北京鸭胸腺和法氏囊中淋巴细胞蛋白成分的初步比较

北京鸭屠宰后，取其胸腺，法氏囊，经淋巴细胞分层液分离后层液分离后，再经尼龙棉柱得到胸腺细胞（T－C）和法氏囊细胞（B－C），其中一部分用以提取细胞膜蛋白，并用SDS－PAGE电泳进行鉴定分析。用完整细胞和提取的膜蛋白分别作为包被抗原，免抗鸭胸腺淋巴细胞多克隆抗体（RADTS）和兔抗鸭免疫球蛋白（Ig）轻链多克隆抗体（RADLCS）作为第一抗体进行间接ELISA试验，对所提膜蛋白成分加以区分，比较。结果表明，北京鸭T－C、B－C膜上存在多种共同的膜蛋白成分，并且胸腺细胞上有类似于Ig轻链的成分，但其数量低于法氏囊细胞上的数量。     

抗BP5-KLH多克隆抗体的制备及鉴定

本研究设计将BP5与KLH偶联制备免成疫原.制定免疫程序,用此免疫原免疫家兔,收集兔抗BP5-KLH血清,并分离纯化动物血清,使之能大批量生产制备,用间接ELISA测定兔抗BP5-KLH多抗血清的抗体效价.用硫酸铵盐析法对多抗血清中的蛋白质进行粗提纯,并检测其含量,为进一步建立BP5-KLH的ELISA检测方法奠定实验基础.     

不同方法对鸡胚和法氏囊中囊病病毒抗原含量的检测比较

用单抗介导的抗原捕获－酶联免疫吸附试验（AC－ELISA），琼脂扩散试验（ACP）快速诊断试纸条（ISK）对感染同株强毒或弱毒囊病病毒（IBDV）的鸡胚和鸡法氏囊中的病毒抗原效价进行了检测比较，结果表明，上述3种方法测得法氏囊中温毒IBDV抗原效价分别为10^6.0(AC-ELISA),2^-3.0(AGP)t 10^-3.0，测得鸡胚中强毒IBDV抗原效价依次为10^-1.0,0和0。强毒株接种鸡胚后，只有第1代鸡胚组织可被AC－ELISA测到低效价的IBDV抗原，而第2代以后则未能测到病毒抗原，弱毒疫苗株IBDV感染鸡后，法氏囊中可测到低效价抗原，但感染鸡胚后则无可测性病毒抗原。     

新城疫病毒人工感染鸡诱导胸腺和法氏囊细胞凋亡的初步研究

本研究用新城疫病毒(NDV)参考强毒株F48E8感染鸡,通过光镜和电镜观察鸡的胸腺和法氏囊淋巴绌胞凋亡的形态学特征,并进行统计学分析。NDV感染鸡后,其胸腺和法氏囊淋巴细胞凋亡数量显著增加(P＜0．01)。实验结果说明NDV参考强毒株F48E8人工感染鸡后可以诱导胸腺和法氏囊淋巴绌胞凋亡。     

磺胺类药物多克隆抗体的制备与ELISA检测方法的初步研究

模拟磺胺母核结构合成了3种人工免疫原,免疫新西兰白兔,用间接竞争ELISA方法监测免疫效果。选择抑制效果较好的2组多抗血清建立磺胺类药的ELISA检测方法,绘制竞争标准曲线,并进行添加回收试验。结果表明：A组多克隆抗体对6种常用磺胺药SMD、SMM、SMZ、SDM、SDM、SD的IC10分别为0．010、0．046、0．010、0．100、0．067、0．019μg／mL,低于最高残留限量（0．10μg／mL）;C组多克隆抗体对SMD、SMM、SMZ、SDM、SQ、SD、磺胺氯哒嗪、磺胺氯吡嗪的IC10分别为0．0091、0．051、0．058、0．088、0．020、0．010、0．014、0．011μg／mL,亦低于最高残留限量。2组多克隆抗体对磺胺药的回收率为54．5％～111．8％和54．2％～130．3％,变异系数为3．6％～10．9％和3．7％～5．9％。     

樱桃谷北京鸭短喙和侏儒综合征的初步研究

2014年1月至今,我国部分地区所饲养的樱桃谷北京鸭商品肉鸭发生了一种疾病。为诊断该病,从1个38日龄感染鸭群选典型病例和外观正常者各9只,对其体重、喙和舌头进行了测量和分析,随后进行了分子检测和人工感染试验。结果显示,典型病例的体重(1.40±0.51 kg)和喙长(4.00±0.26 cm)与外观正常者(2.87±0.51 kg和5.74±0.58 cm)存在显著差异,提示该病具有半番鸭短喙和侏儒综合征(Short beak and dwarfism syndrome,SBDS)的特征,即喙短、舌头伸出、生长发育严重受阻。用水禽细小病毒的PCR进行检测的结果显示,从37日龄病例采集的36份组织样品均为小鹅瘟病毒(Goose parvovirus,GPV)阳性。用VP1和VP3序列进行进化分析的结果均显示,樱桃谷北京鸭源毒株与导致半番鸭SBDS的毒株聚为一个分支,二者属GPV的同一类变异株。用GPV阳性样品感染2日龄北京鸭,可复制出与自然病例相似的短喙症状。结果表明,GPV变异株与樱桃谷北京鸭SBDS相关。     

产气荚膜梭菌α毒素双抗体夹心ELISA检测方法的建立及初步应用

为了对产气荚膜梭菌α毒素进行快速、有效的检测,本研究以单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb)为基础,建立了双抗体夹心ELISA(double antibody sandwich ELISA,DAS-ELISA)方法。纯化原核表达的α毒素蛋白为免疫原,制备腹水型mAb并分离纯化作为检测抗体,免疫新西兰大白兔制备抗α毒素多克隆抗体纯化后作为捕获抗体,通过试验优化反应条件,建立标准曲线;并对建立的DAS-ELISA方法进行性能评价及初步应用。DAS-ELISA方法对α毒素的有效检测范围为5.86³75μg/L,最低检测线为4.57μg/L,比多抗-多抗双夹心ELISA具有更高的特异性和敏感性。初步应用结果显示,相同培养条件下,A375μg/L,最低检测线为4.57μg/L,比多抗-多抗双夹心ELISA具有更高的特异性和敏感性。初步应用结果显示,相同培养条件下,A^E型产气荚膜梭菌标准菌株的培养上清中,α毒素含量差异较大,A型菌(NCTC528)中α毒素含量显著高于其他菌型。本研究成功制备了高特异性的mAb,并建立了特异、灵敏、稳定的DAS-ELISA方法,为高效检测α毒素提供了有效工具。     

马立克氏病毒被膜蛋白VP16(UL48)的表达及多克隆抗体的制备

UL48蛋白是MDV血清Ⅰ型(MDV-Ⅰ)复制所必需,其与MDV编码的另外一种具有去泛素化酶活性的被膜蛋白UL36以及其他被膜蛋白相互作用,为探究MDV编码的UL48与UL36互作在马立克氏病(MD)肿瘤发生机制中作用,本试验制备了致病型强毒MDV-Ⅰ编码的UL48的抗体。从MDV-Ⅰ基因组中克隆了UL48基因,并将测序正确的UL48基因分别亚克隆到pTYB1和pGEX-4T3原核表达载体,构建成pTYB1-UL48和pGEX4T3-UL48重组质粒。将两重组质粒分别转化到BL21(DE3)E.coli中,分别进行IPTG诱导表达,其中pTYB1-UL48表达的融合蛋白Intein-UL48应用Chitin-Sepharose进行亲和层析纯化,将纯化后的融合蛋白Intein-UL48作为免疫大白兔制备多克隆抗体,其中Intein标签有利于提高UL48蛋白的可溶性并提高抗体效价,pGEX4T3-UL48表达纯化的融合蛋白GST-UL48应用凝血酶进行切割得到UL48蛋白,以此为包被抗原,用于间接ELISA和Western blot抗体效价检测和特异性鉴定。结果显示该抗体效价为1:512 000,成功制备特异性的UL48抗体。     

酶联免疫法鉴别乳制品掺假的研究进展

本文主要介绍了利用多克隆抗体和单克隆抗体,通过不同的酶联免疫方法(ELISA)对乳制品掺假进行鉴别的研究进展,并从多个方面进行了总结,探讨了今后的研究方向和发展趋势。     

1日龄雏鸡接种超抗原SEB和MDV后脾与胸腺淋巴细胞IFN-γ的体外诱生

为研究超抗原(SAg)在禽类诱导的免疫机理和进一步揭示MDV(马立克氏病病毒)感染的免疫学规律,采用NO-释放法,设计用雏鸡骨髓巨噬细胞为靶细胞检测1日龄雏鸡接种超抗原SEB和MDV后脾与胸腺淋巴细胞IFN-γ体外诱生的动态变化.结果发现,超抗原SEB(SAG-SEB)可提高脾与胸腺淋巴细胞IFN-γ体外诱生水平,其中,高剂量(1 ng/只)引起短时加强后下降,而低剂量(0.01 ng)则出现缓升缓降现象;而MDV接种则抑制脾与胸腺淋巴细胞IFN-γ体外诱生; SAg-SEB能增强雏鸡细胞免疫,主要表现于接种初期(1-10 d PI),而MDV却在接种后1-25 d间降低细胞免疫;说明超抗原SEB和MDV虽然均可引起鸡T细胞增殖,但对鸡免疫细胞IFN-γ的体外诱生作用不同.     

北京鸭苏氨酸营养研究进展

苏氨酸是家禽第三限制性氨基酸,对北京鸭生长发育、肠道健康、免疫机能、脂肪代谢等方面都有重要的调节作用。北京鸭是中国自主培育的肉鸭品种,具有生长发育快、育肥性能好等特点,是闻名中外的“北京烤鸭”的制作原料。作者总结了近几年国内外苏氨酸调节北京鸭营养及生理功能的研究成果,包括苏氨酸对不同日龄、不同品系北京鸭生长性能的影响,以及苏氨酸对北京鸭屠宰性能、免疫功能、肠道健康以及脂肪代谢的影响及其代谢机制等方面,汇总了近几年关于苏氨酸需要量的研究成果,利用二次曲线断线模型和直线-断线模型,以日增重、平均日采食量、胸肌率、料重比等为指标重新评估了1～14/21日龄北京鸭的苏氨酸需要量,推荐满足1～21日龄北京鸭最大日增重和产肉的苏氨酸需要量为0.60%～0.67%。然而生长后期北京鸭的苏氨酸需要量研究较少,还需要进一步研究。此外,还需要进一步研究苏氨酸调节北京鸭脂肪代谢、肠道健康和免疫功能的分子机制。     

鸭腔上囊胚胎及胚后发育期凋亡相关蛋白的免疫组化分析

研究天府肉鸭腔上囊胚胎及胚后发育期Bcl-2、Bax、Fas、FasL蛋白的表达。将20只天府肉鸭分为4组,即24天胚龄(E24),胚后3、8、29周龄(P3、P8、P29),采用免疫组化技术。结果显示,Bcl-2、Bax、Fas、FasL在各组滤泡淋巴细胞中均有表达,FasL还表达于滤泡间上皮。滤泡皮质和髓质淋巴细胞Bcl-2阳性率呈递减的变化趋势(髓质P3～8除外);皮质和髓质淋巴细胞Bax阳性率在E24～P8恒定,P29上升;皮质和髓质淋巴细胞Bcl-2/Bax值呈下降趋势,但皮质在P3～8恒定,髓质在P3～8上升;滤泡皮质和髓质淋巴细胞Fas阳性率在E24～P3上升,P3～8下降,P8～29上升;皮质和髓质淋巴细胞FasL阳性率变化规律与Fas相似,但皮质在P3～8恒定。滤泡皮质淋巴细胞Bcl-2阳性率及Bcl-2/Bax值在E24～P8明显高于髓质,在P29则显著低于髓质;皮质淋巴细胞Bax阳性率在E24～P8与髓质无显著差异,在P29则明显高于髓质;皮质淋巴细胞Fas和FasL阳性率在E24～P8明显低于髓质,在P29则显著高于髓质。结果提示,Bcl-2、Bax、Fas、FasL是鸭腔上囊胚胎及胚...     

北京烤鸭中多环芳烃分析测定方法探索

"北京烤鸭"是我国的一种传统肉制品,在国内外久负盛名,其主要的烤制方法主要是传统的挂炉和焖炉烤。由于烤鸭鸭坯富含蛋白质和脂肪,明火或焖火烤制时,温度都在200℃以上,鸭坯中的脂肪和水溶性的物质如肌酸、游离氨基酸和糖类等会不可避免的滴落到火上或炙     

The Vascularization of the Bursa cloacalis (of Fabricius) in the Duck

The morphological and structural features of the vascular component of the bursa of Fabricius in the duck are described. By means of an intravasal perfusion of suitably colored neoprene Latex or Microscopaque, or a perfusion of Indian ink, it was possible to follow visually the routes of arteries, veins and the microcirculation; this last represents a major characteristic of the bursal follicle in the duck. The microcirculation has its origins in several roots arising from the follicular arterioles, which in the region of the cortex constitute an open vascular layer. From these pre-capillary arterioles, adjacent to the limiting layer between cortex and medulla, a dense capillary network is formed. With the aid of an electron microscope the presence of a cortico-medullary barrier of an epithelio-reticular nature was revealed; close to it there are the terminal branches of the intrafollicular network. The barrier appears to be structurally more compact than that of the cortical capillaries of the mammalian thymus.     

热应激肉仔鸡胸腺、法氏囊超微组织学观察和细胞凋亡检测

对试验性热应激肉仔鸡的胸腺、法氏囊的超微组织学结构进行了观察，并进行了细胞凋亡的检测。结果表明，通过电子显微镜观察，热应激前3d胸腺和法氏囊部分淋巴细胞凋亡，热应激5d后胸腺和法氏囊的淋巴细胞以坏死性变化为主。通过Tunel法检测，发现在热应激前3d，胸腺和法氏囊的细胞凋亡呈现逐渐下降的趋势。     

肉鸽法氏囊、脾脏和胸腺的形态学、组织学观察

[目的]为今后研究肉鸽免疫功能提供其免疫器官的形态学、组织学观察依据。[方法]选取40日龄的肉鸽,摘除法氏囊、脾脏和胸腺进行形态学观察;通过制作常规石蜡切片,苏木精—伊红染色,显微照相进行组织学观察。[结果]40日龄肉鸽法氏囊黏膜上皮完整,黏膜固有层腔上囊小结数量减少,体积变小,中间出现空泡,淋巴细胞减少;法氏囊小结中皮质和髓质界限不明显,小结周围有大量的结缔组织增生,导致法氏囊免疫功能降低。脾脏各组织结构发育趋于完善,细胞排列紧密。胸腺髓质中淋巴细胞较少,可见胸腺小体;皮质中淋巴细胞较多。[结论]40日龄的肉鸽法氏囊开始萎缩,免疫功能降低,而脾脏和胸腺免疫功能正常。     

胚胎及胚后发育期鸭腔上囊淋巴细胞增殖与凋亡的研究

采用PCNA免疫组化法和TUNEL染色法,并结合光、电镜技术研究天府肉鸭胚胎及胚后发育期腔上囊淋巴细胞增殖与凋亡的动态变化规律。结果显示胚胎期腔上囊淋巴细胞增殖明显,其滤泡淋巴细胞增殖指数（PIF）随胚龄增加而逐渐增高,26d胚龄达峰值。胚后期各组滤泡皮质淋巴细胞增殖指数（PIC）和髓质淋巴细胞增殖指数（PIM）均呈下降趋势;各组PIM均明显高于PIC。胚胎期腔上囊滤泡淋巴细胞凋亡指数（AIF）随胚龄增大而逐渐增高。胚后期O～3周龄滤泡髓质淋巴细胞凋亡指数（AIM）继续增高,滤泡皮质淋巴细胞凋亡指数（AIC）则无明显变化;AIC和AIM在5周龄下降,17周龄明显升高,29周龄达峰值。胚后0～14周龄,各组AIM均明显高、于AIC,而17～29周龄AIM则明显低于AIC。凋亡淋巴细胞核呈现多种形态,线粒体肿胀,嵴断裂。结果提示淋巴细胞增殖与凋亡在鸭腔上囊胚胎及胚后发育的整个过程中普遍存在,具有明显增龄变化特性,二者协同参与腔上囊发育和退化过程。     

Screening and Identification of Outer Membrane Proteins of Riemerella anatipestifer Recruited Duck C4b-binding Protein

The purpose of this experiment was to screen and identify the outer membrane proteins of Riemerella anatipestifer (R. anatipestifer) interacting with duck C4b-binding protein (C4BP). The preserved R. anatipestifer was resuscitated, then the outer membrane proteins of R. anatipestifer were extracted and His pull-down and LC-MS/MS were conducted by using duck C4BPα as the bait protein, and the candidate outer membrane proteins that might interact with duck C4BP were screened out. The candidate proteins were cloned, prokaryotic expression was conducted and the polyclonal antibodies were prepared by immunizing the mice. Far-western blot was conducted to verify the outer membrane proteins of R. anatipestifer interacting with duck C4BP. The clone and prokaryotic expression of functional domains of candidate proteins and C4BPα were conducted, and Far-western blot was used to identify the interaction sites between candidate proteins and C4BP. The deposition of complement C3b, C4b and C4BP on the surface of R. anatipestifer were detected by ELISA to verify the function of the candidate proteins. The results showed that a total of 3 outer membrane proteins of R.anatipestifer interacting with duck C4BP were screened out by His pull-down and LC-MS/MS, namely ECE-1, SODs and Omp62. The polyclonal antibodies of 3 outer membrane proteins were successfully prepared, the titers of 3 polyclonal antibodies were more than 1∶6 400 by ELISA, and the result of Western blot showed that 3 polyclonal antibodies could specifically react with corresponding recombinant proteins. The results of Far-western blot showed that only ECE-1 could interact with C4BP, and only the full length of ECE-1 could interact with duck C4BP, and the interaction region between duck C4BP and ECE-1 was located in SCR 2 and SCR 3 of C4BPα. Anti-ECE-1 antibody could significantly increase the C3b and C4b deposition on the surface of R. anatipestifer using 3.125% normal duck serum (NDS, P<0.05), while anti-ECE-1 antibody could significantly decrease the deposition of C4BP on the surface of R. anatipestifer using 6.25% NDS (P<0.05). The study successfully screened out and identified one outer membrane protein (ECE-1) of R. anatipestifer interacting with duck C4BP, which provide a basis to further study the mechanism of R. anatipestifer immune escape.