或1种以上供试植物病原真菌有不同程度的抑制作用,为分离内生真菌总数的75.0%,19株菌对1种或1种以上供试细菌有不同程度的抑制作用,为分离内生真菌总数的95.0%;有7株内生真菌对枯草芽孢杆菌拮抗活性差异显著（P＜0.05）,有 8株内生真菌对金黄色葡萄球菌拮抗活性差异显著,有3株内生真菌对大肠杆菌拮抗活性差异显著,有1株内生真菌对革兰氏阴性铜绿假单胞菌拮抗活性差异显著,其中菌株RLEFR015对番茄灰霉病菌、金黄色葡萄球菌拮抗活性差异显著,菌株RLEFR010对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌拮抗活性差异显著,菌株RLEFR002对枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌供试细菌拮抗活性差异显著;菌株RLEFR015、RLEFR002、RLEFR010均为梭孢霉属,为高活性菌株。甘草内生真菌具有多样性和抑菌活性,多数菌株对供试病原真菌和病原细菌具有拮抗活性,对革兰氏阳性金黄色葡萄球菌和革兰氏阳性枯草芽孢杆菌拮抗活性较强,预示着甘草内生真菌具有重要的资源价值。     

黄藤素对铜绿假单胞菌QS毒力因子的影响

为了研究黄藤素对铜绿假单胞菌群体感应系统中毒力因子表达的影响,试验使用亚抑菌浓度的黄藤素(6.25×10~(-2)g/m L、3.13×10~(-2)g/m L)作用于铜绿假单胞菌,并测定亚抑菌浓度的黄藤素对铜绿假单胞菌生长曲线、外毒素A、绿脓菌素、弹性蛋白酶、蛋白水解酶的影响。结果表明:在亚抑菌浓度条件下,黄藤素对铜绿假单胞菌的生长均无明显影响,但能明显下调铜绿假单胞菌群体感应系统中外毒素A、绿脓菌素、弹性蛋白酶、蛋白水解酶的表达。说明黄藤素能够通过影响铜绿假单胞菌群体感应系统中毒力因子的表达来影响铜绿假单胞菌生物膜的形成,发挥抗病抑菌的作用。