萝卜遗传转化体系的建立

系统研究了影响根癌农杆菌介导的萝卜(Raphanus sativus L.)遗传转化的若干因素,建立了萝卜遗传转化体系:即切取萝卜带柄子叶外植体,先进行2 d预培养,用OD600为0.3~0.5的EHA105农杆菌菌液侵染5~7 min后,再进行5 d共培养,然后将外植体转接到MS+6-BA 6 mg.L-1+NAA 0.05 mg.L-1+Cef 500 mg.L-1的培养基上进行7 d延迟筛选,再将外植体转接到MS+6-BA 6 mg.L-1+NAA 0.05 mg.L-1+Cef 500 mg.L-1+Hyg 5 mg.L-1的培养基上进行10 d的抗性筛选。结果共获得126个抗性芽,其中8个抗性芽经PCR检测扩增出目的基因的启动子BcA9,约850bp,阳性率为6.3%,初步验证目的基因已经转入萝卜再生芽中。     

醉蝶花离体培养植株再生研究

 诱导醉蝶花下胚轴和子叶形成愈伤组织, 以MS + 6-BA 0.5 mg/L + NAA 0.5 mg/L + KT 0.5 mg/L培养基中子叶的出愈率最高, 达到100 % , 下胚轴出愈率最高只有93 %。MS + 6-BA 2 mg/L + NAA 0.05 mg/L最适合于芽的诱导, 诱导率达到100 %。再生苗在MS + NAA 0.1 mg/L 培养基中生根完成植株再生。带单个侧芽的茎作为外植体接种在MS + 6-BA 1 mg/L + NAA 0.05 mg/L 培养基中, 一个月以后形成无数丛生芽。     

西番莲脱分化再生体系研究

以大果黄果西番莲为材料,通过无菌播种获得无菌苗,采用无菌苗的子叶及下胚轴为外植体,对诱导分化不定芽、不定芽继代增殖、生根诱导等斱面进行研究,为西番莲组织培养和遗传转化研究提供基础。结果表明:以未完全展开的子叶为外植体,诱导不定芽分化的效果最好,最适宜的分化培养基为MS+2.0mg/L6-BA+0.1 mg/L IAA,其诱导分化率可达100.0%;最适宜的增殖培养基为MS+1.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA,其芽苗增殖系数最高,为3.19,且芽苗长势好;最适宜的生根培养基为1/2MS+0.5 mg/L NAA+0.2 mg/L IBA,其生根率达100.0%,根粗壮、长、多,且幼苗长势好。     

苦瓜子叶离体再生体系的建立

以“圣香”苦瓜、“玉华”苦瓜的子叶为外植体进行离体培养植株再生研究.结果表明:2个苦瓜品种的子叶在不同的培养基上都较易形成愈伤组织,愈伤组织诱导率都达到80％以上.培养基MS+TDZ 0.05 mg/L+-NAA 0.02 mg/L适合“圣香”苦瓜子叶不定芽分化,分化率为68.4％;培养基MS+-TDZ 0.03 mg/L+-NAA 0.02 mg/L适合“玉华”苦瓜子叶不定芽分化,分化率为67.8％.“圣香”苦瓜在培养基上MS+ZT 0.3 mg/L+NAA 0.01 mg/L上丛生芽诱导效果好,增殖率达6.5;“玉华”苦瓜丛生芽诱导的最佳培养基为MS+TDZ 0.02 mg/L+NAA0.01 mg/L,增殖率达6.6.生根诱导以1/2MS+NAA 0.05 mg/L培养基诱导率最高,“圣香”苦瓜生根率为90.7％,“玉华”苦瓜生根率达91.9％.     

辣椒离体培养及再生体系的研究

以"韩国甜椒"为试材,研究外植体种类、苗龄、基本培养基种类、激素组合等多种因素对辣椒组织再生的影响。结果表明:带柄子叶再生能力较子叶和下胚轴切段强,14d苗龄幼苗的外植体芽分化率较高,最佳芽分化培养基为MB+4.5mg/L BA+0.5mg/L IAA+4mg/L AgNO3+200mg/L Cef,最佳芽伸长培养基为MS+3mg/L BA+0.3mg/L IAA+2mg/L GA3+4mg/L AgNO3+200mg/L Cef,生根培养基先用1/2MS+0.4mg/L NAA+4mg/L AgNO3,继代用1/2MS+0.4mg/L NAA+0.2%活性炭。     

桂花子叶切块培养再生苗的研究

以桂花品种大花金桂(Osmanthus fragrans‘Dahuajingui’)的子叶切块为外植体,研究了不同激素水平对桂花子叶切块愈伤组织诱导、芽分化和试管苗生根的影响。结果表明:诱导出的愈伤组织在分化培养基(1/2MS+0.5mg/L TDZ+0.1mg/L NAA)上继代培养9次后分化不定芽,不定芽分化率为22.86%,平均再生苗数为3.22,继代培养10次后,不定芽分化率高达36%。进行生根试验,确定桂花最佳生根培养基为1/2MS+0.5mg/L IBA+2.0mg/L NAA,生根率达到70%。     

西瓜高效离体培养再生植株的研究

以"荣誉4010"西瓜为试材,研究了不同外植体类型、激素配比和苗龄对西瓜植株再生频率的影响。结果表明:以MS+BA 4.0mg/L+NAA 0.1mg/L为培养基,3d苗龄的子叶为外植体不定芽诱导率达96.7%,最佳生根培养基为1/2MS+IBA 0.4mg/L,生根率可达100.0%。     

菊苣子叶离体培养与植株再生的研究

以菊苣无菌苗的子叶为外植体,研究其在附加不同浓度NAA和6-BA的培养基上的分化情况.结果表明:在不同培养基上,菊苣子叶均能诱导出淡黄色的愈伤组织和分化形成不定芽,但不同基因型菊苣的出愈率和不定芽诱导存在明显差别.诱导Rossa di Verona tardiva selez prelude和Rossa di treviso菊苣愈伤组织形成和芽分化的最佳培养基为MS+NAA 0.5 mg/L+6-BA 2 mg/L;而诱导In miscuglio菊苣愈伤组织和芽分化的最佳培养基为MS+NAA 0.5 mg/L+6-BA 3 mg/L.     

两个花椰菜品种再生体系的研究

以2个花椰菜品种的子叶和上胚轴为外植体,以MS为基本培养基,设置不同激素浓度,建立再生体系。结果表明:子叶作为外植体时不定芽分化率低,子叶大部分发生黄化。上胚轴作为外植体不定芽分化率较高,在适合的培养基上均能达到100%,‘祁连白雪’上胚轴最佳诱导培养基为MS+6-BA 1.0 mg/L+IAA 0.5 mg/L,‘新东海明珠80天’的最佳诱导培养基为MS+6-BA 1.5 mg/L+IAA0.5 mg/L。分化后得到的不定芽在MS+6-BA 0.5 mg/L培养基上伸长后,在MS+IAA 0.5 mg/L的培养基上生根,生根率达100%,移植成活率95%。     

天津野生白刺再生体系的建立

以天津野生白刺为材料,通过不同激素、不同外植体、不同含量的MS培养基和赤霉素的筛选试验建立了白刺再生体系。结果表明:以初春时节白刺幼嫩茎段为外植体建立无菌系,以破坏生长点的茎尖为外植体进行再生;最适芽增殖培养基为MS+BA 3.0 mg/L+NAA 0.4 mg/L,最适增粗培养基为1/2MS+BA 1.0 mg/L+0.2 mg/L IAA,最适芽再生培养基是MS+BA 3.0 mg/L+NAA 0.4 mg/L+GA 3.0 mg/L,再生率为94%。最适伸长培养基为MS+BA 1.0 mg/L+IAA0.3 mg/L,最适生根培养基为1/2MS+IBA 0.5 mg/L。     

小西葫芦黄花叶病毒外壳蛋白基因导入西瓜的遗传转化

研究了西瓜品种ZKM的再生体系和农杆菌介导小西葫芦黄花叶病毒(Zucchini yellowmosaic virus,ZYMV)的外壳蛋白(cp)基因导入西瓜的遗传转化体系。结果表明,质量分数0.6%琼脂是适宜种子萌发的基本培养基,切取5d龄的西瓜无菌苗子叶为外植体,接种在MS+BA2.0mg/L诱导培养基上,诱导不定芽效率最高。选用75mg/L卡那霉素筛选西瓜抗性芽较为合适,外植体经预培养2～3d,菌液浓度以OD600nm值为0.4,共侵染10min有利于提高西瓜转化的效率。经PCR检测,ZYMVcp基因已经导入西瓜植株,转化频率为0.15%。     

Adventitious shoot regeneration and Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation of leaf explants of sweet cherry (Prunus avium L.)

Sweet cherry (Prunus avium L.) remains recalcitrant for genetic transformation due to the lack of efficient plant regeneration systems via organogenesis or somatic embryogenesis. In this study, in vitro shoot cultures were derived from a single mature embryo (open pollinated) of ‘Selah’ sweet cherry. Leaf explants were cultured on Woody Plant Medium supplemented with different plant growth regulators to induce shoot regeneration. The optimal regeneration at a frequency of 32.5% and an average of 1.1 shoots per explant occurred on the medium containing 4.54 µM thidiazuron (TDZ) and 2.95 µM indole-3-butyric acid (IBA). Transient transformation showed an efficient delivery of the β-glucuronidase (GUS) reporter gene (gusA) using Agrobacterium tumefaciens strain EHA105. Under the optimal gene delivery conditions, stable transformations were conducted using pGA643 and pBI-VcFT containing a blueberry FLOWERING LOCUS T (VcFT). A total of 500 leaf explants, 250 for each construct, were used for transformation. After 10-week selection, three leaf explants transformed with the pGA643 produced four kanamycin-resistant shoots, in which stable integration and expression of the nptII were confirmed by Southern blot and RT-PCR analysis, respectively. This study demonstrated that it was possible to produce stable transgenic sweet cherry using Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation of leaf explants.     

草莓主栽品种再生和转化的研究

 建立草莓主栽品种高效、稳定的离体再生体系和遗传转化体系, 获得了转基因植株。‘弗吉尼亚’和‘森嘎拉’的叶片离体再生芽频率达到100 %。试管苗叶片与农杆菌菌株EHA105 共培养3 d。共培养后的叶片在附加卡那霉素40 mg/L 的再生培养基上选择培养4周后, 外植体再生出转化芽, 弗吉尼亚的转化芽再生频率可达6. 8 %。采用组织化学染色法对随机选取的10 个GUS 基因转化植株进行基因表达测定, 结果5 个植株强烈表达GUS 活性。转bar 基因植株在附加除草剂草丁膦10 mg/L 的培养基上能够正常分化, 在田间对草丁膦表现出强烈抗性。转基因植株开花、结果正常。     

提高苹果基因转化效率的研究

采用根瘤农杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）强株系ＥＨＡ１０５（ｐ３５ｓＧＵＳ－ｉｎｔｒｏｎ）研究了影响‘皇家嘎拉’苹果（Ｍａｉｎｓ ｄｏｍｅｓｔｉｃａ Ｂｏｒｋｈ．）外植体的β-葡萄糖醛酸酶（ＧＵＳ）基因的瞬时、稳定表达水平和转基因植株的再生。证明在培养基生长素（ＩＢＡ、ＮＡＡ）存在的条件下,外植体的ＧＵＳ基因的瞬时表达水平提高了３－４倍,而共培养两周后稳定表达水平提高２倍以上,产生９．８个ＧＵＳ愈伤组织表达区域。白化处理促进外植体的基因转化,白化处理的新梢顶端第一节间外植体ＧＵＳ表达区域比常用的叶片外植体高４倍。在生长素存在的条件下 ２％外植体获得了转基因植株。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ　ＢｌｏｔＤＮＡ杂交和组织化学染色分析证明ＧＵＳ基因已整合到苹果的染色体上,并得以表达。     

超声波辅助农杆菌介导八棱海棠转rolC基因

应用超声波辅助农杆菌介导法,对八棱海棠进行rolC基因转化,以期提高转化效率并获得转基因植株。利用gus基因瞬间表达的方法研究了超声波处理时间、处理时期和农杆菌悬浮液中乙酰丁香酮(As)浓度对rolC基因转化率的影响。结果表明,叶盘在D600nm为0．6且含有75 mg／L As的农杆菌悬浮液中侵染2 min后,用功率为100 W的超声波处理30 s,再浸泡2．5 min,然后放到再生培养基上共培养3 d,能获得最佳的gus基因瞬间表达率。最佳处理条件下转化683枚八棱海棠叶片,共得到138个抗性愈伤组织和15株抗性苗,转化率为2．2％。GUS染色、PCR及Southern blotting检测结果显示,有12个八棱海棠株系的基因组中整合了完整的外源rolC基因。     

黑莓试管苗叶片植株的再生

以黑莓带芽茎段试管苗叶片为外植体,诱导形成不定芽并进一步形成再生植株。在MS+TDZ2.0mg/L的培养基中叶片不定芽最高分化频率达93.7%(6.52不定芽/外植体),在不定芽伸长培养基BA0.5mg/L上,分化完全的不定芽能够长大伸长,当其高度达到4cm时,切下转接于IBA为0.3mg/L培养基上诱导生根,生根率100%。     

‘艾西丝’南瓜子叶的离体培养

用‘艾西丝’南瓜子叶作外植体离体培养,成功地建立了一套子叶高频率诱导再生芽的程序。在ＭＳ＋ＢＡ ４．０ｍｇ／Ｌ＋ＩＡＡ０．４ｍｇ／Ｌ的培养基上,以４ｄ苗龄子叶基部切块为外植体,其不定芽的诱导率最高,达５０％,在ＭＳ＋ＢＡ０．２５－０．５ｍｇ／Ｌ的培养基上继代,增殖培养效果较好,在无激素的１／２ＭＳ培养基上最易生根。     

红龙草叶片的组织培养及其植株再生

 建立了红龙草叶片再生体系。叶片外植体在培养基MS + 6-BA 1.0 mg/L + 4-PU 1.0 mg/L +NAA 0.1 mg/L上形成浅绿色愈伤组织, 20 d后愈伤组织诱导率达100%。约45.31%的愈伤组织在添加6-BA 1.0 mg/L和NAA 0.4 mg/L的MS培养基上分化出紫红色的不定芽, 约6%的愈伤组织在该培养基上产生出细小叶片和绿色变异幼芽。所产生的紫红色不定芽在1/2MS +NAA 0.4 mg/L的培养基上可全部生根,长成完整植株。再生植株的移栽成活率达85%以上。     

莫利甜樱桃试管快繁技术研究

利用莫利甜樱桃的茎段做外植体进行试管快繁 ,适宜的增殖培养基为MS BA 0 .8mg/L IAA0 .2mg/L ,生根培养基为 1 / 2MS NAA 0 .5mg/L ,增殖系数可达 1 0倍左右 ,生根率达 92 .5 % ,选 5片以上有效叶的健壮苗移入蛭石基质 ,移栽成活率可达 95 %以上。     

根癌农杆菌介导的韭菜基因转化体系的建立

 以GUS 基因为报告基因, 建立了农杆菌介导的韭菜基因转化体系。研究结果表明, 以预培养4～6 d 的根尖为转化受体, 用OD₆₀₀0. 6 ～0. 8 的LBA4404 浸染2～5 min , 共培养2 d , 然后在MS + NAA1 mg/L + BA 2 mg/L + Km 25 mg/L + Timentin 400 mg/L + As 100 mg/L 培养基上培养40 d , 后有愈伤组织产生,转入光下培养20 d 后有少量绿色不定芽产生。经X-Gluc 染色、PCR 分析和Southern blot 检验, GUS 基因已经整合到韭菜基因组染色体上。