哺乳动物附植前胚胎细胞凋亡的研究进展

细胞凋亡是细胞为维持内环境稳定,更好地适应生存环境而主动形成的一种自我死亡过程,它涉及一系列基因的激活、表达及调控等作用。附植前的胚胎就已经观察到凋亡的发生,研究认为超出一程度的凋亡不利于胚胎的发育。作者主要对哺乳动物附植前胚胎发生凋亡的研究进行阐述,为改进体外培养体系、提高胚胎质量提供一定的理论依据。     

哺乳动物附植前胚胎的基因表达调控

哺乳动物胚胎附植前期包括:合子的形成,胚胎基因组的激活和细胞分化的开始。在这个时期,发育由母源物质控制转为合子基因控制,在此过程,同时形成染色质介导的转录抑制时期,要解除抑制必须经过胚胎基因组的激活。通过对体内、外附植前胚胎的mRNA的表达特点以及它们与成功发育联系的研究,可以筛选出最佳的体外培养条件,设计最佳的核移植方案。     

热应激对小鼠附植前早期胚胎HSP70的诱导表达

选择超数排卵后怀孕昆明小鼠75只,以注射人绒毛膜促性腺激素(hCG)后的胚胎发育阶段为标准,分别在合子、2细胞、4细胞、8~16细胞和囊胚期对孕鼠进行了37℃、39℃、41℃和43℃热应激4 h。热应激后取胚,用免疫荧光细胞化学法检验胚胎热休克蛋白70(HSP70)的诱导表达。结果表明,HSP70在4细胞以上胚胎内呈阳性表达,相对高温时其表达量增加,囊胚时最显著。可见,附植前早期胚胎HSP70的热诱导表达与细胞期和温度密切相关。     

牛卵母细胞和附植前胚胎的rRNA基因表达及其核仁生物学研究进展

胚胎体外生产作为常规研究手段已被广泛应用于动物育种计划中。利用体外发育的牛胚胎已生产出数以万计的后代，但也出现了诸如流产、过重的出生犊牛、难产和新生仔畜死亡率高等问题。在核移植中，这种情况更加明显，只有1％～2％核移植胚胎能够成活。由于这些问题的存在，理解调节启动胚胎发育的细胞生物学过程以降低胚胎操作技术对胚胎     

附植前小鼠胚胎上H-Y抗原表达的研究

用８～１２周龄ＢＡＬＢ／ｃ公鼠采取皮肤移植和脾细胞腹腔注射２种方式免疫同日龄纯系ＢＡＬＢ／ｃ母鼠,制备Ｈ－Ｙ抗血清。经精子微量细胞毒性试验,筛选的抗血清用于胚胎体外培养,以鉴定附植前小鼠胚胎上Ｈ－Ｙ抗原的表达。选用８ｃｅｌｌ－早期囊胚进行体外培养,分别于５～６、１８和２４ｈ观察胚胎发育情况。５～６ｈ后,Ｈ－Ｙ抗血清培养的胚胎退化率高达４０％,且发育迟缓,与自然性比例差异不明显（Ｐ〉０．０５）。正常     

细胞因子在猪胚胎附植期的作用及机制

猪胚胎的附植是通过广泛的细胞运动和重塑发生。胚胎的成功附植主要取决于胚胎延伸和滋养外胚层与子宫内膜上皮紧密连接的成功,这种紧密连接保证了孕体摄取其存活所必需的子宫腺上皮分泌物质。这些过程需要子宫和胚胎来源的细胞因子完成子宫内膜和滋养外胚层之间的细胞重塑,营造胚胎附植时的促炎微环境,维持附植阶段免疫系统的平衡,协调子宫和胚胎之间的相互作用等。本文主要综述了猪胚胎附植时期,由子宫和胚胎来源的细胞因子包括白细胞介素-1β(IL-1β)、干扰素（IFN）、成纤维细胞生长因子（FGF）、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、转化生长因子-β(TGF-β)发挥的作用及其作用机理,以期为胚胎附植及发育调控相关研究提供参考。     

小鼠胚胎附植前后瘦素与脂肪细胞变化的相关性试验

1994年,Zhang Y等[1]首次克隆到肥胖基因(obese gene,Ob),并发现其编码产物为多功能分泌型蛋白质激素-瘦素(leptin).leptin由167个氨基酸构成,在分泌入血的过程中去除21个氨基酸组成的N端信号肽形成功能型瘦素.     

小鼠胚胎成纤维细胞的分离和饲养层细胞的制备

通过实验确定分离小鼠胚胎成纤维细胞的最适胚龄,探讨小鼠胚胎成纤维细胞饲养层的效果及其寿命。结果表明,从１０ 、１１ ｄ 小鼠胚胎所获的胚胎成纤维细胞中混有大量神经母细胞和红细胞;用１４ 、１５ ｄ 的胚胎则基本不能获得胚胎成纤维细胞;消化３ ～４ 个１２ ～１３ ｄ 胚胎所获细胞悬液可接种８～９ 个２５ ｃｍ２ 的培养瓶。从一只孕鼠的所有胚胎所获的成纤维细胞可接种约２０ 个２５ ｃｍ２ 的培养瓶。所获细胞悬液的活细胞百分率可达９０％ ,接种成活率达８５ ％ 。胚胎成纤维细胞贴壁时间为５～６ ｈ ,１２ ｈ 后进入增殖期,４８ ｈ 形成细胞单层。ＥＳ细胞克隆在小鼠胚胎成纤维细胞饲养层上形态典型、增殖迅速、不分化。饲养层寿命可维持２ ～３ 周。     

猪子宫腔液外泌体来源的TIMP2蛋白对胚胎附植的影响

旨在研究猪子宫腔液外泌体来源的TIMP2蛋白对妊娠早期胚胎附植的影响.本研究采用超速离心法分离妊娠第9天(n=3)和第12天(n=3)大白猪子宫腔液外泌体,利用Western blot(WB)检测外泌体中TIMP2蛋白的变化,并通过免疫组化试验研究TIMP2蛋白在子宫中的表达定位.进一步用外泌体与猪胚胎滋养层细胞(po...     

供体细胞和去核卵母细胞的不同预激活对体细胞核移植胚胎体外发育的影响

研究用细胞质内注射法构建重组胚，比较了离子霉素和乙醇预激活供体细胞和去核卵母细胞对重组胚卵裂和体外发育的影响。结果表明：与未经处理的对照组相比，离子霉素预激活供体细胞对重组胚的卵裂率和囊胚发育率有所提高；而供体细胞和去核卵母细胞同时用离子霉素预激活，重组胚的卵裂率无明显提高，囊胚发育率下降；用离子霉素或乙醇预激活去核卵母细胞，对重组胚的卵裂和发育无明显影响。     

山羊早期胚胎发育相关基因的克隆

用单胚构建的mRNA差异显示技术,对体外培养的山羊早期2、4、8～16细胞期胚胎的基因表达进行了研究,并筛选到了1条在8～16细胞期胚胎特异表达的条带进行分析。结果表明,该片段与犬细胞周期蛋白B3（CCNB3）基因具有82%的同源性。该基因作用和调控细胞的分裂活动,是羊早期胚胎发育过程中的重要影响因素。     

牛体外受精早期胚胎发育基因差异表达的研究

应用mRNA差异显示技术,对牛卵母细胞、体外培养的牛早期8细胞期和囊胚期胚胎的基因表达进行了研究。选取4条mRNA表达量存在差异的基因条带进行测序和同源性分析,并利用RT-PCR技术粗略检测其在卵母细胞、8细胞和囊胚中的表达水平。结果表明:4个基因分别与核糖体蛋白S4,Y连接1(RPS4Y1)、末端脱氧核苷酰转移酶作用因子2(DNTTIP2)、剪接和多聚腺苷酸化特异因子3(CPSF3)和转录因子AP-2γ(TFAP2C)高度同源。RPS4Y1、DNTTIP2、CPSF3和TFAP2C在牛卵母细胞和早期胚胎发育过程中mRNA表达量存在时间性差异,可能与其参与不同的生理活动有关。     

间隙连接蛋白Cx43和Cx45在体外受精绵羊早期胚胎中的表达

为了研究间隙连接蛋白Cx43和Cx45在体外受精绵羊胚胎早期发育过程各阶段的表达情况，利用RT—PCR扩增得到绵羊。Cx43（43ku）及Cx45（45ku）基因的mRNA，并进行序列测定。收集绵羊未成熟和成熟卵母细胞以及体外受精早期胚胎各发育阶段的卵裂球细胞，通过RT—PCR半定量检测Cx43和Cx45基因的mRNA表达量；通过免疫组织化学方法结合激光扫描共聚焦显微镜检测Cx43和Cx45蛋白在绵羊体外受精的早期胚胎发育过程中的表达情况及表达区域。结果表明，在绵羊卵母细胞成熟过程以及早期胚胎发育的各个时期，Cx43及Cx45在mRNA水平和蛋白水平均有表达；Cx43、Cx45蛋白主要分布在细胞膜表面，在细胞质和细胞核中表达微弱。研究结果为进一步探索Cx43和Cx45在绵羊早期胚胎发育过程中的作用提供了试验数据。     

Evaluation of bovine viral diarrhea virus uptake by preimplantation embryos

Bovine embryos were exposed to bovine viral diarrhea (BVD) virus in vitro. An uptake of BVD virus by the embryos could not be detected by several assay systems. A significant decrease in the titer of BVD virus was found to occur when the virus was incubated in saline solution + 5% goat serum or minimal essential medium + 5% goat serum for 24 hours at 37 C. Since there was significant inactivation of the BVD virus during the incubation period, lack of viral infectivity of the embryos may have been due to adverse effects of the experimental environmental conditions on the virus or the embryos or upon viral-embryo interaction.     

卵泡抑素对牛胚胎早期发育的影响

利用添加外源性卵泡抑素或抑制卵泡抑素基因表达的方法,以牛受精胚胎为研究对象,结果显示,胚胎阶段适当的添加卵泡抑素,可以加快胚胎发育,不但提高卵裂率,还可以在受精后7d提高囊胚发育率,这其中10μg/L的卵泡抑素为最佳添加量,达到35%的囊胚率。研究还发现,早期阶段沉默卵泡抑素基因,不会影响囊胚率,与处理组无显著差别。结果表明,可能在早期的胚胎发育的最初阶段,卵泡抑素并不是必须的,但如果外源性的添加适量的卵泡抑素可以在正常的基础上提高发育率。     

Expression analysis of an α‐1, 3‐galactosyltransferase,an enzyme that creates xenotransplantation‐related α–Gal epitope,in pig preimplantation embryos

α‐1,3‐Galactosyltransferase (α‐GalT), an enzyme creating Galα1‐3Gal (α‐Gal) epitope on the cell surface in some mammalian species such as pigs, is known to be a key factor that causes hyperacute rejection upon transplantation from pigs to humans. To establish the RNA interference‐based suppression of endogenous α‐GalT messenger RNA (mRNA) synthesis in porcine preimplantation embryos, we determined the suitable embryonic stage at which stage such approach is possible by using the semi‐quantitative RT‐PCR (qRT‐PCR) and the cytochemical method using a fluorescence‐labeled Bandeiraea simplicifolia Isolectin B₄ (BS‐I‐B₄). Staining with BS‐I‐B₄ demonstrated that α‐Gal epitope expression was first recognized at the 8‐cell stage, and increased up to the hatched blastocyst stage. Single embryo‐based qRT‐PCR also confirmed this pattern. These results indicate that creation of α‐Gal epitope is proceeded by de novo synthesis of α‐GalT mRNA in porcine preimplantation embryos with peaking at the blastocyst stage.     

奶牛胚胎冷冻保存技术研究

胚胎冷冻保存是胚胎移植过程中的一个重要技术环节,不仅保存了多余的鲜胚,更有利于随时随地地实施胚胎移植工作。本试验对超排获得的胚胎用分步法和一步法进行冷冻、贮存和移植。用分步法生产可用胚胎25枚,冻存24枚;用一步法生产可用胚胎56枚,冻存53枚。分步法的移植受胎率达到50．00％,略高于一步法的47．17％,但差异不显著（P〉0．05）。一步法在保证移植效果的前提下,具有制作简单、易于标准化生产、应用非常方便的优点。