某规模化牧场致犊牛腹泻的大肠杆菌分离鉴定及耐药性检测

[目的]为确定引起石河子某规模化牧场犊牛腹泻的主要病原菌及其耐药情况,并针对犊牛腹泻提出合理应对措施,为该牧场防治犊牛腹泻提供参考。[方法]本研究采取现场流行病学检查,无菌采集15份犊牛腹泻病料,对其进行病原菌分离纯化;通过生化试验以及分子生物学鉴定,确定致犊牛腹泻的病原菌;对病原菌进行药敏试验,确定耐药情况。[结果]经生化试验以及分子生物学鉴定发现,15份犊牛腹泻病料中,有12份分离到了大肠杆菌。药敏试验结果显示,13株大肠杆菌对链霉素耐药率最高为46.15%(6/13),对青霉素、氨苄西林耐药率为38.46%(5/13),且敏感菌株多为中低敏;对四环素敏感性为76.92%(10/13),13株菌株对头孢噻肟和万古霉素敏感性最高,为84.62%(11/13),多数菌株为多重耐药菌株。[结论]本研究针对腹泻犊牛进行病原菌分离鉴定、药敏试验,为该牧场犊牛腹泻诊治提供参考。     

我国部分地区奶牛乳房炎无乳链球菌的分离及耐药性研究

本研究对黑龙江、上海、河北、山东、内蒙古的部分牧场共计497份乳房炎患牛的乳样进行无乳链球菌分离鉴定及药物敏感性分析,结果显示,共分离出无乳链球菌18株,内蒙古分离菌株对11种抗菌药物耐药,黑龙江省分离菌株对7种抗菌药物耐药。本结果可为上述地区的牧场在抗生素临床合理使用方面提供参考。     

奶牛牧场养殖环境中产ESBL耐药菌的流行特征

本研究旨在探索奶牛养殖环境中产超广谱β-内酰胺酶（extended-spectrum beta-lactamases，ESBL）耐药菌的流行特征。2020-2021年，采集6个内蒙古和宁夏牧场共160份牛奶、乳区皮肤拭子和环境来源的多种类型样本，分别进行了β-内酰胺酶检测、产ESBL耐药菌的分离鉴定、药敏试验以及菌株的全基因组测序。结果显示：24份奶样的检测结果显示，各牧场β-内酰胺酶阳性率为75%~100%。其中，5个牧场的153份样本共分离出6种产ESBL耐药菌，这些产ESBL耐药菌对阿莫西林（100%）、头孢噻肟（91.0%）和头孢他啶（78.2%）均具有较高耐药率；全基因组显示，14株产ESBL大肠杆菌携带多种耐药基因，以bla_CTX-M（100%）携带率最高。通过对内酰胺酶阳性奶样进行分析，发现造成牧场奶样β-内酰胺酶阳性的主要菌株是产ESBL鲍曼不动杆菌，并且该耐药菌携带有bla_CTX-M、bla_TEM、bla_OXA型β-内酰胺类耐药基因。本研究明确了内蒙古和宁夏牧场养殖环境中产ESBL耐药菌的流行特征，并对造成内蒙古1个牧场牛奶内酰胺酶阳性原因进行了追溯研究。     

狐狸源大肠埃希菌TEM1型耐药基因检测和耐药质粒消除研究

研究大肠埃希菌耐药性和耐药基因和十二烷基硫酸钠(SDS)对大肠埃希菌耐药质粒消除作用。以大肠埃希菌临床分离株为试验菌株,采用K-B药敏纸片法对6种抗菌药物进行药物敏感性检测,并对大肠埃希菌耐药质粒TEM1型耐药基因进行PCR检测,采用SDS消除大肠埃希菌临床分离菌株的耐药质粒,采用琼脂糖凝胶电泳检测质粒条带,药敏试验检测大肠埃希菌耐药质粒消除前后的药物敏感性。结果表明,大肠埃希菌对庆大霉素敏感,对大观霉素中敏,对氨苄西林、阿莫西林、头孢拉定、环丙沙星耐药;大肠埃希菌耐药质粒检测出TEM1型耐药基因;试验菌株经7.5g/L的SDS处理至第3代时,质粒条带有明显的减少,TEM1型耐药基因消失,并且恢复了对β内酰胺类抗生素的敏感性,说明耐药质粒已经成功消除。     

复方紫花地丁对鸭大肠杆菌MIC逆转效果的影响

以恩诺沙星人工诱导鸭大肠杆菌耐药菌株,原始菌株和诱导株经不同浓度的复方紫花地丁溶液处理,检测其MIC及菌体药物蓄积浓度.结果表明,经复方紫花地丁溶液处理的菌株,MIC显著降低,且与紫花地丁溶液呈浓度依赖关系.研究结果提示,一定浓度的紫花地丁溶液可以逆转鸭大肠杆菌的耐药性.     

大环内酯类药物对木糖葡萄球菌敏感菌株及其耐药菌株生物被膜形成的影响

为了探究大环内酯类药物泰乐菌素和阿奇霉素对木糖葡萄球菌敏感菌株及其耐药菌株生物被膜形成的影响,试验首先通过倍比稀释法测定两种药物对木糖葡萄球菌敏感菌株及其耐药菌株的最小抑菌浓度(MIC),然后利用结晶紫染色法考察木糖葡萄球菌敏感菌株及其耐药菌株生物被膜的形成能力,并测定细菌生长情况,最后考察两种药物浓度及药物孵育时间对生物被膜形成的影响。结果表明：木糖葡萄球菌耐药菌株生物被膜的形成能力弱于敏感菌株,木糖葡萄球菌敏感菌株与其耐药菌株的生长存在差异。0.312 5μg/mL的泰乐菌素和阿奇霉素对木糖葡萄球菌敏感菌株生物被膜的形成具有极显著抑制作用(P<0.01),对耐药菌株生物被膜形成的抑制作用不显著(P>0.05);25μg/mL的泰乐菌素和阿奇霉素对耐药菌株生物被膜的形成具有显著或极显著抑制作用(P<0.05或P<0.01)。随着药物孵育时间的延长,对生物被膜形成的抑制效果逐渐增强。说明大环内酯类药物泰乐菌素和阿奇霉素在一定程度上能抑制木糖葡萄球菌敏感菌株及其耐药菌株生物被膜的形成且具有时间依赖性。     

我国部分地区鸡源大肠杆菌耐药性分析

目前各地牧场和养殖户普遍使用抗菌药物预防或治疗各种疾病,有些兽药厂家还为养殖户制定了用药程序,导致抗菌药物的使用频率和使用量大大增加.大肠杆菌是革兰氏阴性菌中最易产生耐药性的细菌,因此大肠杆菌的耐药菌株和耐药能力不断增加.本文根据2007～2008年发表的有关鸡源大肠杆菌的药敏试验的结果,分析了我国鸡群中大肠杆菌耐药现状.     

鸡致病性大肠杆菌生物学特性的相关性研究

对来源于河南省新郑地区的14株鸡致病性大肠杆菌进行了致病性试验、血清型鉴定、耐药性试验和质粒图谱检测,并对其相互关系进行了分析研究,结果表明:菌株的血清型与其致病性、耐药性、质粒图谱均无一定的相关性;菌株的致病性与其耐药性、质粒图谱有一定的关系,耐药种类越多的菌株其致病性越强,质粒图谱中含有相对分子量较大的质粒条带的菌株其致病性较强;并且耐药图谱的复杂性与其质粒图谱中的条带数无一定的相关性.     

我国大肠杆菌的耐药现状及药物控制

目前各地牧场和养殖户普遍使用抗菌药物预防或治疗各种疾病,有些兽药厂家还为养殖户制定了用药程序,导致抗菌药物的使用频率和使用量大大增加。大肠杆菌是革兰氏阴性菌中最易产生耐药性的细菌,因此大肠杆菌的耐药菌株和耐药能力不断增加。本文根据2007-2008年发表的有关鸡、猪源大肠杆菌药敏试验的结果,分析了我国鸡、猪群中大肠杆菌的耐药现状。     

复方紫花地丁对鸭大肠杆菌耐药性消除效果研究

以恩诺沙星人工诱导鸭大肠杆菌耐药菌株,原始菌株和诱导株经不同浓度的复方紫花地丁溶液处理,测定其耐药性消除率及菌体药物蓄积浓度。结果表明,经复方紫花地丁溶液处理的菌株消除率高于化学对照组,菌体內药物蓄积高于未处理组,且与紫花地丁溶液呈浓度依赖关系。提示一定浓度的紫花地丁溶液可以逆转鸭大肠杆菌的耐药性。     

动物源沙门菌耐药性调查及Ⅰ类整合子的检测

采用肉汤微量稀释法,选用22种常用抗菌药物,对98株动物源沙门菌进行药敏试验,结果显示:菌株对磺胺类、四环素类药物及萘啶酸普遍耐药,对氨基糖苷类药物耐药率较低,对氟喹诺酮类药物高度敏感;菌株多重耐药率为67.35%(66/98).采用PCR方法检测菌株Ⅰ类整合子的流行情况,并分析其携带的耐药基因盒.结果98株沙门菌中Ⅰ类整合子的检出率为50.0%(49/98),并且均携带耐药基因盒,基因盒以dfrA17-aadA5的组合形式最为常见;Ⅰ类整合子阳性菌株的多重耐药率为95.92%(47/49),阴性菌株的多重耐药率为38.78%(19/49).上述结果表明Ⅰ类整合子普遍存在于兽医临床耐药沙门菌中,其流行与菌株多重耐药性具有一定的相关性.     

蒲公英水煎液对犊牛源多重耐药大肠杆菌耐药性的消除作用

为了了解内蒙古地区腹泻犊牛中大肠杆菌的污染状况、耐药情况及蒲公英水煎液对多重耐药大肠杆菌耐药性的消除作用。本试验采用革兰染色、生化试验和PCR方法对采集到的107份犊牛源病料进行大肠杆菌的分离和鉴定,采用K-B法检测分离菌株对18种抗菌药物的敏感性,采用PCR方法进行8种耐药基因的检测,采用琼脂稀释法测定蒲公英水煎液对分离菌株的最小抑菌浓度(MIC),通过将菌株与蒲公英水煎液作用后进行耐药消除试验。结果显示,从107份病料中分离鉴定出44株犊牛源大肠杆菌,分离率为41%;大肠杆菌分离株对氨苄西林、头孢噻吩、头孢噻肟、环丙沙星和左氧氟沙星5种抗菌药物的耐药率均达到50%以上;β-内酰胺类耐药基因中bla_CTX-M基因携带率为86%,喹诺酮类耐药基因中qnr(S)基因携带率为32%;蒲公英水煎液对筛选出的耐药菌株的MIC为200 mg/mL;经蒲公英水煎液处理后的大肠杆菌对抗菌药物的敏感性增强,而且更不容易出现耐药。结果表明,内蒙古地区腹泻犊牛中大肠杆菌的耐药情况严重,而蒲公英水煎液对大肠杆菌的多重耐药有一定的消除作用,可降低临床应用抗菌药物的耐药性,增加临床疗效,本...     

“脱腐生肌散”对9种病菌的体外抑菌试验

用“脱腐生肌散”的散剂和配成20%(W/V)浓度后经4℃浸泡、100℃煮沸、121℃高压蒸气等不同处理的上清液及混合液,测定了9种病菌的敏感性。结果:多数菌株对散剂和混合液表现是中敏以上,且有随处理温度升高而敏感性降低的趋势,但对处理后的上清液均耐药或低敏。个别对雷佛奴耳和消炎粉耐药的菌株对“脱腐生肌散”仍敏感。初步表明“脱腐生肌散”具有一定的抑菌作用,对供试菌株未表现出明显的种间差异,为该方药在临床上治疗各种创伤所具有的抗感染作用提供了一定的理论依据。     

高分辨率熔解曲线快速检测结核分枝杆菌对链霉素耐药情况的研究

探讨高分辨率熔解曲线（HRM）技术检测结核分枝杆菌对链霉素耐药性的可行性。用传统药物敏感性试验进行结核分枝杆菌链霉素耐药性检测;以Rpsl和rrs的耐药决定区为靶点设计引物进行HRM分析,判断菌株是否对链霉素耐药;以药敏结果为标准,应用SPSS17.0分析两种检测结果之间的符合率;Kappa检验分析两种结果的一致性。药敏结果显示,84株菌株中有20株对链霉素耐药,64株为敏感株;HRM检测结果显示,24株菌株对链霉素耐药,60株为敏感株;以药敏结果为参照,HRM检测结核分枝杆菌对链霉素耐药性的敏感性为75%,特异性为85.9%,经Kappa检验显示,两种方法检测结果具有中度一致性。本研究结果表明HRM可快速检测结核分枝杆菌对链霉素的耐药性,具有较好的灵敏度,在耐药结核病的早期辅助诊断方面具有一定的应用价值。     

河南省鸡源致病性大肠杆菌耐药性的监测分析

对来源于河南省32个县市的93株鸡源致病性大肠杆菌进行了16种抗生素药物的药敏试验和菌株耐药性与质粒图谱间关系的分析研究。结果表明:93株鸡源致病性大肠杆菌均为多重耐药菌株,耐药种类3～14种,耐药图谱复杂,可以分为58种耐药类型,相同来源的大肠杆菌耐药图谱、质粒图谱相似,但菌株耐药种类与质粒图谱条带的多少无一定的相关性。     

石龟沙门氏杆菌病原分离鉴定及耐药分析

从石龟组织分离病原菌S1株为鼠副伤寒沙门氏杆菌(S.typhimurium)。该菌株对9类药物的23种药品产生耐药,属于典型的多重耐药(MDR)菌株,应加强药物管理,规范用药,推广联合用药,强化生物安全,推进生态养殖建设,研发兽药代替品,减少兽药用量,降低菌株获得性耐药几率。     

过程控制工程在牧场中的应用

现代化牧场是指超过一定数量规模,采用大量机械化设备,集中治疗、挤奶、饲喂、繁殖、污粪集中无害化处理的牧场.传统的管理方式给牧场生产带来诸多困扰,使牧场的经济效益不能保持在一个稳定的水平.本文引入全局化思维,将化学工程中的过程控制技术应用于牛只乳房炎监控、繁殖监控、搅拌车故障监控和生乳菌落总数监控领域,以提升牧场管理水平...     

致犊牛肺炎A型多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及同源性分析

本研究旨在对江苏某牧场引发犊牛呼吸道综合征的多杀性巴氏杆菌进行分离鉴定，并分析其遗传进化关系及耐药情况。首先对引起犊牛呼吸道症状致犊牛死亡案例进行剖检，发现肺脏肿大，肺门淋巴结肿胀、出血，肺部形成多处结节，然后取肺门淋巴结进行细菌分离培养与鉴定，并进行16S rRNA扩增、测序分析、血清型鉴定和耐药性分析。质谱鉴定和测序分析结果显示，该菌株与A型多杀性巴氏杆菌属于同一亚群，其序列与已经发布的CQ2、CQ7菌株同源性较近。药敏结果显示，该菌株对林可霉素耐药，对其余13种常用抗生素具有高度敏感性。以上结果表明，引发该牧场犊牛肺炎的病原为A型多杀性巴氏杆菌，且与国内报道的A型多杀性巴氏杆菌同源性较高，提示A型多杀性巴氏杆菌在国内牧场具有较广泛的流行性。本研究为犊牛呼吸道综合征的病原学调查和多杀性巴氏杆菌流行病学提供数据参考。     

大肠杆菌耐药性及氟苯尼考耐药基因floR的研究

本实验对某地养殖场猪源和鸡源大肠杆菌的耐药性及氟苯尼考耐药基因flo R进行分析,旨在了解我国大肠杆菌的耐药现状,以降低对养殖业的危害,减少菌株耐药性的传播,为兽医临床用药及兽药管理提供科学依据,为新型抗菌药物的研制奠定理论基础。采用国标法分离鉴定大肠杆菌,肉汤微量稀释法进行药敏实验,PCR法检测氟苯尼考flo R基因,膜过滤法进行转化接合实验。结果表明:共分离大肠杆菌293株,分离率为73.3%,其中猪源157株,鸡源136株;大肠杆菌对磺胺类、四环素类和氨基糖苷类药物的耐药性相对严重,对氯霉素类、氟喹诺酮类和β-内酰胺类药物相对敏感;与欧盟EUCAST标准相比,该地区大肠杆菌的MIC分布出现明显右移现象;80%以上的大肠杆菌均为多重耐药菌株,以8重和9重耐药菌株为主;氟苯尼考耐药基因flo R携带率为61.2%,flo R基因可以在菌株间相互转移。样品采集地区养殖场大肠杆菌污染严重,耐药种类逐渐增多,多重耐药现象严重,质粒介导的耐药基因可以在菌株间相互转移。     

动物源性大肠杆菌药物敏感性检测及耐药性分析

用2000～2003年自兽医临床分离的393株大肠杆菌,对9种常用抗生素的敏感性进行了检测.依据菌株采集时间、菌株来源对菌株耐药性的变化及耐药性产生之间的相关性进行了较全面的统计分析,并随机选出39株典型的多重耐药菌株观察了对小鼠的致病性.结果显示,393株分离菌对四环素、庆大霉素、氯霉素、氨苄青霉素、利福平、卡那霉素、呋喃妥因、链霉素和环丙沙星的耐药率分别为93.89%, 57.76%,78.63%, 77.86%,92.11%, 47.33%,46.82%, 76.84%,74.81%;按照耐药种类可将分离菌株分为8类,最多耐药9种,最少耐药2种,约80%以上的菌株耐受7种所试药物.猪源大肠杆菌对庆大霉素、氨苄青霉素、卡那霉素的耐药率高,而鸡源大肠杆菌对四环素、氯霉素、链霉素和环丙沙星的耐药率显著高于猪源大肠杆菌.2000年和2003年分离菌株的耐药率相比,氯霉素从67.33%上升到90.58%,氨苄青霉素从71.29%上升到84.81%,链霉素从73.76%上升到80.10%,环丙沙星从61.88%上升到88.48%,庆大霉素却从61.39%下降到53.92%.95%的菌株(37/39)可直接在72 h内致死感染小鼠(2.0×107CFU·鼠-1).5%不能直接致死小鼠的菌株经小鼠体内2～3次传代,可直接致死感染小鼠.试验表明,兽医临床分离菌株普遍存在多重耐药性,并随分离时间、寄主种类等耐药率出现动态变化,耐药类型间具有一定的相关性.耐药菌株对小鼠仍具有很强的致病性,少数菌株致病性出现暂时减弱,但在体内几次传代即可恢复.