I型犬腺病毒黑龙江株(CAV-H)的分离、鉴定及致弱的研究

为研究犬腺病毒(CAV)致弱疫苗的免疫原性,本研究将病犬的组织样品接种于MDCK细胞内,进行病毒分离及鉴定。鉴定结果显示,分离的病毒在MDCK细胞内产生明显的细胞病变(CPE),电镜下可见典型的腺病毒粒子;回归动物试验显示,该分离株可导致犬出现明显的CAV感染症状;PCR鉴定结果表明分离的病毒为CAV,命名为CAV-H株;将CAV-H株接种MDCK细胞连续传代至110代,在传代过程中,病毒滴度由初始105.0 TCID50/0.1 mL上升至107.0 TCID50/0.1 mL,而CAV对犬的致病力逐渐降低;免疫效力试验结果表明,CAV-H可对同源强毒攻击的犬提供完全的免疫保护作用,可作为理想的疫苗候选毒株。     

犬细小病毒四川株的分离与鉴定

采集5份患出血性肠炎犬的粪便,通过猫肾细胞(F81)传代培养后,成功分离到2株病毒。对2株病毒进行病毒形态学、理化学、血凝试验、PCR鉴定与分子生物学系统鉴定后,证实分离株是犬细小病毒,通过VP2结构蛋白测序分析表明,新分离到的2株细小病毒抗原型分别属于CPV-2a和CPV-2b。     

犬细小病毒的分离与鉴定

<正> 犬细小病毒(CPV)是引起犬急性出血性胃肠炎和幼犬心肌炎的主要病原。1977年首次由Eugster和Nairn从患腹泻的病犬粪便中分离出病毒,随后许多国家陆续报道。1980年秋以来,在我国警犬中发生疑似本病的流行,对养犬业造成了极大的威胁,严重影响了我国警(军)犬事业的发展。1982年开始使用国外引进疫苗,但仍未控制流行。为查清病原,确定病性,以便提供有效地诊断和     

犬细小病毒四川株的分离与鉴定

为更好地了解我国细小病毒流行情况,笔者从四川农大动物医院采集5份患出血性肠炎犬的粪便,通过猫肾细胞(F81)传代培养后,成功分离到两株犬细小病毒。对两株病毒进行病毒形态学、理化学、血凝试验、PCR鉴定与分子生物学系统鉴定后,证实分离株是犬细小病毒,通过VP2结构蛋白测序分析表明,新分离到的两株细小病毒抗原型分别属于CPV-2a和CPV-2b。     

犬细小病毒的分离鉴定

用猫肾(F81)细胞从沈阳某养犬场病死犬的肠内容物中,分离到1株细小病毒.根据犬细小病毒(CPV)VP2基因的核苷酸序列设计合成了两对特异性引物,对分离的病毒株进行PCR扩增,分别得到846 bp和815 bp的2个片段,PCR产物经纯化后测序,测序结果与GenBank中已发表的CPV参考株PLI-IV(typeFPV)、CPV-b(type2)、V154(type2a)、LCPV-V204(type2b)、LCPV-V139(type2c(a))和LCPV-V203(type2c(b))的VP2基因序列相比较,根据分析比较的数据结果,确定此株细小病毒为CPV-2a亚型.     

犬细小病毒YZ分离株的鉴定

对1999年冬季江苏省实验动物Beagle犬基地暴发的以拉稀、便血、高死亡率的病犬作流行病学调查、病理和实验室诊断。粪便血凝价高达2^14以上，并用HI加以验证，初步诊断为犬细小病毒感染引起的出血性肠炎。用FK81细胞（胎猎肾传代细胞）分离病毒，细胞上清HA试验阳性；负染电镜观察到在小为20nm左右的病毒粒子；接种病料的细胞IFA检测可见特异性的亮绿色荧光。在小肠的病理切片中见到典型的嗜酸性核内包涵体。以此确诊为犬细小病毒感染引起的出血性肠炎。利用双琼脂空斑技术克隆一株犬细小病毒，命名为CPV－YZ株，其核酸型是单链DNA，对甲醛敏感，对氯仿、酸、胰蛋白酶不敏感，80℃ 60分钟失去活力，0．1ml TCID50是10^-6.8,SDS-PAGE电泳两条清晰的条带分别为：76kD的VP1，64kD的VP2。     

犬细小病毒HZ0761株的分离与鉴定

采集疑似细小病毒(CPV)感染犬的粪便,采用同步培养法接种胎猫肾细胞(F81)进行病毒分离鉴定。通过PCR检测、HA试验、IFA鉴定、电镜观察和空斑纯化,获得1株犬细小病毒,并命名为HZ0761。感染的F81细胞48h后出现明显的细胞病变;在病料和感染的F81细胞中均扩增出CPV VP2基因的特异性片段(221 bp);病毒液可凝集猪红细胞,血凝价为1∶28,其血凝性能被特异性抗体抑制;IFA可见特异性亮绿色荧光;电镜观察感染的F81细胞核内可见20 nm左右的病毒颗粒;病毒液的TCID50为10-4.8/mL,VP2基因序列分析显示该毒株为CPV-2 a型。     

犬细小病毒TZ2#株的分离与鉴定

采集疑似犬细小病毒(CPV)感染犬的粪便,采用同步培养法接种胎猫肾细胞(FK81)进行病毒分离鉴定。通过PCR检测、HA试验、PEG纯化,获得1株犬细小病毒,并命名为TZ2#株。感染的F81细胞48h后出现明显的细胞病变;在感染的FK81细胞中扩增出CPV基因的特异性片段;病毒液可凝集猪红细胞,血凝价为1∶64,其血凝性能被特异性抗体抑制。     

Characterisation of canine parvovirus strains isolated from cats with feline panleukopenia

Unlike the original canine parvovirus type 2 (CPV-2), CPV-2 variants have gained the ability to replicate in vivo in cats but there is limited information on the disease patterns induced by these variants in the feline host. During 2008, two distinct cases of parvoviral infection were diagnosed in our laboratories. A CPV-2a variant was identified in a 3-month-old Persian kitten displaying clinical sign of feline panleukopenia (FPL) (acute gastroenteritis and marked leukopenia) and oral ulcerations, that died eight days after the onset of the disease. Two pups living in the same pet shop as the cat were found to shed a CPV-2a strain genetically identical to the feline virus and were likely the source of infection. Also, non-fatal infection by a CPV-2c strain occurred in a 2.5-month-old European shorthair kitten displaying non-haemorrhagic diarrhoea and normal white blood cell counts. By sequence analysis of the major capsid protein (VP2) gene, the feline CPV-2c strain showed 100% identity to a recent canine type-2c isolate. Both kittens had been administered multivalent vaccines against common feline pathogens including FPL virus. Whether and to which extent the FPL vaccines can protect cats adequately from the antigenic variants of CPV-2 should be assessed.     

The pathogenicity of canine parvovirus type-2b, FP84 strain isolated from a domestic cat, in domestic cats

Canine parvovirus type-2a (CPV-2a) and type-2b (CPV-2b) have recently been isolated from domestic cats. The pathogenicity of CPV-2b in domestic cats is still unclear. In this study, we performed infection tests to examine the pathogenicity of CPV-2b, FP84 strain, isolated from a domestic cat. The results demonstrated that the CPV strain FP84 is able to infect and replicate well in domestic cats. Two of the 3 cats used in the test died. They showed loss of appetite, diarrhea, leukopenia and dehydration. Since FP84 was found to be virulent to domestic cats, it is necessary to examine the efficacy of inactivated feline panleukopenia virus vaccines against CPV infection in domestic cats.     

犬细小病毒北京分离株VP2基因克隆及变异分析

对北京昌平地区分离的9株犬细小病毒(Canine parvovirus,CPV)进行VP2基因克隆测序,并利用生物信息学软件,将克隆的VP2基因与GenBank公布的国内外部分毒株序列相比较,绘制系统进化树,分析9株CPV VP2蛋白亲水性和抗原指数.结果表明,分离毒株与参考毒株核苷酸和氨基酸同源率在97%以上.通过序列比对与分析,确定其中有8株为New CPV-2a,1株为CPV-2,表明该地区目前主要以New CPV-2a流行为主.9株分离株在进化树上都能找到亲缘关系较近的毒株,没有形成新的分支.9株VP2蛋白亲水性高的区域抗原指数相应就高,不同株之间总体差别很小,主峰相同.     

Efficacy of an inactivated feline panleucopenia virus vaccine against a canine parvovirus isolated from a domestic cat

Canine parvovirus type 2a (CPV-2a) and type 2b (CPV-2b) have recently been isolated from cats throughout the world, and CPV-2b strain FP84 has been reported to be virulent in domestic cats. Although live feline panleucopenia virus (FPLV) vaccines protect domestic cats from CPV infection, the efficacy of inactivated FPLV vaccines has not been established. In this study, two domestic cats were vaccinated with a commercial inactivated FPLV vaccine and challenged with CPV-2b strain FP84 isolated from a domestic cat. The cats were protected against CPV-2b strain FP84 infection and their clinical signs were suppressed, although the two unvaccinated cats showed the typical clinical signs of parvovirus infection.     

犬细小病毒BJ06/06株致病模型的初步建立

犬细小病毒在全国乃至世界范围内广泛流行，而现阶段常用的疫苗对新变异毒株的预防效果并不理想。在新型疫苗的研发过程中，亟需建立评价动物免疫效果的流行毒株攻毒标准。通过对比格犬进行犬细小病毒流行毒株的人工感染试验，从临床症状、血液生化和病理变化等对患病犬进行多维度的综合评价。结果显示，患病犬均表现出了典型的体温升高、呕吐、精神沉郁、腹泻、血便等临床症状，白细胞数量显著降低，血浆白蛋白含量降低、碱性磷酸酶和血清磷含量升高，且不同攻毒剂量组间有显著差异。本研究初步建立了犬细小病毒(BJ06/06株)的致病模型，接种方式为每只比格犬灌服5 mL病毒液(10^4.5TCID₅₀/0.1mL),同时左右后肢各肌肉注射1 mL病毒液。本模型为后续犬细小病毒病新型疫苗的研发和免疫效果评价提供了参考依据。     

羊口疮病毒黑龙江省分离株的分离鉴定

为确定黑龙江大庆地区某羊场发生的疑似羊口疮(Orf)的病原,本研究采用MDBK细胞培养途径从病羊的口唇部位的痂皮病料中分离出1株病毒.通过电镜观察和IFA鉴定证明该分离株为Orf病毒,命名为OV/HLJ/04.其F1L基因核苷酸序列测定和进化分析显示,OV/HLJ/04与国内报道的山西株(HQ221964)的遗传关系密切,同源性达到98.2％.将该病毒分离株进行回归本动物试验,接种羔羊发生严重的羊口疮.     

犬细小病毒山东分离株VP2基因的克隆与遗传变异分析

为了解山东省犬细小病毒(CPV)流行毒株的遗传变异情况及其与犬细小病毒病的分子流行病学关系,对2013年分离到的12株山东CPV流行毒株进行了VP2基因克隆测序与同源性分析,绘制系统进化树。结果表明,获得的VP2基因的全长为1 755 bp,编码584个氨基酸残基;各分离毒株之间的核苷酸和氨基酸同源率分别为98.9%~100.0%和98.8%~100.0%,与Gen Bank公布的国内外参考毒株核苷酸和氨基酸同源率在98%以上,分离株VP2基因及其推导的氨基酸的变异主要以点突变为主,关键氨基酸位点未见明显改变。遗传进化分析显示,有8株为New CPV-2a,4株为New CPV-2b,表明目前山东省所流行的CPV主要以New CPV-2a亚型为主。研究结果为山东犬细小病毒病的防控提供了依据。     

褐家鼠汉坦病毒黑龙江SC106分离株S基因特征分析

为研究家鼠型(SEO)汉坦病毒(HV)黑龙江分离株的分子特征,本研究对黑龙江省SEO型新分离株SC106的S基因进行了扩增和序列分析。结果表明:SC106株S基因全长由1775nt组成,编码的蛋白长429aa,符合SEO型编码。与HV参考毒株进行比较,SC106与SEO型同源性最高,与姬鼠型(HTN)相对较低,与其它型别同源性更低。N蛋白进化树分析表明,SC106位于SEO型病毒所在支系,与河南株R22,黑龙江株Pf26和北京株BjHD01亲缘关系接近,体现了一定的宿主依赖性和地理簇集性。序列分析表明:SC106与黑龙江省首个SEO型分离株Pf26均为SEO型中的S1亚型,它们的S基因核苷酸序列同源性也最高(99.2%),并且SC106的S基因编码的N蛋白氨基酸序列也比较保守,由此证实,HV的进化与时间关系不大。     

黑龙江东部地区猪瘟病毒分子流行病学研究

本研究参考公开发表的Alfort株基因组全序列，用计算机软件Dnsstar的PrimerSelect程序设计了两对SCFVE2基因高变区的特异性引物，对黑龙江东部地区分离的5株猪瘟野毒(HL、JN、MSNDD、NSPD)和MSHT株)进行RT-PCR扩增、克隆和序列测定，并将这5株野毒的高变区基因序列与国内外公开发表的参考毒株的相应部分进行了比较。结果表明，5株分离毒均为基因Ⅱ群，且形成两个独立的分支，HL、JN株与HCLV株氨基酸差异在60％以上，而MS株与HQJV株氨基酸差异在30％左右。