柑桔黄龙病亚洲种病原的PCR-SSCP分析

应用PCR—SSCP技术对采自我国柑桔主产区、泰国和法国留尼湾等8个不同地方的柑桔黄龙病亚洲种的病原(Candidatus Liberibacter asiaticus)进行研究。对引物P1、P2扩增的PCR产物进行SSCP分析，得到两条清晰且泳动速率一致的条带，表明不同地方柑桔黄龙病亚洲种病原扩增的DNA片段之间没有差异。     

柑桔黄龙病及其防治

柑桔黄龙病是一种世界性的柑桔病害．在南非、印度及东南亚诸国曾称为青果病。该病对柑桔生长危害极大．感病的柑桔品种得病后可在3—5年内丧失结果能力，甚至枯死．若不采取有效措施及时防治，将对柑桔产业造成毁灭性损害。     

湖南省柑桔标准园创建技术模式( 4) 柑桔无病毒工厂化容器育苗技术

(续2012年第7期11页)柑桔病毒类病害,如柑桔衰退病、黄龙病、裂皮病、鳞皮病等对柑桔产业危害很大。柑桔无病毒、工厂化、容器育苗,起点高、要求严,不仅以防控病毒类病害为目标,而且能有效地减少检疫性虫害的发生。无病毒生产苗圃采用容器袋或配方营养土专用苗床,     

怎样选购无病毒柑桔种苗

近年来，危险『生病虫害危害蔓延已成为制约柑桔产业发展的一大障碍，建立无病毒苗圃和果园作为防治柑桔危险性病虫害的一条根本措施显得日趋重要。目前，我省的一些柑桔园单产低、品质差、结果年限短，在很大程度上是因为柑桔黄龙病、溃疡病等细菌性病害以及裂皮病、碎叶病、衰退病等病毒病危害造成的。由于过去对柑桔危险性病虫害危害认识不足，一发现树体感病，往往就以单纯的化学药剂进行防治，这种防治方法不仅不能从根本上解决问题，而且还容易造成对果实的农药污染，不利于无公害绿色果品生产。     

利用PCR检测柑桔黄龙病病原研究

对引起柑桔黄龙病的类菌原体的ＰＣＲ检测方法进行了研究。结果表明，利用ＰＣＲ方法不但能对ＢＬＯ，ＤＮＡ进行离体扩增，而且对各种不同来源的感病植物样品也能很好地进行检测。本首次报道了从未显症的植物上用ＰＣＲ方法检测到了ＢＬＯ，枝接试验证实了该方法的可靠性。     

假劣肥料的使用与柑桔黄龙病的发生

假劣肥料的使用可在多种果树上引起病害。在柑桔上表现是黄龙病．在落叶果树的柿子上表现是黑屁股,在桃李上表现是裂皮病,在梨子上表现是黑杆病,中毒越严重,黑颜色表现越突出,罗汉果表现是泡皮病,香蕉表现是枯萎病,葡萄等不同果树表现的是日灼果、炭疽病、病毒病、粗皮病等。柑桔黄龙病的发生,导致柑桔叶脉黄肿,枝梢变黄,     

快速检测柑桔黄龙病病原的研究

应用ＰＣＲ技术对柑桔黄龙病病原ＤＮＡ进行体外扩增,可建立一套快速,准确,有效的检测该病原的方法,研究结果表明：ＰＣＲ技术对柑桔黄龙病病原的检测具有很强的特异性,只有感染了黄龙病病原的样品,ＰＣＲ才呈阳性反应。文章报道了应用ＰＣＲ技术能检测已带病但尚未症状的柑桔黄龙病病株,该检测技术可以对柑桔黄龙病进行早期诊断,及是地控制带病苗木的传播,这对选育无病苗木及病害的综合治理具有很高的应用价值。     

从长春花粗提柑桔黄龙病病原体

柑桔黄龙病(国际上称为柑桔青果病)的诊断,目前还是主要依靠症状和电镜超薄切片法,前者易引起误诊,后者操作复杂,费时,并且由于在病株中病原细菌(或称类细菌、类立克次氏体等)浓度低,分布不均匀,造成检出率低,故十分需要寻找一种快速可靠的诊断方法,借鉴于植物病毒成功地利用血清学方法作诊断。我们试图也用血清学方法对本病进行早期快速诊断。利用血清学作诊断首先必须解决病原提纯问题,这就是本试验的目的。     

湘南地区柑橘黄龙病的PCR检测

针对近年湘南部分柑橘产区出现叶片黄化、果实畸形及全株矮化、橘树枯死等柑橘黄龙病疑似症状,应用多聚酶链式反应(PCR)技术对湘南8个柑橘产区的柑橘进行了检测,结果发现6个柑橘产区有柑橘黄龙病为害.同时建立了一套快速、准确的柑橘黄龙病PCR检测技术体系.     

Visible-near infrared spectroscopy for detection of Huanglongbing in citrus orchards

This paper evaluates the feasibility of applying visible-near infrared spectroscopy for in-field detection of Huanglongbing (HLB) in citrus orchards. Spectral reflectance data from the wavelength range of 350-2500 nm with 989 spectral features were collected from 100 healthy and 93 HLB-infected citrus trees using a visible-near infrared spectroradiometer. During data preprocessing, the spectral data were normalized and averaged every 25 nm to reduce the spectral features from 989 to 86. Three datasets were generated from the preprocessed raw data: first derivatives, second derivatives, and a combined dataset (generated by integrating preprocessed raw data, first derivatives and second derivatives). The preprocessed datasets were analyzed using principal component analysis (PCA) to further reduce the number of features used as inputs in the classification algorithm. The dataset consisting of principal components were randomized and separated into training and testing datasets such that 75% of the dataset was used for training; while 25% of the dataset was used for testing the classification algorithms. The number of samples in the training and testing datasets was 145 and 48, respectively. The classification algorithms tested were: linear discriminant analysis, quadratic discriminant analysis (QDA), k-nearest neighbor, and soft independent modeling of classification analogies (SIMCA). The reported classification accuracies of the algorithms are an average of three runs. When the second derivatives dataset were analyzed, the QDA-based classification algorithm yielded the highest overall average classification accuracies of about 95%, with HLB-class classification accuracies of about 98%. In the combined dataset, SIMCA-based algorithms resulted in high overall classification accuracies of about 92% with low false negatives (less than 3%).     

中国柑橘黄龙病研究30年

综述了我国自1978年以来有关柑橘黄龙病的研究概况,包括柑橘黄龙病在我国的分布与危害、黄龙病寄主、病原研究、病害诊断与检测、传播途径与病害流行、防控技术等.     

中国柑橘黄龙病研究30年

\t\t\t\t\t目的\t\t\t\t\t柑橘黄龙病(Citrus Huanglongbing,HLB)是由韧皮部杆菌(Candidatus Liberibacter spp.)引发的重要柑橘病害。本试验利用生物信息学方法分析韧皮部杆菌全基因组,推测CLIBASIA_03230基因(命名为Clsp11)编码分泌蛋白,克隆该基因并构建其原核表达载体,表达、纯化Clsp11蛋白,以用于制备特异抗体。\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t方法\t\t\t\t\t利用CTAB法从感染柑橘黄龙病病原的长春花中提取总DNA,以此为模板经PCR扩增Clsp11,并克隆至pMD18-T载体,挑取阳性克隆测序验证;利用无缝克隆技术将Clsp11克隆至原核表达载体pET30a,通过PCR和酶切鉴定筛选阳性克隆,命名为pET30a-Clsp11;转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导,表达N-端融合6×His标签的Clsp11重组蛋白,SDS-PAGE电泳检测,分析目的蛋白的表达水平,并利用镍柱进行纯化。\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t结果\t\t\t\t\tClsp11蛋白成功表达,IPTG诱导5 h表达量显著提高,主要以包涵体形式存在于宿主菌中。\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t结论\t\t\t\t\t本研究克隆了柑橘黄龙病病原Clsp11基因,构建了原核表达载体pET30a-Clsp11,并成功表达、纯化了Clsp11重组蛋白,为进一步制备特异性抗体和研究Clsp11生物学功能奠定了基础。\t\t\t\t\t\t\t\t\t     

柑橘黄龙病菌对沙田柚田间性状和果实品质的影响

【目的】明确柑橘黄龙病菌对沙田柚Citrus maxima (Burm.) Merr. cv. Shatian Yu田间性状和果实品质的影响。【方法】结合田间调查和室内试验系统研究沙田柚感染黄龙病菌后叶片症状、果实内外品质和风味感官品质的变化,及病菌浓度和树龄对病程发展的影响。【结果】沙田柚嫁接病芽后,黄龙病菌浓度保持在较低水平(Ct28)时,植株叶片的黄龙病症状表现不明显,老叶轻微斑驳黄化,新叶轻微均匀黄化,抽梢正常。与健康植株(Ct35)相比,低黄龙病菌浓度(28Ct32)的植株,叶片症状、果实产量和各品质指标均无显著变化;随着发病程度的加深,高黄龙病菌浓度(Ct26)的柚树叶片出现典型斑驳黄化症状,单株柚果总产量和总结果数显著降低,果实变小变轻,着色不均匀,可食率、出汁率、可溶性固形物含量、甜味度、果肉饱满度和综合风味显著下降,酸味度和异味度反而显著提高,失去食用价值。【结论】沙田柚黄龙病病程进展较慢,但随着发病程度加深,其经济价值受到严重影响。本研究可为评价柑橘黄龙病对沙田柚品质的影响提供科学依据,为解析柚类植物的黄龙病耐性机理提供理论支撑。     

柑桔微芽嫁接苗黄龙病的早期检测

柑桔微芽嫁接组织培养试管苗采用微量黄龙病病原DNA提取法,获得的DNA用作PCR检测的模板,可快速检测柑桔黄龙病病毒.为工厂化生产无病毒苗的选育及病害防治提供早期诊断依据.     

日本柑橘黄龙病病原体电镜观察及PCR检测

对日本柑橘黄龙病病原体的形态结构进行了电镜观察,结果发现柑橘黄龙病病菌日本株系绝大多数是球形和短椭圆形,极少观察到棒状形态,直径为100～500nm,外被一层胶状物质包围,厚约10～50nm,这与其他地区发现的柑橘黄龙病病原体形态不同．PCR检测表明,以硅藻土法提取的DNA为模板,利用Ready-To-Go^TM PCR bead法可以得到理想结果。     

柑橘黄龙病灾变原因及避灾减灾主要措施

从柑橘黄龙病传播途径着手,分析黄岩橘区柑橘黄龙病灾变的原因,并针对检疫性有害生物的特点,提出了政府主导、经费保障和宣传培训,以及加强检疫监管、种植无病苗木、抓好三梢期木虱防治、切断毒源和健身栽培等减灾避灾控制措施,实现了柑橘优势产业的可持续生产。     

梅州地区柑橘黄龙病的常规PCR与实时荧光定量PCR检测技术研究与应用

本文利用TaqMan探针实时荧光定量PCR(qPCR)检测技术对梅州地区疑似柑橘黄龙病样品进行检测,并与常规PCR检测进行对比。结果表明,实时荧光定量PCR用于检测柑橘黄龙病菌结果快速、准确、可靠且无污染。采用2种方法对梯度稀释的阳性样本进行检测发现,实时荧光定量PCR的灵敏度较常规PCR更高,能够检出样品中痕量的病原菌。本研究在梅州地区建立了以实时荧光定量PCR方法进行柑橘黄龙病疑似植株的检测,可以为梅州地区提供更准确、更灵敏、快速的黄龙病检测技术。