江西省吉水县柑桔黄龙病菌检测

为了确切诊断江西省吉安市吉水县近年出现的疑似柑桔黄龙病,2019年12月从该县6个柑桔园中共采集12份(株)叶片样品,采用PCR和序列测定技术对叶样进行黄龙病菌检测.结果,从6份样品中检测到柑桔黄龙病菌亚洲种,即亚洲韧皮部杆菌(CandidatusLiberibacter asiati-cus,CLas).表明吉水县已...     

单头柑桔木虱中黄龙病菌快速检测方法建立与应用

将快速裂解制样法和环介导等温扩增技术(LAMP)结合,建立了单头柑桔木虱体内黄龙病菌的快速检测方法。整个检测,从裂解制样(65℃恒温裂解10 min)→LAMP扩增(65℃,30 min)→荧光显色观察(10 000×SYBR greenⅠ染料),在45 min内就可以完成。该方法和实时定量PCR法检测结果一致,其灵敏度高于普通PCR法。该方法操作简便,所需时间短,准确度高,适用于基层检测部门。     

3种提取单头柑桔木虱体内黄龙病菌DNA方法的比较

为找出较优的单头柑桔木虱黄龙病菌核酸提取方法,以饲养于温室内感染柑桔黄龙病的甜橙树上的柑桔木虱为试材,采用3种方法提取单头柑桔木虱的总核酸,对提取的核酸样品进行质量检测,并利用柑桔黄龙病菌特异性引物OI1/OI2c以及r-rplLAs/f-rplLAs分别进行了常规PCR和qPCR检测。结果表明,3种方法均可以成功提取到单头柑桔木虱总核酸且均能检测到黄龙病菌。3种方法各有优缺点:李菁的方法步骤简单、历时短,提取的核酸浓度较高,但核酸质量较低;氯仿-异戊醇法步骤较多、历时长,提取核酸浓度较低,但核酸质量较高;动物组织直接PCR试剂盒法简便快速,提取的核酸浓度高,核酸质量一般,成本较高。     

柑桔黄龙病LAMP快速检测方法的建立

根据GenBank中柑桔黄龙病菌的外膜蛋白(OMP)基因序列,设计了一套环介导等温扩增引物,建立了柑桔黄龙病的环介导等温扩增检测方法.该方法灵敏度可达25 pg/μL,与实时荧光PCR方法灵敏度相同.全部反应只需一个可控温的水浴锅在60分钟内即可完成,通过肉眼观察浊度状况即可判定结果.该方法具有简便、快速、灵敏、特异等特点,适用于基层工作站的柑桔黄龙病鉴定工作.     

定量分析柑桔黄龙病菌在沙糖桔中的分布

在广东清远感染柑桔黄龙病的沙糖桔园采带果枝条,分部位取样提取总DNA,并通过实时荧光PCR检测"Candidatus Liberibacter asiaticus"浓度。结果表明,不同部位的黄龙病菌浓度存在较大差异。其中,果实桔络的黄龙病菌含量最高,且黄龙病菌在果实中呈现富集状态。     

柑桔黄龙病菌的重组酶聚合酶扩增(RPA)检测

为了建立黄龙病菌的重组酶聚合酶扩增(Recombinase Polymerase Amplification, RPA)快速检测体系,丰富柑桔黄龙病的高效简便检测方法,以黄龙病菌株psy62全基因组中的单拷贝tufB-secE-nusG-rplKAJL-rpoB基因簇序列和5拷贝核糖核苷酸还原酶β亚基基因(nrdB)序列设计并筛选特异性引物,经灵敏度比较和检测特异性验证,建立该病的RPA检测体系,并经PCR、RPA和实时荧光PCR对87份柑桔样品的黄龙病菌进行对比检测,验证RPA检测体系的适用性。结果表明,建立的黄龙病菌RPA检测方法能特异性检测柑桔黄龙病;灵敏度与实时荧光PCR相当,是PCR的100倍;扩增过程只需20 min,大幅提高检测效率;对田间疑似柑桔黄龙病的送检样品检测结果与实时荧光PCR一致,比PCR的检出率高。     

贵州柑桔主产区柑桔黄龙病菌发生及遗传多样性研究

为掌握贵州省柑桔黄龙病的疫情及了解病原菌的遗传多样性,2015—2016年在15个县(市)采集了104份柑桔黄龙病疑似样品,进行柑桔黄龙病菌16SrDNA常规PCR检测及柑桔黄龙病菌亚洲种噬菌体转移酶基因位点多态性分析。结果表明,供试样品有19份检测为阳性,阳性检出率为18.27%。贵州柑桔黄龙病疫情主要集中在罗甸、望谟、兴义、册亨等黔南和黔西南柑桔黄龙病发生老区,从江、榕江等黔东南地区疫情得到一定控制,遵义及铜仁等地区未发现疫情。贵州省内柑桔黄龙病菌有丰富的遗传多态性,在地理来源及寄主品种来源上均表现出遗传差异。     

柑桔黄龙病菌在贡柑叶片中的分布分析

2017年11月在广东省仁化县4个感染柑桔黄龙病的贡柑园中采叶片样品,进行常规PCR和实时荧光定量PCR检测,从不同病症叶片、典型症状叶片不同部位、初期感病树不同部位(正常和显症)叶片等3个方面分析了贡柑叶片中黄龙病菌"Candidatus Liberibacter asiaticus"(CLas)的分布情况。结果表明,叶片斑驳黄化症和均匀黄化症是与黄龙病最相关的症状,CLas含量很高;缺锌黄化症,具有黄龙病阳性与阴性两类样品;无明显黄化但呈革质化的叶片,CLas含量高。在斑驳黄化与均匀黄化叶片中,CLas的含量从叶尖到叶柄、从叶片到主叶脉呈现递增趋势,即以主叶脉与叶柄的含量更高。初期感病树未显症的部位也会检出黄龙病菌。     

柑桔溃疡病菌的PCR检测方法研究

通过优化PCR反应条件,拟建立快速、特异、准确的检测柑桔溃疡病的方法。试验结果表明,25μL优化反应体系:10×PCR缓冲液2.5μL,10 mM/L dNTPs 0.5μL(终浓度为0.2 mM/L),2 U/μLTaq DNA聚合酶0.5μL(终浓度为0.04 U/μL),5 mM/L引物各0.5μL(终浓度为0.1 mM/L),DNA模板1μL(终浓度为6.0×10~6cfu/mL/mL),灭菌ddH_20 19.5μL;PCR扩增退火温度为59℃;柑桔溃疡病菌病茵浓度检测下限为6.0×10~3cfu/mL,可以获得柑桔溃疡病菌的特异性片段,能够满足生产中对柑桔溃疡病检测的要求。     

热水浸泡柠檬接穗脱除柑桔黄龙病菌的效果

为探寻脱除柠檬枝条中柑桔黄龙病菌的热水处理方案,采集感染柑桔黄龙病的尤力克柠檬接穗,进行不同温度和不同时间的热水浸泡处理,调查不同处理的接穗褐化情况、嫁接发芽情况及脱毒效果。结果表明,45℃热水浸泡30min再47℃热水浸泡20~30min、3次47℃热水浸泡12min、49℃热水浸泡15min、50℃热水浸泡8min均能有效脱毒且接穗无褐化,其中,45℃热水浸泡30min再47℃热水浸泡20min和50℃热水浸泡8min的嫁接发芽率均达到93.0%以上。     

美国：加州用黄蜂防柑桔黄龙病菌侵袭

美国加利福尼亚州（以下简称加州）的柑桔正遭受柑桔黄龙病的侵袭,被侵染的果实果皮粗糙,味道变苦,最后整株树死亡。柑桔黄龙病主要由柑桔木虱传播。杀虫剂对柑桔黄龙病不起作用。隔离也不见效果。现如今,美国加州从巴基斯坦引进了一种寄生蜂,有半块巧克力大小,能吞噬木虱类昆虫,雌蜂还会在昆虫腹部产卵繁殖．孵化后能够将其寄主吞噬。     

潮汕地区柑桔黄龙病菌及虫媒柑桔木虱的发生与种群研究

2020年8-12月,在柑桔黄龙病(Citrus Huanglongbing)及柑桔木虱起源地之一的潮汕地区,选择3种防控水平(有针对虫媒管理、无针对虫媒管理和无管理)蕉柑果园,调查对比植株黄龙病发病率,柑桔木虱发生量、种群类型、带菌率和阳性样品带菌量,黄龙病菌16SrDNA和前噬菌体序列.结果表明,有针对虫媒管理的果...     

柑桔黄龙病菌浓度对琼中绿橙果实品质的影响

为了定量衡量黄龙病菌量对琼中绿橙果实品质的影响,在海南省琼中县一个感染了柑桔黄龙病的琼中绿橙果园中采摘果实为试验材料,用实时荧光定量PCR相对定量的方法测定果实中心柱中柑桔黄龙病菌浓度,同时对果实品质的8个外在指标(果实纵经、横径、果形指数、单果质量、果皮率、残渣率、种子数量、种子质量)和5个内在指标(果汁率、可食率、...     

柑橘黄龙病菌双重实时荧光PCR检测方法的建立

建立基于双重荧光定量PCR检测柑橘黄龙病菌(Candidatus Liberibacter asiaticus,CLas)的方法,并对其准确性进行验证。通过受试者工作特征(ROC)曲线、净重分类改善指数(NRI)和综合判别改善指数(IDI)分析7对CLas实时荧光PCR引物及其联合检测的准确性,评价RNRf/RNRr联合CLas-4G/HLBr的双重实时荧光PCR对CLas的检测价值。ROC曲线分析结果显示,表现最好的引物是RNRf/RNRr,其曲线下面积(AUC)为0.971,高于其他6对引物;其次是CLas-4G/HLBr引物,AUC为0.966;在双引物联合检测中,RNRf/RNRr+CLas-4G/HLBr引物串联检测、CQULA04F/CQULA04R+RNRf/RNRr引物并联检测的相关性能指标较优,AUC分别为0.963和0.966,并且RNRf/RNRr+CLas-4G/HLBr引物串联检测同时具备较高的敏感性(85.19%)和特异性(99.25%)。NRI分析结果表明RNRf/RNRr+CLas-4G/HLBr串联检测的诊断能力相较于LJ900f/LJ900r的单一引...     

基于SSR标记的赣南柑桔黄龙病菌遗传多样性分析

从已报道的韧皮部杆菌基因组的23个SSR位点中筛选出3个位点(LasSSR-C、LasSSRD、CWBJ44),用于赣南14个县(区、市)的342份柑桔黄龙病菌样品的遗传多样性及各地种群结构的分析。结果表明,赣南地区柑桔黄龙病菌种群在LasSSR-C、LasSSR-D和CWBJ44位点的Nei’s多样性指数H分别为0.734 6、0.576 2和0.291 3,赣州西南部县(区、市)的多样性指数H比东北部高;大余县的等位基因与其他县(区、市)区别较大。Powermarker软件UPGMA聚类分析将所有样品分为两个组群,大余县单独列为一个组群,其余县(区、市)聚为一个组群。Structure软件聚类分析也得出了相似的结果,大余县的种群构成较为单一,91.8%的样品属同一组群,而其他县(区、市)的种群则是由两个组群菌株按不同比例混合构成。     

赣南柑桔木虱发生动态与携带黄龙病菌变化研究

为掌握近年来赣南柑桔木虱发生动态及其携带黄龙病菌变化情况,2016-2020年定点、定时监测了赣南10个县(区)20个正常管理果园的柑桔木虱成虫发生动态变化,并于2018年和2020年利用实时荧光定量PCR检测了 8个县(市)正常管理果园和失管果园柑桔木虱成虫带菌情况.结果表明,赣南地区柑桔木虱成虫发生高峰集中在5月下...     

‘Cocktail’葡萄柚黄龙病菌检测及鉴定

采用直接组织免疫印迹(Direct tissue blot immunoassay,DTBIA)和常规PCR技术,对采自广东梅州新建‘Cocktail’葡萄柚园内表现疑似黄龙病症状的样品进行检测。DTBIA检测发现疑似样品的韧皮部存在特征性紫红色反应,与黄龙病阳性对照反应一致。PCR检测发现枝条、叶片和果实样品中均检测出了黄龙病菌特异性条带,其中果蒂、中柱和种皮内病菌含量较高。进一步测序分析发现,来自‘Cocktail’葡萄柚病样的16Sr DNA和ef Tu基因与NCBI中的柑橘黄龙病菌亚洲种(Candidatus Liberibacter asiaticus,CLas)对应基因的序列相似性均为100%,证实‘Cocktail’葡萄柚感染了柑橘黄龙病菌亚洲菌株。     

应用DTBIA技术快速检测柑橘黄龙病菌研究

柑橘黄龙病病原菌为韧皮部限制性寄生菌Candidatus Liberibacter,迄今为止尚未成功获得离体纯培养。因此基于特异性抗体的高通量血清学检测技术迄今尚未开发。本实验室前期研究利用异源表达重组黄龙病菌外膜蛋白Omp_(CLas)免疫动物,制备并获得了特异性多克隆抗体(Anti-Omp_(CLas)-Pab)。本研究利用直接组织印迹免疫法(Direct tissue blot immunoassay,DTBIA)技术对获得的多克隆抗体的检测效果进行了初步评价,证实该抗体可以特异性识别中国不同地理来源的柑橘黄龙病菌分离物;柑橘叶柄、叶片中脉、枝条、根部、果梗和种子中均存在黄龙病菌,其中根部和种子中的病菌含量相对较低,枝条和叶片中脉中的含量较高。该多克隆抗体的获得为后续快速检测试剂盒或试纸条的研发奠定了基础。     

美研究人员找到提前检测携带柑桔黄龙病毒昆虫的方法

为保护柑桔生产,美国农业部农业研究署植物病理学专家Richard F．Lee和Keremane L．Manjunath研究出一种新的检测方法。该方法可以检测出柑桔木虱是否携带柑桔黄龙病病毒,柑桔木虱携带的这种病毒是柑桔黄龙病的3种致病毒之一。     

柑桔黄龙病树的识别

<正>柑桔黄龙病树的确认有实验室检测法和田间症状判断二种方法。常用的方法是田间症状判断法,现将其识别要点阐述如下: