红掌基因组DNA提取方法的优化

[目的]采用改良的SDS法提取红掌基因组DNA。[方法]以4种不同花色的红掌品种为材料,分别采用改良SDS法和CTAB法提取红掌基因组DNA,用紫外分光光度计测定英DNA在A260nm和A280nm下的吸光值,根据A260nm/A280nm的比值检测DNA的纯度和浓度。[结果]用改良SDS方法提取的DNA透明且无杂质,A260nm/A280nm比值在1．6—2．0,DNA纯度较高,可满足红掌分子生物学试验的要求;用CTAB法提取的DNA呈褐色或淡黄色,A260nm/A280nm,比值小于1．6,DNA纯度较低并且浓度低,舍有大量蛋白,此方法不适于提取红掌基因组DNA。[结论J采用改良SDS法可以提取到高质量的红掌基因组DNA,所提取的DNA的纯度和浓度可以满足红掌分子生物学研究的要求。     

利用CTAB法提取红掌不同部位基因组DNA

采用CTAB法,对红掌的叶、叶柄、肉穗花序、佛焰苞、根等5个部位进行基因组DNA提取,利用紫外分光光度法、琼脂糖凝胶电泳法和RAPD扩增法检测DNA的质量,结果表明,CTAB法适合红掌根和叶的基因组DNA提取,没有蛋白质、酚及色素等杂质的污染,佛焰苞的DNA中有少量蛋白质污染,叶柄DNA中含有较多的蛋白质、酚等杂质,而从肉穗花序中没有提取到基因组DNA。     

油菜基因组DNA的提取

采用一种新的方法从油菜（Ｂｒａｓｓｉｃａ ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ）中提取了基因组ＤＮＡ。其分子量、纯度和产率都较高，可用于限制性酶切和基因组文库的构建等。     

玉米基因组DNA的提取

玉米鲜叶不经冻干处理直接用ＣＴＡＢ法提取ＤＮＡ，其分子量和纯度均较高，可用于限制酶切、基因文库构建及基因组分析等。     

番茄基因组DNA提取探讨

以番茄幼嫩叶片为材料,通过CTAB和SDS 2种方法对番茄基因组DNA提取进行了比较研究。结果表明：2种方法均能提取完整且纯度较高的DNA,所得DNA用于PCR反应可得到清晰的扩增条带。     

CTAB法提取火龙果基因组DNA的试验研究

以火龙果嫩茎为材料,采用CTAB法对火龙果材料的基因组DNA的提取方法进行试验,经采用调整试验顺序、适当延长有机溶剂的抽提时间和增加抽提次数、提高提取DNA的得率和纯度,有效地克服了提取过程中粘液物质的干扰。结果表明,该方法可普遍适用于仙人掌科量天尺属植物的DNA提取,所得DNA纯度和得率能满足进一步研究的要求。     

六出花基因组DNA的提取

通过采用Doyle CTAB改良方法Ⅰ、Doyle CTAB改良方法Ⅱ、Doyle CTAB改良方法Ⅲ、Doyle CTAB改良方法Ⅳ、SDS(十二烷基硫酸钠)法和高盐沉淀法对六出花叶片基因组DNA进行提取,经紫外分光光度计分析及琼脂糖凝胶电泳检测对所提取DNA的浓度、纯度、产率进行比较分析,结果表明:提取DNA质量效果最好的方法是Doyle CTAB改良方法Ⅲ,得到的DNA产率为4 081.7 μg/g,其电泳条带也最为清晰;而提取DNA质量效果最差的方法是Doyle CTAB改良方法Ⅳ,其产率为723.3 μg/g.     

稻飞虱基因组DNA提取方法的比较

 以褐飞虱（Nilaparvata lugens Stal）为材料,分别采用SDS法,CTAB法,冰KAc法和饱和NaCl法提取褐飞虱的基因组DNA。通过电泳、紫外光谱分析和ISSR-PCR扩增等检测手段,比较分析了DNA数量与质量。结果表明： CTAB法和SDS法提取的DNA质量明显优于冰KAc法和饱和NaCl法,适于PCR扩增。并且SDS法提取的DNA经过PCR扩增后得到较多的多态性位点。因此,SDS法是实验室提取稻飞虱基因组有效,经济实用的方法。     

枸杞基因组DNA提取方法比较

以拘杞叶片为材料,分别采用优化后CTAB法、KI法、尿素法、高盐低pH法以及SDS法提取拘杞基因组DNA,分别进行琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度计以及PCR扩增进行检测.研究结果表明,5种方法均能从枸杞叶片中提取到基因组DNA,但不同方法在提取时间和提取得到的基因组DNA的纯度和浓度上存在明显的差异.优化后CTAB法提取...     

羌活基因组DNA提取方法

[目的]探索一种用于RAPD分析的羌活基因组DNA提取方法。[方法]分别采取CTAB法S、DS法和改良的CTAB法提取羌活基因组DNA,通过紫外分光光度法、琼脂糖凝胶电泳和RAPD分析对提取的DNA进行检测。[结果]3种方法均能有效地从羌活中获得较高产量的DNA,以改良的CTAB法所得的DNA纯度最高,此法提取的羌活基因组DNAOD260/OD280为1.8~2.0,DNA干重得率约为0.235μg/mg。[结论]改良的CTAB法更适于羌活基因组DNA的提取,可以完全满足RAPD扩增的需要。     

红掌组培苗生根移栽的技术

以红掌品种阿拉巴马为材料,研究组培苗生根培养与移栽炼苗的相关因子.结果表明:红掌组培苗最佳的生根培养基为改良Nitsch+0.5 mg·L-1NAA+0.3 mg·L-1IBA,最佳的移栽季节为5月份(15-20℃).组培苗最佳的移栽预处理条件为:培养室培养8 d,大棚培养5 d,炼苗2 d;最佳的移栽基质为:泥炭土+水草+珍珠岩(2∶1∶1).在优化条件下,组培苗的移栽成活率可高达100%.     

适于AFLP分析的柿树DNA提取方法研究

对柿基因组DNA的提取方法进行了研究,结果表明,采用提取液中含100mmol/LTris-HCl(pH8 0),20mmol/LEDTA,1 4mol/LNaCl,2%CTAB,1%PVP-40,10mmol/LNa2S2O5及100mmol/Lβ—巯基乙醇(用前加入)的改良CTAB法,可有效去除单宁、酚类、色素等,提取的柿叶片DNA质量和纯度较高,可用于AFLP分析。     

葡萄基因组DNA的提取及RAPD条件优化

采用改良CTAB法提取葡萄属22种植物的基因组DNA,对其完整性进行了测定,通过单因素五水平试验,筛选模板、Mg2+、Taq酶、dNTPs和随机引物的浓度及其用量,建立了葡萄RAPD技术最优体系,即25 μL体积中模板DNA为40 ng·μL-1,MgCl２ 2.0 mmol·L-1,dNTP 0.8 mmol·L-1,Taq DNA 聚合酶1 U·μL-1,引物 0.8 μmol·L-1,建立了葡萄基因组DNA的RAPD 反应扩增程序,即94℃预变性4 min, 94℃循环变性 45 s,37℃退火 55 s,72℃ 延伸 80 s,40个循环,最后72℃ 延伸10 min。     

人参基因组DNA的提取及RAPD—PCR反应条件的优化

探讨了人参基因组DNA提取方法及RAPD—PCR反应条件的优化．结果表明,用改良的CTAB方法提取的DNA均达到了RAPD—PCR分析的要求;优化的RAPD—PCR反应条件为：在25μLRAPD—PCR反应体系中,模板DNA20ng,dNTP200μmol／L,MgCl2 1．5mmol／L,10×Buffer2．5μL,引物浓度0．4pmol／L,TaqDNA聚合酶1．0U,其余以ddH20定容至25μL．PCR反应程序为：94℃预变性5min;94℃45S,40℃退火1min,72℃1min,共40个循环;最后在72℃延伸5min．     

峨眉含笑基因组DNA提取及RAPD反应体系的优化

以峨眉含笑嫩叶为材料,研究了峨眉含笑基因组DNA提取方法及RAPD反应条件。结果表明:采用改良的CTAB方法,提取的DNA质量较高,适宜于RAPD-PCR分析。在25μL反应体积中,RAPD分析的优化反应体系为:1.5 mmol/L Mg2+、0.8 mmol/L dNTP、240 nmol/L随机引物、80 ng DNA、1.0 U Taq DNA聚合酶。     

橄榄基因组DNA提取及RAPD扩增条件优化

以橄榄叶片为材料,进行橄榄基因组DNA提取及RAPD扩增条件优化。试验表明,采用改良的SDS法,提取的DNA质量较高,适宜于RAPD分析。在25μL反应体积中,RAPD反应的优化体系为:18.5μLddH2O,0.5μLdNTP,2.5μlBuffer,1μL引物,0.5μLDNA模板,2μLTaqDNA聚合酶。     

余甘子基因组DNA提取及RAPD反应条件优化

以余甘子叶片为材料,研究了余甘子基因组DNA提取方法及RAPD反应条件.结果表明,采用改良的SDS方法,提取的DNA质量较高,适宜于RAPD-PCR分析.在25μL反应体积中,RAPD分析的优化反应体系为:0.6mmol·L-1Mg2+、500-600μmol·L-1dNTP、300nmol·L-1随机引物、25ngDNA、1.00-1.25UTaqDNA聚合酶.     

基于正交试验设计优化真菌DNA提取的CTAB法

【目的】从统计学的角度明确CTAB法提取真菌DNA过程中各因素的影响,确定CTAB法提取真菌DNA的最优方案.【方法】本试验以菌体量、破壁、抽提、沉淀为考察因素,以核糖体RNA(rRNA)内转录间隔区(ITS)和28SrRNA基因序列的PCR反应扩增率为指标,用SPSS软件设计混合水平正交试验L25(5×34)并进行方差分析.【结果】采用CTAB法提取真菌基因组DNA时,菌体细胞破壁和沉淀DNA这两个步骤对真菌DNA提取效果的影响最大,其次是抽提步骤,在100mg范围内,菌体量对DNA的提取效果影响不大.【结论】采用CTAB法提取DNA时,挑取40~80mg菌体,用带有无菌塑料钻头的手电钻研磨进行菌体细胞的破壁,研磨时可先加入液氮冷冻后再进行研磨,或直接在冰上研磨,酚∶氯仿∶异戊醇(25∶24∶1)抽提1次,等体积异丙醇沉淀DNA,可以得到较好的DNA提取效果.