莆田南日岛泥东风螺的形态、DNA条形码和同工酶初步分析

为了解莆田南日岛泥东风螺(Babylonia lutosa)种质情况,采集泥东风螺养殖群体,对其样本的壳高(H)、壳宽(B)、体重(W)数量性状进行测量、推导关系式,以线粒体16S rRNA与COI、核18S rRNA与18S-28S rRNA基因为靶序列进行扩增和测序,结合同源序列与同属的其他7种东风螺或蛾螺总科(Buccinoidea)相关序列比对计算,以蝾螺属(Turbo)中华蝾螺(T.chinensis)作外群构建系统发育树,并提取样本个体的酯酶(EST)、苹果酸酶(ME)、超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)、苹果酸脱氢酶(MDH)和异柠檬酸脱氢酶(IDH)进行同工酶多态性分析。结果表明,南日岛泥东风螺(B.lutosa)个体之间壳面斑块不规则、螺壳形态差异不明显;系统发育树显示在东风螺属内泥东风螺和台湾东风螺(B.formosae)优先聚支、亲缘关系最近;个体间EST、SOD和IDH电泳观察到酶位点表达多态性,ME、LDH和MDH检测未发现酶带数多态性,仅存在酶活性表达差异。     

双线紫蛤Sanguinolaria diphos（Linnaeus）规模化繁育技术研究

为了保护和利用双线紫蛤资源,利用莆田市南日岛的野生双线紫蛤资源,开展双线紫蛤规模化繁育技术研究.报道了2012年在莆田市平海僧帽牡蛎原种场开展双线紫蛤规模化繁育技术的研究结果,探索双线紫蛤的繁殖习性、幼虫和稚贝培育、幼虫对附着底质、饵料需求及水质要求等方面的关键技术,总结了双线紫蛤规模化繁育技术及工艺流程.     

基于COI和16S rRNA的库页岛马珂蛤遗传多样性和分子系统进化研究

本研究以库页岛马珂蛤(Pseudocardium sachalinense)为研究对象,讨论COI和16S rRNA两种DNA条形码在贝类的遗传多样性、分子进化和种类鉴定的适用性,并利用两种条形码评估库页岛马珂蛤的遗传多样性。本文在获得库页岛马珂蛤线粒体全基因组的基础上,测序获得库页岛马珂蛤群体的COI和16S rRNA序列,发现COI基因核苷酸多样性为0.00195,高于16S rRNA核苷酸多样性(0.00073)。基于COI基因的单倍型多样性为0.76,大于16S rRNA的单倍型多样性(0.318)。其次,用全线粒体基因组构建8种贝类的系统进化树为参考,发现基于COI和16S rRNA的系统进化树与参考一致,提示这两种条形码片段可用于推断贝类的分子进化关系。最后,分别对马珂蛤科和帘蛤科15属17种贝类的COI基因和16Sr DNA进行序列比较,发现COI基因和16S rRNA的种间遗传距离均是种内距离的62倍。以上结果说明,16S rRNA与COI基因一样,能有效地构建马珂蛤科和帘蛤科的系统发育关系和物种鉴定,但在分析库页岛马珂蛤的遗传多样性时利用COI基因比16S rRNA能发现更多的遗传变异。     

哲罗鱼几种同工酶表型的初步研究

采用淀粉凝胶电泳方法，对乌苏里江下游虎头江段6尾哲罗鱼的肝脏、肌肉等组织的LDH、MDH、ME、IDH、SDH、EST等同工酶进行电泳，并对其表型进行生化遗传分析。LDH有3个位点，在各组织中的分布具显的差异，A与B亚基的结合受阻；SDH、ME和EST分别由1个、2个和4个基因位点编码；MDH和IDH各有3个位点。在检测到的6种同工酶共16个基因位点中未发现有多态位点，表明哲罗鱼在生化遗传上的变异比较贫乏。     

中国沿海紫蛤属的系统发育

紫蛤属(Sanguinolaria)贝类具有很高的经济价值,长期以来却存在着物种鉴定错误、种名使用混乱、同物异名等一系列问题,关于其系统分类和演化问题的研究较少。为探究中国沿海紫蛤属的系统发育关系,本研究利用两个线粒体基因(COI和16S rRNA),以及两个核基因(H3和28S rRNA)的部分序列,对采自中国沿海紫蛤属3亚属9种紫蛤61个个体进行系统发育分析。基于4个基因片段联合数据集T12(剔除COI第三位密码子位置)构建系统发育树。结果表明,两个线粒体基因片段GC含量明显低于AT含量,表现出对AT偏斜,两个核基因表现出对GC的偏斜。4个基因片段(COI、16S rRNA、H3和28S rRNA)的颠换与转换比值分别为5.073、3.042、1.564和1.480,均远高于系统分析的临界值0.4,能够提供有效的系统发育信息。基于4个基因片段的遗传多样性分析表明,9种紫蛤均具有较高的核苷酸多样性(Pi0.05)与单倍型多态性(Hd0.5)。基于COI基因片段的紫蛤属种内遗传距离为0~0.016,种间的平均遗传距离为0.087~0.331,其中卵紫蛤(Sanguinolaria ovalis)与中国紫蛤(Sanguinolaria chinensis)遗传距离最小,仅为0.087。利用最大似然法(maximum likelihood,ML)和贝叶斯法(Bayesian inference,BI)构建的系统发生树拓扑结构一致,分化为3大支,与形态学分类的三个亚属分别对应。中国紫蛤和卵紫蛤在系统树上首先聚为一支,表明其亲缘关系最近。本研究结果阐明了中国沿海紫蛤属贝类的遗传多样性及其系统演化关系,为紫蛤属贝类种质资源的保护及可持续利用提供了科学依据。     

双线紫蛤COI基因序列多态性与水环境分析

以双线紫蛤(Soletellina diphos)为研究对象,测定南日岛海区自然群体30枚个体的线粒体COI基因部分序列,研究其个体间的序列单核苷酸多态性(SNP),掌握双线紫蛤的遗传多样性;统计南日岛海域2008年4月—2018年12月期间海水样品的盐度、温度、pH、溶解氧、叶绿素a、透明度、化学需氧量、无机氮、无机磷、石油类10项理化因子检测结果,分析数据随季节月份变化状况,了解双线紫蛤栖息地水环境。结果显示,南日岛双线紫蛤群体30枚个体的序列中碱基T、C、A、G平均含量分别为41.95%、16.07%、18.53%、23.45%,(A+T)含量明显高于(G+C)含量,共发现13个核苷酸多态位点(转换/颠换偏倚率13.04),具有9个单倍型,有1个为引起亮氨酸/苯丙氨酸变化的非同义突变位点,单倍型多样性指数(Hd)为(0.598 0±0.103 0),核苷酸多样性(Pi)为(0.002 9±0.000 6),平均核苷酸变异数(k)为1.912 6,表现出略高于标准值的单倍型多样性和较低的核苷酸多样性,个体间的遗传距离为0～0.009 2、平均值为(0.002 9±0.001 0),Tajima's D和Fu's Fs中性检验的结果均为不显著负值,说明这个群体的双线紫蛤遗传相对稳定。南日岛产区水环境月均盐度变化范围为26.84～34.33、温度变化范围为13.27～29.33℃、pH变化范围为7.89～8.54、溶解氧变化范围为5.64～9.31 mg/L、叶绿素a变化范围为0.33～15.57μg/L、透明度变化范围为0.40～1.79 m、化学需氧量变化范围为0.22～1.59 mg/L、无机氮变化范围为0.04～0.45 mg/L、无机磷变化范围为0～0.16 mg/L、石油类变化范围为0～0.20 mg/L,盐度、温度在各年春、夏、秋三季变化皆先升后降,夏季最高;pH、溶解氧则在春、夏两季波动呈下降;而无机氮在春、夏、秋季趋势为先降后升,夏季最低;除了化学需氧量和石油类以外,其余参数的周年变动均表现出一定的季节性差异规律,同时表明双线紫蛤在以上的理化条件下都可以进行生长繁殖。     

我国不同地理群体栉江珧遗传多样性及系统发生分析

利用通用引物对5个栉江珧野生群体(山东长岛、山东日照、山东文登、广东湛江和海南海口) 28S rRNA 和COI 基因片段进行扩增测序,分别得到983bp和623bp的片段,基于28S rRNA序列分析系统发生的结果表明,栉江珧与Atrina vexillumju具有较近的遗传关系。基于COI基因序列的遗传多样性分析结果显示,山东文登群体具有最高的遗传多样性水平。AMOVA分析显示,群体遗传分化系数为0.132 3(P<0.001),说明栉江珧遗传变异主要来源于群体内的变异。由28S rRNA和COI基因聚类分析结果推测,由于地理隔离,我国栉江珧南北方群体可能早已分化为不同亚种。这些数据为我国栉江珧种质资源保护和利用补充了分子生物学资料。     

象山缢蛏养殖群体和野生群体遗传多样性的比较

于2001年4月，在浙江象山港虾塘和象山外海滩涂分别采集100个缢蛏(Sinonovacula constricta Lamarck)样品，采用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术，分析了2个群体各38个样本的EST、ADH、MDH、IDH、ME、LDH、GDH、SOD、SDH、ATP等10种同工酶，分别记录了30、29个基因位点。其中s-MDH-1、SDH、s—ME、ATP-1、ATP-2等5个位点为多态位点。象山野生缢蛏群体的多态位点比例(17．24％)和群体平均杂合度观察值(0．0377)都明显高于养殖群体(16．67％，0．0314)。结果表明，与其他贝类比较缢蛏象山养殖和象山野生群体拥有较低的遗传变异水平，其中象山野生群体比养殖群体遗传变异水平高。     

三疣梭子蟹野生群体同工酶的遗传多态性分析

采用聚丙烯酰胺不连续凝胶垂直电泳技术对三疣梭子蟹野生群体的同工酶进行检测.分析了48个样本的11种同工酶在三疣梭子蟹肌肉中的表达情况.11种同工酶(MDH、LDH、ME、SOD、 EST、SDH、IDH、ADH、POD、CAT、AAT)共检测出20个基因座位,其中Me-2、Sod-3、Cat-3、Ldh-2共4个座位呈多态(P0.99),多态座位百分数P为20%.平均每个座位的有效等位基因数目Ae为1.230,预期杂合度He为0.094,实际杂合度Ho为0.175.同时还分析了三疣梭子蟹4个多态座位的Hardy-Weinberg遗传偏离指数d.与日本绒螯蟹、中华绒螯蟹等相比,三疣梭子蟹野生群体的遗传多样性水平较高,种质资源还处于较好的状态.     

珠海长肋日月贝形态性状对体质量的影响

2021年5月于珠海采集34枚野生长肋日月贝（Amusium pleuronectes）,测定其壳长、壳宽、壳高、湿质量、软体部质量、壳质量、闭壳肌质量和性腺质量,利用相关性分析、通径分析以及多元回归分析,探究其表型3个形态性状对体质量的影响。在此基础上,将结果与已发表的广西北海、海南儋州、陵水、三亚以及琼海5个群体的长肋日月贝的参数进行对比。结果表明：珠海湾长肋日月贝除性腺质量外,湿质量、软体部质量、闭壳肌质量以及壳质量的复相关系数分别为0.956,0.945,0.856和0.878,均大于0.85,说明选取的3个形态性状（壳长、壳宽、壳高）是影响体质量的主要性状。逐步回归分析结果显示,对珠海长肋日月贝质量有影响的主要性状是壳长和壳宽,其中壳长直接影响性腺质量,与广西北海群体结果一致,壳宽影响湿质量、软体部质量、闭壳肌质量、壳质量,与其他群体结果不同。提出,珠海长肋日月贝以体质量为选育目标进行良种选育时,应关注壳宽,同时加强对壳长的协同选择,进而提高育种效率。     

哲罗鱼(Hucho taimen)同工酶研究

采用聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳技术对乌苏里江哲罗鱼肌肉、心脏、肝脏和眼4种组织中ADH、EST、G-6-PDH、IDH、LDH、MDH、ME、POD和SDH等9种同工酶的分布及表达进行研究。结果表明,9种酶在4种组织中的表达呈现出明显的组织特异性。遗传多样性分析共记录11个基因座位,其中有2个位点(Adh-2和Est-1位点)为多态,多态座位比例为18.2%;群体平均杂合度(H)为0.0395,位点有效等位基因数(Ne)为1.0511,Shannon’s信息指数(I)为0.068,表明哲罗鱼群体的遗传多样性程度处于较低水平;卡方检验结果表明哲罗鱼偏离Hardy-Weinberg遗传平衡。     

两种壳色虾夷扇贝的同工酶分析

采用不连续聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳技术对两种壳色虾夷扇贝的闭壳肌进行了同工酶检测分析与比较。8种同工酶（MDH、ADH、ME、SOD、EST、GDH、SDH和α-AMY）共检测出17个位点,其中白色贝有7个多态位点,褐色贝有6个多态位点,多态位点（P0.99）的比例分别为41．18％和35．29％,白色贝和褐色贝平均每个位点的等位基因有效数目（Ac）分别为1．1421和1．1040,预期杂合度分别（Hc）为0．0919和0．0674,实际杂合度（Ho）分别为0．1275和0．0907,多态位点的遗传偏离指数表明,白色贝具有更高的遗传变异水平和多样性水平。住点Est-3可以作为鉴定白色贝和褐色贝的特异性蛋白质分子标记。     

三疣梭子蟹野生群体同工酶遗传多态性分析

三疣梭子蟹野生群体同工酶的遗传多态性分析=Isozyme polymorphism in Portunus trituberculatus from wild population ［刊,中］/高保全（中国海洋大学生命科学与技术学部,青岛266003）,刘萍,李健,戴芳钰//水产学报,—2007,31(1).-1～6 采用聚丙烯酰胺不连续凝胶垂直电泳技术对三疣梭子蟹野生群体的同工酶进行检测。分析了48个样本的11种同工酶在三疣梭子蟹肌肉中的表达情况。11种同工酶(MDH、LDH、ME、SOD、 EST、SDH、IDH、ADH、POD、CAT、AAT)共检测出20个基因座位,其中Me-2、Sod-3、Cat-3、Ldh-2共4个座位呈多态(P0.99),多态座位百分数P为20%。平均每个座位的有效等位基因数目Ae为1.230,预期杂合度He为0.094,实际杂合度Ho为0.175。同时还分析了三疣梭子蟹4个多态座位的Hardy-Weinberg遗传偏离指数d。与日本绒螯蟹、中华绒螯蟹等相比,三疣梭子蟹野生群体的遗传多样性水平较高,种质资源还处于较好的状态。图1表3参22 关键词：三疣梭子蟹;野生群体;同工酶;多态性 E-mail：liuping@ysfri.ac.cn     

壳紫长牡蛎家系生长存活比较及生长性状的遗传参数评估

为了培育壳色和生长性状优良的壳紫长牡蛎(Crassostreagigas)新品系,2021年通过家系选育的方式,以壳色性状为主要选育指标,建立了第1代壳紫长牡蛎选育群体。本研究以壳紫F1为亲本,采用平衡巢式设计建立了36个全同胞家系,并以野生长牡蛎为亲本建立对照组,比较分析了各家系在生长和存活方面的性能表现;同时利用多性状动物模型对壳紫家系幼虫和稚贝期的生长性状遗传参数进行了评估。结果显示,不同生长阶段壳紫长牡蛎家系的存活率和壳高均值均高于对照组,幼虫期分别提高了1.49%～10.18%和3.75%～15.94%,稚贝期分别提高了4.05%～16.94%和15.95%～18.25%。不同壳紫家系的生长和存活情况也存在差异,没有发现在存活率和生长性状方面同时具有优势的家系。壳紫长牡蛎幼虫期壳高和壳长的狭义遗传力范围分别为0.43～0.84和0.49～0.80,稚贝期壳高和壳长的遗传力分别为0.15～0.33和0.18～0.37,均属于中高等遗传力。不同生长阶段壳紫长牡蛎家系壳高和壳长的遗传相关与表型相关均为正相关,幼虫期的相关系数分别为0.67～0.97和0.17～0.51,稚贝期为0....     

利用16S rRNA和COI基因序列对三疣梭子蟹不同群体遗传特征的比较分析

采用PCR扩增技术对三疣梭子蟹日本北海道群体、韩国东海岸群体和我国山东即墨市会场村群体3个野生群体的16S rRNA和COI基因片段进行了扩增和测序,分别得到了长度为523和658bp的片段。通过统计变异位点、平均核苷酸差异数和核苷酸多样性指数,分析比较了不同群体间的序列差异和遗传多样性水平。结果显示,我国会场三疣梭子蟹野生群体的遗传多样性水平较低。用MEGA4.0软件中的NJ法构建的分子进化树,基于16S rRNA片段构建的NJ系统树所反映的分类关系与基于COI基因片段构建的系统树并不一致,主要不同在于与日本蟳的分类关系上,基于16S rRNA基因片段构建的NJ系统树显示梭子蟹科的3个属聚为两大支:三疣梭子蟹不同的单倍型先聚在一起,再和梭子蟹属的远海梭子蟹及塞氏梭子蟹聚为一支;而青蟹属的3种蟹先聚在一起,再和日本蟳聚为一支。而基于COI基因片段构建的系统树显示,梭子蟹属先与青蟹属的两种蟹聚为一支,然后再与日本蟳聚在一起。本研究共发现19种单倍型,我国会场群体与日本北海道群体、韩国东海岸群体均有共享单倍型,表明我国会场群体与国外两个野生群体的遗传背景相似。这些资料为我国三疣梭子蟹的种质资源保护和利用提供了基础的分子生物学依据。     

乌苏里白鲑的生化遗传结构

2001年10月于黑龙江中游抚远江段捕获野生乌苏里白鲑(Coregonus ussuriensis Berg)30尾，体长30-45cm。采用淀粉凝胶电泳法对其肝脏、肌肉等组织的LDH、MDH、ME、IDH、G3PDH、ADH、GDH、PGI、CAT、AAT、EST、SOD等同工酶进行电泳，并对其表型进行生化遗传分析。结果表明，LDH同工酶的3个位点上都有基因复制，位点间不杂合；在其他同工酶上未见有位点复制或加倍。在检测到的12种同工酶是由26个基因位点编码；其中G3pdh-1、Pgi—3和Est—1等基因位点呈多态，其多态座位比例为11．5％，平均杂合度为0．043。与大多数其他鱼类相比较，乌苏里白鲑在生化遗传水平上表现出较低的遗传变异。     

企鹅珍珠贝同工酶酶谱特征及其遗传分析

采用垂直板状聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳分离技术,对企鹅珍珠贝闭壳肌、外套膜、鳃、消化盲囊、足组织的SOD、EST、LDH、G6PDH、MDH、ME 6种同工酶酶谱特征及其遗传控制进行了研究。6种同工酶在不同组织中的表达有明显的差异,同工酶分析共检测到18个位点,其中有16个位点具多态性,群体中,多态位点比例为88.8％,平均杂合度为0.396±0.029。有13个多态位点上的基因型频率与Hardy-Weinberg定律相符(P>0.05),位点Ldh-1、Ldh-2、Sod-2极显著偏离该平衡(P<0.01)。在G6pdh-1位点发现较高频率的无效等位基因。     

不同地理群体菲律宾蛤仔壳形态对体重性状的影响研究

采集我国南北沿海9个地理群体的菲律宾蛤仔(Ruditapes philippinarum),利用通径分析等方法评估各群体形态性状对活体重和软体重的影响。结果显示,各群体壳长、壳高、壳宽和壳厚4 个形态性状对菲律宾蛤仔活体重和软体重的影响存在显著差异。除壳厚外,其他形态性状与活体重和软体重呈显著相关(P < 0.05)。通径分析和决定系数分析显示,大多数群体的壳宽对活体重和软体重的直接作用最大。2个形态比例参数(壳宽/壳长和壳高/壳长)最大值出现在山东莱州群体(0.49和0.74),而最小值出现在大连东港群体(0.42和0.67)。壳厚的变异系数最大(22.74),而壳高的变异系数最小(9.47)。通过检验偏回归系数的显著性,建立了各群体形态性状对软体重的最优回归方程。聚类分析表明,菲律宾蛤仔不同群体未出现明显的地域分布特征,而呈现出不规律的南北交替聚类现象。本研究查明了不同地理群体菲律宾蛤仔壳形态性状对体重性状的影响,为菲律宾蛤仔地理群体的形态判别、种质资源分析和遗传育种研究等提供了重要科学依据。     

中国南海野生斑节对虾5个地理群体线粒体16S rRNA基因序列比较分析

对中国南海海域5个斑节对虾野生群体三亚群体(SY)、深圳群体(SZ)、阳江群体(YJ)、湛江群体(ZJ)、北海群体(BH)100个样品的16S rRNA 序列进行PCR扩增,并对扩增产物进行了测序.用CLUSTAL_X排序软件对测序所得的100个16S rRNA序列进行比对.通过ARLEQUIN软件对所得100个16S rRNA序列进行比较分析,共检测出28个变异位点,19种单倍型.三亚、深圳、阳江、湛江以及北海等5个野生群体的核苷酸多样性(π)依次分别为0.004 35,0.005 86,0.010 50,0.010 81,0.011 68.三亚、深圳、阳江、湛江以及北海等5个野生群体的单倍型多样性(H)依次分别为0.689 5, 0.521 1, 0.573 7, 0.600 0, 0.721 1.对5个野生群体的16S rRNA序列进行FST分析,结果表明湛江、北海群体分别与三亚、深圳两个群体有显著的遗传差异,其余群体之间的遗传差异不显著.对5个群体进行AMOVA分析结果表明,5个群体间存在显著性遗传差异.对5个群体构建分子系统树,结果表明,三亚和深圳群体之间的亲缘关系最近;北海、湛江群体与三亚、深圳群体的亲缘关系很远.实验表明,中国南海海域5个斑节对虾野生群体可以为斑节对虾的选择育种提供两个基础群体:一个是三亚、深圳野生原种基础群体;另一个是湛江和北海野生原种基础群体.     

中国南海斑节对虾5个地理群体线粒体18S rRNA基因序列比较分析

摘要：本文对中国南海海域5个斑节对虾野生群体（三亚群体（SY）、深圳群体（SZ）、阳江群体（YJ）、湛江群体（ZJ）、北海群体（BH））100个样品的 16SrRNA 序列进行PCR扩增,并对扩增产物进行了测序。用Clustal_X排序软件对测序所得的100个16S rRNA序列进行比对。通过ARLEQUIN软件对所得100个mtDNA16S rRNA序列进行比较分析,共检测出28个变异位点,19种单倍型。三亚、深圳、阳江、湛江以及北海等5个野生群体的核苷酸多样性（π）依次分别为0.00435,0.00586,0.01050,0.01081,0.01168。三亚、深圳、阳江、湛江以及北海等5个野生群体的单倍型多样性（H）依次分别为0.6895, 0.5211, 0.5737, 0.6000, 0.7211。对5个野生群体的16S rRNA序列进行FST分析,结果表明湛江、北海群体分别与三亚、深圳两个群体有显著的遗传差异,其余群体之间的遗传差异不显著。对5个群体进行AMOVA分析,结果表明5个群体间存在显著性遗传差异。对5个群体构建分子系统树,结果表明：三亚和深圳群体之间的亲缘关系最近;北海、湛江群体与三亚、深圳群体的亲缘关系很远。以上结果表明,中国南海海域5个斑节对虾野生群体可以为斑节对虾的选择育种提供两个基础群体：一个是三亚、深圳野生原种基础群体;另一个是湛江和北海野生原种基础群体。